植物乳杆菌抑菌蛋白的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】筛选新型广谱有效的抑菌蛋白,为全面解析植物乳杆菌抑菌机制和开发新型抗菌制剂奠定基础。【方法】以植物乳杆菌GX20200417-1为研究对象,采用牛津杯法测定其抑菌活性,以低温离心和超滤法初步分离获得胞外蛋白并测定其抑菌活性,对胞外蛋白进行不同温度、pH及蛋白酶处理,研究抑菌蛋白理化特性,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进一步分析鉴定植物乳杆菌代谢产物中的抑菌成分。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抑菌作用;发酵上清液在发酵24 h的抑菌能力最强;胞外蛋白的抑菌能力与发酵上清液相近;植物乳杆菌抑菌蛋白具有较好的耐热特性,与对照组相比,在20~80 ℃时抑菌活性均无显著变化(P＜0.05),在pH 6.0~8.0时抑菌活性最佳,对蛋白酶敏感;经LC-MS/MS鉴定分析,检测出5种可信度较高且与抑菌作用相关的蛋白质,分别是片球菌素pediocin PA-1、溶菌素(lysin)、聚酮合酶(polyketide synthase)、辅助蛋白(accessory protein)和LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein,分子质量分别为5.348、7.348、8.348、6.348和19.662 ku;蛋白质功能分析结果表明,片球菌素pediocin PA-1与溶菌素主要通过破坏细菌细胞壁与细胞膜,从而达到抑菌效果。LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein可识别含有N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)残基的肽聚糖,上调抗菌肽的表达;辅助蛋白主要参与细菌素的合成,聚酮合酶主要参与抗生素的合成,二者通过参与抑菌物质的合成间接发挥抑菌作用。【结论】本研究成功分离并鉴定植物乳杆菌GX20200417-1的5种抑菌蛋白;植物乳杆菌GX20200417-1可能通过其代谢产物中的多种抑菌蛋白协同发挥抗菌作用。     

唾液乳杆菌对鸡毒支原体感染肉鸡生长性能及肺损伤的影响

本研究旨在探究唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）对鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）感染肉鸡生长性能及肺损伤的影响。选用1日龄AA肉鸡240只，按试验要求随机分为6组，包括对照组（Con）、低剂量唾液乳杆菌组（L）、高剂量唾液乳杆菌组（H）、MG感染组（MG）、MG感染+低剂量唾液乳杆菌组（MG+L）和MG感染+高剂量唾液乳杆菌组（MG+H）。Con组、MG组饲喂基础饲料，L组、MG+L组饲喂添加10⁸ CFU·kg^-1唾液乳杆菌的基础饲料，H组、MG+H组饲喂添加10⁹ CFU·kg^-1唾液乳杆菌的基础饲料，7日龄时给与MG组、MG+L组和MG+H组进行MG感染攻毒，饲养42 d后，通过分析各组鸡的体重、饲料转化率、肺部MG定植量、肺部病理损伤、肺部炎性损伤相关蛋白表达量及促炎性细胞因子含量来评价唾液乳杆菌缓解MG感染所致肉鸡生长性能下降及肺损伤效果。结果表明，MG感染极显著降低肉鸡体重（P<0.01），并极显著提高饲料转化率（P<0.01），而饲料中添加低剂量唾液乳杆菌和高剂量唾液乳杆菌均能极显著缓解MG感染所致肉鸡体重降低（P<0.01），并极显著改善饲料转化率（P<0.01）。饲料中添加低剂量唾液乳杆菌和高剂量唾液乳杆菌均能极显著降低MG肺部定植量（P<0.01）；明显改善MG感染所致肺部病理损伤；极显著降低MG感染所致炎性损伤相关蛋白（TLR2、HMGB1、p-p65/p65、NLRP3、Pro-Caspase-1/Caspase-1）表达（P<0.01）；极显著降低MG感染所致促炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8）含量（P<0.01）。综上所述，饲料中添加唾液乳杆菌可以显著缓解MG感染所致肉鸡生长性能下降及肺损伤，该株唾液乳杆菌具有较大的应用潜力预防肉鸡感染MG。     

猪源罗伊氏乳杆菌 LR1 对断奶仔猪肠黏膜细胞外基质动态变化的影响

【目的】初步研究饲粮添加猪源罗伊氏乳杆菌对断奶仔猪肠道细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）表达的影响，为猪源罗伊氏乳杆菌在畜牧业中的推广应用提供参考。【方法】选取 21 日龄体重相近的杜长大杂交断奶仔猪 144 头，随机分为 3 个处理组，对照组（CON）饲喂基础饲粮，抗生素组（AO）在基础饲粮中添加 75 mg/kg 金霉素和 100 mg/kg 喹乙醇，罗伊氏乳杆菌组（LR1）在基础饲粮中添加 5×1010 CFU/kg 猪源罗伊氏乳杆菌 LR1，每个处理组各分 8 栏饲养，每栏 6 头猪，试验期为 42 d，饲养试验结束时随机从每栏挑选 1 头仔猪进行屠宰，取其十二指肠（近端）、空肠（中段）、回肠（远端）样品，进行肠道胶原蛋白、纤维黏连蛋白、肌腱蛋白及其相关调控因子等 ECM 相关指标的检测。【结果】Masson 染色观察结果显示，十二指肠、空肠和回肠中胶原纤维均由肠黏膜下层向上层延伸，与 CON 组相比，LR1 组和 AO 组断奶仔猪十二指肠的胶原容积分数均显著降低（P<0.05），LR1 组的回肠胶原容积分数也显著降低（P<0.05）。TMT 高通量蛋白质组学分析结果显示，ECM-受体互作通路是差异蛋白主要富集通路之一，且其差异蛋白 COL1A2、COL4A2、COL6A1、ITGA1 等 ECM 分子的表达在 LR1 组显著低于 CON 组（P<0.05）。与 CON 组相比，LR1 组和 AO 组断奶仔猪空肠和回肠 COL1A2、COL3A1、ITGβ2 的基因表达均显著降低（P<0.05），且 LR1 组显著降低了空肠 COL4A2、COL5A1、COL6A1、FN1、TNC、ITGα1 及回肠 ITGα1 的基因表达（P<0.05），但对回肠 COL4A2、COL5A1、COL6A1、FN1、TNC 无显著影响。在回肠中，与 CON 组相比，LR1 组和 AO 组断奶仔猪回肠 Collagen Ⅰ ~ Ⅵ的含量显著降低（P<0.05）；LR1 组回肠胞内调控因子 SEC6A1、PDE4D 和胞外调控因子 MMP2 的基因表达均显著降低（P<0.05）；与 AO 组相比，LR1 组的胞内调控因子 SEC6A1、细胞因子 TGF-β 的基因表达显著降低（P<0.05）。【结论】饲粮中添加猪源罗 伊氏乳杆菌 LR1 可通过减少 ECM 调控因子 SEC6A1、PDE4D 等的基因表达来调节断奶仔猪肠道 ECM 的重塑。     

干酪乳杆菌对DSS诱导结肠炎小鼠焦虑样行为的影响及对结肠的保护作用

为研究干酪乳杆菌对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性结肠炎小鼠焦虑样行为的影响及对结肠的保护作用，本研究分为对照组、DSS组、干酪乳杆菌组和干酪乳杆菌预防组，通过旷场试验比较各组小鼠行为学差异；统计并比较不同组小鼠体重、结肠长度、肠道上皮、炎性浸润、粪便潜血等的变化；HE染色法检测各组小鼠肠道结构的变化。结果显示:1)干酪乳杆菌预防组小鼠在旷场箱中活动的距离及在中央区域停留的时间显著增加(P<0.05)；2)与DSS组相比，干酪乳杆菌预防组结肠长度、小鼠体重显著增加，组织学评分和疾病活跃指数显著降低(P<0.05)，结肠肠道结构更加完整。综上，干酪乳杆菌可减轻小鼠焦虑样行为，缓解DSS对小鼠结肠的损伤，发挥对急性肠炎的保护作用。     

添加不同发酵菌剂对巨菌草青贮饲料营养品质的影响

为探索发酵菌剂在巨菌草青贮中的效果，以不添加任何菌剂为对照，研究了3种发酵菌剂(EM菌液、聚能发酵剂、酶菌复合剂)对巨菌草青贮发酵品质的影响。结果表明，在巨菌草中添加微生物发酵菌剂后，一定程度上改善了青贮饲料的品质，使巨菌草青贮饲料pH降低，中性洗涤纤维减少，营养成分得到较好的保存。其中以每1 t 巨菌草揉丝原料添加2 L EM菌液处理组效果最好，不仅降低了巨菌草青贮饲料的pH，而且提高了粗蛋白含量，是3种供试发酵菌剂中的最优菌剂。     

蛹虫草废弃米基发酵工艺初探

为提高蛹虫草废弃米基作为饲料中的蛋白含量，本试验采用蛹虫草废弃米基作为发酵培养基，筛选优势发酵菌种，并通过正交试验和单因素考察试验确定一套适用于蛹虫草废弃米基的二次发酵工艺。结果表明：采用酵母菌发酵效果较好。一次发酵的米基添加量为10%（m/m），酵母菌接种量为1%（m/m），发酵时间为20 h|二次发酵的米基添加量为12.5%（m/m），接种量为6%（m/m），发酵时间为48 h。综上，蛹虫草废弃米基经发酵处理后粗蛋白质含量提高了25.61%， Ca、P等无机盐含量也略有提高，同时发酵工艺对虫草素无干扰，发酵产物中保留了虫草素成分。此试验结果可作为蛹虫草废弃米基开发新型饲料的技术基础。 [关键词] 二次发酵|粗蛋白质|酵母菌|嗜酸乳杆菌     

海藻肥与微生物菌剂部分替代化肥对水稻产量及其构成因素的影响

为明确在化肥施用量减少条件下,海藻肥与微生物菌剂部分替代对水稻产量及其构成因素的影响。于2019年在广西龙州、象州和岑溪进行水稻多点联合大田试验,设置常规施肥量（P1）、常规施肥量减10%+海藻肥与微生物菌剂部分替代（P2）、常规施肥量减20%+海藻肥与微生物菌剂部分替代（P3）和常规施肥量减30%+海藻肥与微生物菌剂部分替代（P4）4个处理,成熟期测定水稻干物质积累量、产量及其构成因素。结果表明,3个试验点的平均干物质积累量P2处理比P1处理提高6.06%,P3和P4处理分别比P1处理下降3.44%和3.75%;平均产量P2处理比P1处理提高0.45%,P3和P4处理与P1处理相比平均下降5.40%和4.08%。由此可知,海藻肥和微生物菌剂可以替代10%~30%的化肥,替代比例与土壤肥力水平有关,不同地点替代比例略有差异,象州适宜替代比例为10%,龙州和岑溪最优替代比例为30%。     

植物乳杆菌在动物饲料中应用的研究进展

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）来源广泛，作为乳酸菌的一员，其具有调节动物肠道菌群环境，提高机体免疫能力，改善生长性能等生理功能，因此，在饲用抗生素替代方面具有重要的作用。但是，在动物饲料应用中存在抗逆性较差、作用机理和添加量不明确的问题。本文总结了植物乳杆菌近年来在不同动物中的应用，并结合在动物饲料应用中存在的问题提出展望，以期为植物乳杆菌在动物饲料中的应用提供参考。 [关键词] 植物乳杆菌|动物饲料|生长性能|免疫功能     

基于16S rDNA测序分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群结构

旨在通过16S rDNA测序技术分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群的结构。本研究将20只昆明小鼠随机分为2组,分别是苦参碱组(MT组)和阴性对照组(NC组),连续腹腔给药5 d,每天给药2次,收集各组粪便和各肠段组织,进行β多样性、Lefse及Metastats分析,qPCR检测差异菌种在各肠段的mRNA表达量,通过KEGG分析肠道菌群变化导致的代谢途径差异。稀释曲线结果显示,所测样本数据足以反映样品中物种多样性;β多样性分析结果显示,苦参碱可以调节肠道菌群的结构,Lefse及Metastats分析结果均显示,苦参碱显著增加了拟杆菌门(Bacteroidetes)、拟杆菌目(Bacteroidales)、Muribaculaceae、益生菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的丰度,而显著减少了厚壁菌门(Firmicutes)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的丰度。与Lefse及Metastats分析结果一致,qPCR结果显示苦参碱组小鼠粪便中嗜酸乳杆菌含量增加。同时,苦参碱可以增强嗜酸乳杆菌在各肠段的定植。通过KEGG分析发现,NC与MT组之间在聚糖的生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径存在显著差异。本研究结果表明,腹腔注射苦参碱可以显著改变昆明小鼠肠道菌群的结构,增加有益菌嗜酸乳杆菌在肠道中的定植,并造成了聚糖生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径的差异,为进一步揭示苦参碱发挥药效作用的机理奠定了基础。     

1株鲤鱼源植物乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源，采用MRS培养基进行菌株分离纯化，经16S rRNA测序鉴定后，对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌，将其命名为YY001，该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色，革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌；4 h后进入对数期生长，12 h后生长达到稳定期；具有较强的产酸能力，产酸曲线显示，0~12 h pH迅速下降，培养16 h的菌液pH达3.8；在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性；该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果，且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达34.19 mm；药物敏感性试验结果显示，分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药；每天一次连续1周灌胃10⁸CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性，可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株，为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。