RNA干涉及其抗病毒应用研究进展

综述RNAi的机制,植物与病毒相互作用的机制,及RNAi在植物抗病毒育种中的应用研究进展,并展望其研究前景。     

甘薯羽状斑驳病毒海南分离物全基因组序列克隆及分析

为了明确海南本地甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)种群的遗传进化关系及致病机理,本研究利用Small RNA测序技术对采自海南的甘薯样品进行鉴定,获得与SPFMV序列具有相似性的85个contigs,与NC_001841相似性较高。试验设计了5对共8条引物,分别为SPFMV-1F/1R、SPFMV-11F/1R、SPFMV-2F/2R、SPFMV-3F/3R和SPFMV-3F/33R PCR,扩增获得3987 bp、3710 bp、1996 bp、3369 bp和4730 bp目的片段。在此基础上再分段设计引物,进行基因全序列PCR扩增,序列拼接获得SPFMV-HN基因组全序列,其包含完整编码阅读框。本研究结果首次报道SPFMV海南分离物基因组全长,并且在P1区预测到另一个外框元件(pretty interesting sweet potato potyviral ORF,PISPO),聚合酶滑移机制可以产生带有额外核苷酸的转录变体,这些核苷酸可以翻译为P1N-PISPO和P3N-PIPO。本研究结果为进一步探究SPFMV致病分子机理和培育抗病甘薯品种奠定研究基础。     

猪皮肤病的发生原因及诊治

1病因分析传染病损害，如猪瘟、猪丹毒、放线杆菌病、坏死杆菌病等。寄生虫性损害，如皮肤疥螨、吸血昆虫叮咬（蚊、蝇、虱）等。变态反应性损害，如猪湿疹、荨麻疹、饲料疹、药物疹等。炎症性损害，如皮炎、渗出性表皮炎等。神经性损害，如皮肤瘙痒病等。增殖性损害，如厚皮病、角化症、皮肤性肿瘤等。锌缺乏时，含锌酶的活性降低，部分氨基酸（蛋氨酸、胱氨酸和赖氨酸）的代谢扰乱DNA、RNA合成，从而导致一系列病理变化。缺锌地区含锌量低下，在其土地上生长的饲草的含锌量也相应的低下，不能满足动物的营养需要，故极易引起动物发病。     

禽流感的防治措施

禽流感病毒属甲型流感病毒,流感病毒属于RNA病毒的正黏病毒科。依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性的不同,目前可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1～N9）,其各亚型之间的交叉免疫保护性较弱,没有1种疫苗能够预防所有亚型的感染发病。     

2种微藻总RNA提取方法的比较

以微茫藻和莱茵衣藻为材料，比较Trizol试剂法和SDS-LiCl沉淀法提取2种微藻总RNA的效果，以期筛选出适合微藻RNA的提取方法。结果表明，SDS-LiCl沉淀法能从微茫藻中提取高质量的RNA，而Trizol法和SDS-LiCl沉淀法均能从莱茵衣藻中获得高质量的RNA，但Trizol法更为简单有效。RT-PCR结果表明，SDS-LiCl沉淀法提取的微茫藻总RNA和Trizol法提取的莱茵衣藻总RNA都能直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。     

猪口蹄疫如何防治

1.发病原因口蹄疫的病原为口蹄疫病毒，属于微RNA病毒。本病毒具有多型性和变异性，现已知有7个血清型（A、O、C、南非1、南非2、南非3、亚洲1），80多个亚型，亚型内又有众多抗原差异显著的毒株，而且每年还会有新的亚型出现。各型之间抗原性不同，相互之间无交叉免疫性。病毒的这些特殊性给该病的检疫、防疫带来了很大的困难。     

松材线虫乙酰胆碱酯酶1基因沉默及蛋白抑制剂

[目的]为提高苦参碱的杀虫效果,对松材线虫的药剂防治靶标乙酰胆碱酯酶1基因(BxACE1)进行研究.[方法]松材线虫采集自广东省内马尾松,贝曼漏斗法分离,灰葡萄孢菌苔上25℃避光培养扩繁线虫.克隆BxACE1基因全长并进行序列分析,通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断该基因功能,研究苦参碱的杀虫效果,并应用Q-PCR技术鉴定RNAi效果.[结果]5′和3′序列拼接得到基因全长2 145 bp,命名为BxACE1.同源序列多序列比对表明线虫ACE的进化速度与线虫进化速度一致.蛋白质三维结构分析表明,BxACE1由14个α螺旋包围着13个β折叠,鉴于氢键数量越多结合越稳定,利用docking技术筛选出石杉碱甲是松材线虫乙酰胆碱酯酶1蛋白的较佳抑制剂.RNAi明显增加了苦参碱的杀虫效果,石杉碱甲本身对线虫毒性较小,共同施用RNAi和石杉碱甲对线虫毒性仍然较小,但RNAi处理组线虫与Inhibitor(0.03％苦参碱+1μmol· L-1石杉碱甲处理线虫)处理组线虫在24,48及72h存活率差异不显著,表明石杉碱甲处理线虫和BxA CE1基因RNAi处理效果相近.[结论与其他]通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断BxACE1功能均可以提高苦参碱的杀虫效果,RNAi技术能够简单易行地证明若阻断BxACE1功能可以提苦参碱的杀虫效果,但dsRNA容易降解等因素限制了该技术在生产实践中的广泛应用.石杉碱甲可以与BxACE1稳定结合,鉴定表明石杉碱甲可以提高苦参碱的杀虫效果,具有生防药剂辅剂的开发潜力,可替代基因沉默技术实现抑制BxACE1的目的.因此,通过乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲可阻断BxACE1的功能,进而达到提高苦参碱等植物源药剂杀虫效果的目的.ACEIs通过抑制线虫体内的乙酰胆碱酯酶的活性,使线虫体内的胆碱水平短时间内大量提高,从而导致其中毒死亡.该类具有代表性的杀虫剂是有机磷类化合物和氨基甲酸酯类化合物,大多为非可逆型ACEIs.石杉碱甲是来源于石杉科植物蛇足石杉的一种半萜生物碱,是一种高效、高选择性、可逆性的ACEIs.本研究将石杉碱甲引入松材线虫研究,是对该植物源药剂的一个新尝试.     

T7噬菌体展示系统的可行性分析

构建了T7噬菌体展示系统,通过该系统对一种细胞核中的小RNA(U1 sn RNA)与其相互作用的蛋白进行了分析。结果表明,在通过6轮噬菌体展示循环后,经PCR分析检测到与U1 sn RNA相互作用的阳性噬菌体得到了很明显的扩增。该系统的建立为进一步研究分析其他候选RNA的功能奠定了基础。     

单增李氏杆菌中反义RNA介导基因调控的研究进展

单增李氏杆菌是一种人畜共患的革兰氏阳性细菌。该细菌作为实验模型在研究细菌适应性免疫和毒力因子等方面取得诸多成就。最近,应用新技术在单增李氏杆菌的基因组中已发现数百个非编码RNA(ncRNAs),揭示了其复杂的转录机制。反义RNA是目的基因互补链的非编码RNA序列。本文,对反义RNA在单增李氏杆菌中的作用机制和功能进行简要综述,这有助于更深层次的理解RNA介导的基因调控,为诊断技术及抗菌药的研发提供方向。