ε-聚赖氨酸生产菌白色链霉菌UN2-71生理特性及其发酵条件优化

以实验室保藏的高产ε-聚赖氨酸白色链霉菌UN2-71为生产菌株,研究其生理生化特性,以此指导新的ε-聚赖氨酸产生菌筛选;同时通过对发酵培养基以及摇瓶发酵条件的优化,最终确定白色链霉菌UN2-71的最佳摇瓶装液量30mL、最佳接种量10％、最佳发酵温度30℃、菌丝生长的最佳摇床转速150r/min、最适起始发酵pH值为7.0.经优化后,白色链霉菌UN2-71的ε-聚赖氨酸产量提高至2.37g/L,较优化之前的产量1.64g/L提高了44.5％.     

Quantification of potato common scab pathogens in soil by quantitative competitive PCR with fluorescent quenching‐based probes

Common scab of potato tubers caused by pathogenic Streptomyces spp. is a cause of serious economic loss worldwide. For the rapid and accurate quantification of pathogenic Streptomyces spp. residing in soil, a new competitive real‐time PCR method using fluorescent quenching‐based probes (quantitative competitive quenching probe PCR: QCQP‐PCR) was developed. The virulence gene of pathogenic Streptomyces spp., nec1, was selected as the target for QCQP‐PCR. A specific primer set to amplify the nec1 gene, and a fluorescently labelled probe that specifically hybridizes with the nec1 amplicon were designed. For QCQP‐PCR, an internal standard DNA (IS DNA) that is identical to the nec1 amplicon but has a 4‐base mismatch in the probe‐hybridizing region, and a fluorescently labelled probe IS, which specifically hybridizes with IS DNA at the mutagenized region, were PCR‐synthesized. The target nec1 gene was co‐amplified with the known copy number of IS DNA by PCR using the same primer set in the presence of the specific probes. The PCR products were monitored in real‐time by measuring the fluorescence intensity (quenching) of each probe. The initial amount of the nec1 gene was quantified based on the ratio of the PCR products of the same PCR cycle. The results revealed that QCQP‐PCR could be used to precisely quantify the nec1 gene, even in the presence of PCR inhibitors in the soil samples examined. The lower limit of quantification was 20 copies per tube, which corresponded to 1500 copies per g dry soil. The quantification achieved by this method was completed within 5 h, i.e. the duration of the entire analysis. These results demonstrate the usefulness of the present method for monitoring pathogenic Streptomyces species in soil.     

藤黄灰链霉菌ECO 00001菌株中寡霉素A和C的分离鉴定及其活性

运用生物活性追踪和色谱分离方法,从藤黄灰链霉菌ECO 00001菌丝体丙酮粗提物中分离得到两个活性化合物.经波谱分析,鉴定为大环内酯类抗生素寡霉素C和A.采用孢子萌发抑制法和菌丝生长抑制法测定寡霉素C和A对5种植物病原真菌的离体抗菌活性.当寡霉素C和A的浓度分别为15 μg/mL和5 μg/mL时,对百合灰霉病菌、百合炭疽病菌、烟草赤星病菌、稻瘟病菌及水稻恶苗病菌的孢子萌发抑制率均为100%;当浓度分别为100 μg/mL和50 μg/mL时,对上述5种病原真菌的抑菌圈直径均在10mm以上,化合物Ⅱ对5个供试植物病原真菌的抑制活性强于化合物Ⅰ.     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取、大孔吸附树脂吸附、硅胶层析和制备型高效液相色谱（HPLC）等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH 2.0～10.0、100℃和紫外照射24 h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供理论依据。     

两株根肿病生防放线菌的鉴定及其防病效果

 ：【目的】鉴定从白菜根际土壤及红豆树根部分离得到的抑制根肿病菌休眠孢子萌发的生防菌株A316和A10,并探明其防病潜能,对根肿病进行有效的生物防治。【方法】根据菌株A316和A10的形态与培养特征、生理生化特性、16S rDNA序列对其进行鉴定;评价菌株A316和A10在室内盆栽及大田小区试验中对白菜根肿病的防治效果。【结果】菌株A316与链霉菌中的灰红链霉菌（Streptomyces griseoruber） NBRC 12873亲缘关系最近,同源性达99.9%,且形态与培养特征、生理生化特性与灰红链霉菌相符。菌株A10与GenBank数据库中多个相似性序列的亲缘关系都较近,鉴于其形态与培养特征、生理生化特性,只能归于链霉菌中的灰褐类群。菌株A316、A10对白菜根肿病的室内盆栽防效分别为72.8%、67.2%,而大田小区试验中防效依次达68.5%、56.7%,且可分别使白菜单位面积产量增加96.1%、64.9%。【结论】菌株A316鉴定为灰红链霉菌;菌株A10归于链霉菌中的灰褐类群（S. sp.）。菌株A316和A10对芸苔根肿菌显示出极好的生防潜能,A316的防效好于A10。     

链霉菌JXJ402抗稻瘟病菌的活性成分

从庐山土样中分离获得1株链霉菌(Streptomyces),其固体发酵粗提物含有多种活性成分,在离体条件下对稻瘟病菌具有很强的抑制作用.分析结果显示:脂溶性成分浓度为 1.000 μg/ml 时即能完全抑制稻瘟病菌孢子萌发,浓度为0.100～0.001 μg/ml时使孢子萌发时间延长,并使芽管萌发畸形;水溶性成分较脂溶性成分活性低,且不影响稻瘟病菌菌丝形态.100 ℃处理4 h,脂溶性成分活性降低27.5%,水溶性成分的活性对温度处理较稳定.紫外线254 nm下处理4 h,脂溶性和水溶性成分活性都较稳定;脂溶性成分在pH 6时活性最强,水溶性成分的活性受pH值的影响较小.     

链霉菌对小麦秸秆堆肥中微生物群落和酶活性的影响

【目的】研究链霉菌(Streptomyces thermovulgaris)在农业废弃物资源化利用中的作用及其生物学机理。【方法】以含水量为60%~65%的小麦秸秆段为原料,按菌料质量比1∶120接种链霉菌菌剂,以不接种链霉菌组为对照,采用稀释涂布平板法、BIOLOG法和分光光度法研究链霉菌对小麦秸秆堆肥体系中微生物群落结构及酶活性的影响。【结果】在整个堆肥过程中,接种(+M)和不接种(-M)处理的细菌和放线菌数量均呈现高-低-高的变化趋势,真菌数量呈降低的趋势。接种链霉菌菌剂,改变了堆体中细菌群落结构组成,堆体细菌总代谢活性(AWCD)和细菌群落多样性均增加。主成分分析结果显示,在整个堆肥过程,不接菌处理堆体细菌群落结构典型变量值的变异很小,而接菌处理的变异较大。整个堆肥过程,接菌处理的蔗糖酶活性比不接菌处理高50.07%,蛋白酶活性高21.63%。【结论】接种链霉菌菌剂能够提高堆体细菌数量,提高堆体蔗糖酶和蛋白酶活性,但接种处理堆体中细菌群落稳定性低于不接菌处理。     

抗生素产生菌Streptomyces albogriseus发酵液的抗菌谱及稳定性测定

从海南土壤中筛选的一株链霉菌菌株.经鉴定为Streptomyces albogriseus[1],编号JFA-001.采用抑制菌丝生长速率法测定JFA-001菌株发酵液对15种病原真菌的抑菌活性,其中对多数供试真菌的抑制率达80%以上.对JFA-001菌株发酵液的稳定性测定结果表明,菌株传接6代时,活性稳定,从第7代开始其活性缓慢降低,第15代的抑菌圈直径比出发菌株仅减少了1.9mm;发酵液对热和碱的稳定性强,加热到80℃时未丧失活性,在pH10.0的溶液中活性几乎不丧失,但对酸的稳定性较差.     

菌株Streptomyces S_(96)发酵液的抑菌谱及其稳定性

对菌株Streptomyces S96发酵液的抑菌谱及其稳定性进行了测定.结果表明,其发酵液具有广谱抑菌作用,其中对烟草赤星病菌和水稻恶苗病菌抑制作用尤为突出,抑菌圈直径达到60mm以上,对其他供试病原菌的抑菌圈直径为26 mm以上;菌株S96发酵液对温度、光照、耐储藏性等方面表现稳定;在pH值1～10范围内,50～120℃处理60 min,其发酵液抑菌圈直径变化不大,说明该发酵液在酸性和碱性条件下均很稳定.     

两种外源二型硫酯酶TEII对链霉菌NRRL8165产生阿维菌素的影响

利用接合转移的方法将不同来源的二型硫酯酶(TEII,type II thioesterase)导入链霉菌S.avermitilis NRRL8165中构建了两种突变株,同时研究比较了两种突变株与野生型在等量发酵时阿维菌素产量的变化。结果表明:导入Tetrocarcin A的TEII突变株阿维菌素的产量提高了96.52%;导入氯丝菌素(Chlorothricin)的TEII突变株阿维菌素的产量提高了38.06%。进一步验证了TEII对聚酮类次级代谢产物的生物合成具有编辑和纠错功能。