铜耐性优势植物根际土壤铜抗性菌株的筛选及其对铜的促溶作用

从铜矿废弃地重金属耐性优势植物根际土壤中分离筛选到两株抗高浓度Cu的细菌菌株HQN2和JYC17.对菌株HQN2和JYC17溶解难溶性Cu的作用进行了研究.结果表明:菌株HQN2和JYC17具有明显的溶解碳酸铜的能力,与接灭活菌对照相比,菌株HQN2和JYC17分别使培养液中水溶性Cu含量增加306%和136%,培养液的pH由初始的7.00分别降低到4.08和4.46.另外,Cu能促进供试菌株有机酸(葡萄糖酸、苹果酸和乙酸等)的合成.菌株HQN2和JYC17对土壤中难溶性Cu亦有明显的促溶作用.与接灭活菌对照相比,菌株JYC17和HQN2分别使土壤中交换态Cu含量增加110%和270%.经生理生化特征分析及16S rDNA序列分析,菌株HQN2和JYC17分别被鉴定为节杆菌属(Arthrobacter sp.)和微杆菌属(Microbacterium sp.).     

禾长蠕孢菌的紫外诱变改良和除草活性评价

为进一步提高稗草生防潜力菌禾长蠕孢菌(Helminthosporium gramineum Rabenh f.sp.echinochloae,HGE)的杀草活性,采用紫外诱变的方法对该菌种进行改良,经筛选获得1株适合液体发酵的突变菌株M1。与出发菌株HGE菌落墨绿色相比,突变株M1菌落呈灰白色至白色,表现出明显差异,并且M1生长速度快,其发酵液对稗草(Echinochloa crusgalli(L.)Beauv)根芽的抑制效果均优于出发菌株HGE。连续7次传代培养发现M1仍具有良好的遗传稳定性。采用RAPD-PCR方法对出发菌株和突变菌株M1同时进行PCR扩增,结果表明,突变菌株的遗传物质已经发生了改变。同时对其液体发酵工艺进行了研究,初步确定了最佳发酵工艺。所用培养基马铃薯200gL,葡萄糖30gL,麸皮20gL,酵母膏1gL,KH2PO42gL,MgSO4·7H2O1gL,初始pH7,发酵温度24℃和150rmin振荡培养6d的发酵方案,突变菌株M1菌丝体产量最高,达14.37gL。液体培养获得毒素的最佳发酵工艺为培养基蔗糖30gL,(NH4))2C4H4O65gL,NH4NO31gL,酵母膏1gL,KH2PO41gL,MgSO4·7H2O0.5gL,NaCl0.1gL,CaCl20.1gL,水解酪蛋白0.5gL;初始pH7.25,发酵温度为24℃和静置培养14d。     

氯化钻处理微藻的生物学效应初报

在塔胞藻培养液中加入不同浓度的CoCl2（0、2、4、6、8、10、12mg／L），然后分析了氯化钴处理塔胞藻的生物学效应。结果发现，当培养液中钴离子浓度较低时，塔胞藻被处理后的生物学效应明显优于对照。当钴离子浓度达到一定值（6mg/L）时，则随着钴离子浓度的升高，细胞的生长繁殖在前2轮（9d为一轮）培养中均明显降低；细胞内的蛋白质、叶绿素含量也均明显下降，而可溶性糖的含量与对照相比变化不大．继续培养．塔胞藻细胞的生长繁殖及细胞内含物含量接近正常值。     

放线菌Ⅲ-61和A-21对蔬菜枯萎病和灰霉病的控制作用

为了明确拈抗性放线菌Ⅲ-61和A-21在植物病害生物防治中的实用价值,并为其后续的生防制剂的研发提供科学依据,对其在蔬菜枯萎病和灰霉病上的抗病活性进行了研究。其活菌体的抑菌活性检测采用平板对峙法;菌体代谢物的活性测定利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备无菌发酵液,然后用滤纸片扩散法测定抑菌圈,用生长速率法测定对菌落扩展的抑制,用稀释药液凹玻片静置培养法测定对孢子萌发的抑制;温室防病试验采用盆栽接种法。结果显示,两菌株的平板菌落对黄瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌的抑菌带宽达17．5—20．9mm;27℃,120r／min摇瓶培养6d的发酵液抑菌效果最好。其稀释倍数≤5的无菌滤液处理后经120h对病原菌菌丝生长的抑制率仍达76．5％-100％。对分生孢子萌发的抑制率为100％;100倍稀释液对孢子萌发后的芽管具有致畸作用,使其顶端膨大或呈粗栉齿状而不再继续伸长;平板对峙培养中受抑病原菌菌落边缘的菌丝细胞壁崩解,原生质体外泄,表现出溶菌现象;其4倍稀释液对黄瓜枯萎病的温室盆栽防效分别为65．15％和60．61％,对番茄和辣椒灰霉病的防效为62．49％-89．76％。此研究结果表明这2个菌株具有很好的开发应用前景。     

芽孢杆菌HSY-8-1对植物病原真菌的抑制及其抑菌产物特性

为挖掘用于生物防治的微生物资源,自海南蚕豆枯萎病区土壤分离1株芽孢杆菌HSY-8-1,经抗菌试验分析表明,其代谢产生的拮抗物质对引发植物立枯病和根腐病的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和镰刀菌(Fusariumspp.)抑菌作用较强,具有使病菌菌丝扭曲、缢缩等致畸效应,并抑制立枯丝核菌的菌核形成。研究表明,在NB液体培养基中发酵时,进入稳定生长期后开始产生抑菌物质,72 h时累积达到最大值。这种抑菌物质的特性为外泌型、水溶性,可透过0.22μm的微孔滤膜,对热、酸、碱、蛋白酶水解、紫外线照射等影响有较强的稳定性。     

蒿属植物提取物对棉花枯萎病菌和红腐病菌的抑制活性研究(英文)

在实验条件下,采用菌丝生长速率测定法,以棉花枯萎病菌、棉红腐病菌为供试菌,对茵陈、黄蒿、艾蒿3种蒿属植物提取物的抗菌活性进行了研究。结果表明,供试3种蒿属植物提取物对棉花枯萎病菌和棉花红腐病菌均具有较好的抗菌活性,其中尤以艾蒿提取物的抗菌活性强而稳定,48～96h对上述两病菌的菌丝抑制率均达80%以上;试验还比较了不同提取溶剂提取物的抗菌活性,发现提取物的抗菌活性随浓度的增高而增强,两者呈显著的正相关性;极性小的丙酮所得到的艾蒿提取物抗菌活性明显强于乙醇提取物,前者的EC50为1.4785mg/L,后者的为3.2090mg/L。间歇振荡法、超声波法、冷浸法提取物对供试菌的72h菌丝抑制率分别为84.34%、84.56%、88.70%,可见同种溶剂不同提取方法所得提取物抗菌活性基本一致。     

左旋肉碱对微绿球藻和四膜虫种群生长的影响

[目的]研究左旋肉碱对微绿球藻Nannochloropsis oculata和四膜虫Tetrahymena sp种群生长的影响。[方法]对微绿球藻和四膜虫在左旋肉碱浓度为0、50、100、1 000 mg/L时的种群密度进行测定。[结果]添加高剂量左旋肉碱对微绿球藻种群生长有显著抑制作用（P〈0.05）;添加左旋肉碱对四膜虫种群生长有显著促增殖作用（P〈0.05）。[结论]该研究为左旋肉碱在水产养殖中的应用研究提供了理论依据。     

5种不同镰刀菌的酶学特性分析

采用比色法和电泳技术对引起成年国槐根茎腐烂病的5种镰刀菌的酶学特性进行了分析,为镰刀菌的分类和生理分化研究等提供理论依据。结果表明,5种镰刀菌的可溶性蛋白含量及4种保护酶(EST、SOD、PPO和POD)活性的测定结果与电泳结果相一致,如5种镰刀菌的SOD活性都很高,介于2 263.09~6 134.42 U/mg,电泳图谱清晰,谱带颜色较深、较明亮,说明电泳法可半定量地确定保护酶活性的大小;供试的5种镰刀菌在可溶性蛋白和EST、SOD、PPO等同工酶水平上存在差异,不同镰刀菌之间某些同工酶谱带数和同一迁移率谱带的亮度和色泽差异非常明显,既存在共同谱带又有特异性谱带,如5种镰刀菌EST同工酶图谱的共同谱带占23.5%,特异性谱带占76.5%,说明5种供试病原菌均属于镰刀菌属,但分属于不同的镰刀菌种。     

白斑综合征病毒(WSSV)基因VP28原核表达与检测

VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白.将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、Xho Ⅰ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到pET-28a(+)表达载体上.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒双酶切、测序鉴定后成功地构建了VP28基因原核表达载体pET-28a-VP28.转化菌经IPTG诱导,SDS-PAGE显示含有与预期大小一致的约30 ku蛋白带,主要以包涵体形式表达.采用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,获得了纯度为95％的大肠杆菌重组蛋白VP28.该纯化蛋白作为绝对定量Western的标准品,梯度稀释建立标准曲线,以定量检测转基因鱼腥藻7120中的VP28绝对表达量.实验结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组蛋白VP28与鱼腥藻7120中表达的VP28分子量基本相同,纯化后的大肠杆菌重组蛋白梯度稀释作为绝对定量Western标准曲线,计算出转基因鱼腥藻7120在培养第17天时,VP28的表达量最大,为5.14 μg/mL,占转基因鱼腥藻7120总蛋白浓度的1.45％.这不仅对转基因鱼腥藻的高效培养具有重要意义,也为日后确定投喂对虾口服疫苗有效剂量防治白斑综合征奠定了基础.     

一株拮抗香蕉枯萎病菌内生细菌的抑菌机制研究

采用生物化学方法,分析了一株香蕉内生细菌BEB99发酵液的乙酸乙酯粗提物对香蕉枯萎病菌4号小种(FOC4)的抑菌机制,结果表明,其对香蕉枯萎病菌菌丝脂质过氧化、麦角甾醇含量、蛋白质含量及果胶酶活性均有一定的影响,但不能产生几丁质酶。