广西近十年柑橘黄龙病综合防控成效与经验

柑橘黄龙病是柑橘生产上的毁灭性病害之一.有效防控柑橘黄龙病是黄龙病疫区柑橘生产中最重要的任务.近十年,广西省致力于在全省范国内实施柑橘黄龙病综合防控,并在此过程中获得了很多有用且宝贵的经验.通过近十年柑橘黄龙病综合防控的实施,广西柑橘产业规模从全国第七位跃居全国第二位.本文主要介绍并分享广西近十年柑橘黄龙病综合防控中取得的成效和经验.     

柑橘黄龙病三种媒介昆虫的研究进展

摘S要：柑橘木虱是传播世界毁灭性病害柑橘黄龙病的唯一虫媒,因此科学合理防治柑橘木虱是治理柑橘黄龙病的关键措施之一。本文系统概述了柑橘上3种木虱的生物学特性、发生和扩散规律、与柑橘黄龙病的互作及传毒机制等方面的研究进展,以期为柑橘木虱的合理化防治提供参考,最终为柑橘黄龙病的综合治理提供理论依据和借鉴。_S     

柑橘黄龙病菌亚洲种分子检测引物评价及绝对定量PCR体系优化

柑橘黄龙病是对柑橘产业最具毁灭性的病害, 目前没有可用的有效药剂和抗病品种, 分子检测对黄龙病有效防控至关重要。本研究对国内外常用的常规PCR和巢式PCR检测引物进行评价, 针对多拷贝的nrdB和16S rDNA基因, 构建质粒标准品并筛选适用于绝对定量PCR的最佳质粒。结果表明, 使用Es Taq MasterMix对感染 Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas)的柑橘样品进行常规PCR检测时, 在评价的16对引物中, OI1/OI2c、Las606/LSS和HLBF468/R877灵敏度最高, 推荐同时使用检测黄龙病菌含量低的样品;各组巢式PCR检测引物有其适用扩增体系, 部分引物用Es Taq MasterMix扩增时出现非特异性扩增, F1/B1→F3/B3则适用Es Taq MasterMix体系, 且最高可稳定特异检出105倍稀释感染CLas柑橘总DNA样品（2×10-3 ng/μL）, 是灵敏度最高的引物组, OI1/OI2c→S3/S4在Es Taq MasterMix和Ex Taq DNA聚合酶体系中均可稳定特异检出104倍稀释感染CLas柑橘总DNA样品（2×10-2 ng/μL）, 是适用扩增体系最广的引物组;构建的5个绝对定量PCR质粒标准品中, pnrdB83扩增效率最接近100%, 且在2次重复试验中波动最小, 稳定性最强, 并且作为标准品对黄龙病待测样品进行绝对定量时, 各样品在2次重复试验中的拷贝数差值最小, 是本研究筛选的最佳质粒。本研究的结果将为柑橘黄龙病菌的定性和定量分子检测提供参考。     

柑橘黄龙病对纽荷尔脐橙叶片营养元素及土壤微生物群落的影响

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing, HLB)堪称柑橘的癌症,严重为害产业健康发展。本研究采用盆栽试验,通过ICP-MS、平板计数法及微平板法测定了不同染病时间的纽荷尔脐橙叶片的矿质营养元素含量、土壤微生物种群数量及微生物功能多样性。研究结果表明,在黄龙病侵染的纽荷尔脐橙病株中,叶片中显著性减少的矿质营养元素多与叶绿素合成及光合系统相关。而土壤微生物群落功能多样性的下降时间段与土壤纤维素分解菌的增加时间段相吻合,表明根系生态系统的破坏多发生于黄龙病侵染后的6-8个月。     

三峡库区晚熟脐橙果实粒化的原因及对策

2012年4月中旬以来,三峡库区的奉节县晚熟脐橙果园不同程度地出现果实粒化现象,严重地影响三峡库区柑橘（特别是晚熟柑橘）产业的持续健康发展。笔者针对这一情况,到当地的康乐镇、大树镇、公平镇、永乐镇等6个晚熟脐橙主产乡镇果园进行了实地调查,初步找到了晚熟脐橙果实产生粒化的原因,并提出了相应对策。     

一种快速高效提取柑橘黄龙病植物样品DNA的方法

为快速获得高质量的柑橘黄龙病（HLB）植物样品DNA,本研究在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,建立了一种简便、快速提取HLB植物样品DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB提取法相比,该方法所需时间短,1~2 h即可完成整个提取过程,获得的HLB植物样品DNA质量高、产量多。同时比较了三种方法制备模板时黄龙病病原菌和其他柑橘病原菌的PCR检出率,CTAB简化法和传统CTAB法检出率一致,试剂盒稍低,表明本研究建立的CTAB简化法可用于柑橘DNA病害PCR检测DNA模板的制备。本研究研发的HLB植物样品DNA提取方法优势明显,适用于大量病样的快速检测。     

贵州柑桔主产区柑桔黄龙病菌发生及遗传多样性研究

为进一步调查贵州柑桔黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）疫情,本研究在贵州15个县（市）采集了104份柑桔黄龙病疑似样品,从中检测出19份样品感染了该病,阳性检出率为18.27%。贵州柑桔黄龙病发生仍以黔西南地区的老病区为主,从江、榕江等黔东南地区疫情得到一定控制,黔南、遵义及铜仁等地区没有发现疫情。通过特异引物扩增贵州省内柑桔黄龙病病原菌种群发现,产物呈现扩增多态性,表明贵州柑桔黄龙病菌种群在遗传特性存在差异。     

柑橘黄龙病对沙田柚树体特性和果实品质的影响

柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,简称HLB）是柑橘的毁灭性病害,柑橘感染后不仅导致叶片黄化,影响果实品质,而且会使树势减弱直至植株死亡。本研究以感染黄龙病和健康沙田柚[Citrus maxima (Burm.) Merr. cv. Shatian Yu]为材料,对比分析黄龙病树（HLB⁺）和健康树（HLB^-）在叶片形态特征、果实品质、矿质元素等方面的差异,旨在掌握黄龙病对沙田柚树体和果实的影响,为促进柑橘黄龙病的防控提供理论参考。沙田柚黄龙病植株与健康植株相比,叶片面积减少28.13%,叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素分别降低40.38%、44.00%和40.47%;果实外观着色异常且果实偏小,平均单果重下降45.62%,果皮变薄,种子败育增多,果实维生素C升高26.44%,达到显著水平,并且不同组织的多个元素发生显著变化。与健康植株相比,黄龙病叶片N和Ca元素分别减少19.00%和49.72%,果肉N元素减少18.00%,而果皮和果肉Ca元素显著升高;病树根、叶片、果皮和果肉S元素均显著低于健康树。病树叶片B和Cu元素分别降低了35.07%和54.45%,果皮Cu元素显著降低了42.96%,果肉Zn元素显著升高了41.30%。黄龙病严重影响了沙田柚叶片形态和果实品质以及矿质元素代谢,应高度重视提高沙田柚果园的黄龙病防控管理水平。     

柑橘R2R3-MYB类转录因子CitMYB20的克隆与表达分析

为解析柑橘R2R3-MYB转录因子家族成员CitMYB20基因的分子生物学特征及受柑橘黄龙病病菌和溃疡病病菌的诱导表达情况。本研究同源克隆了不同柑橘品种中CitMYB20基因的开放阅读框序列,利用生物信息学方法预测其生物学功能并分析比较该基因在不同品种间的序列差异。在洋葱表皮细胞中瞬时表达观察CitMYB20的亚细胞定位。利用qRT-PCR技术分析黄龙病病菌胁迫和溃疡病病菌胁迫时CitMYB20的表达量变化。研究结果显示柑橘CitMYB20基因在晚锦橙、酸柚、纽荷尔脐橙和四季橘中的相似度达到99.01%,高度保守。晚锦橙中该基因含有3个外显子和2个内含子,其开放阅读框为804 bp,编码267个氨基酸残基。CitMYB20蛋白的N端高度保守,具有两个R结构域,属于典型的R2R3类型的MYB转录因子家族的成员。洋葱表皮细胞亚细胞定位分析结果表明该基因定位于细胞核中。CitMYB20基因受黄龙病病菌胁迫时,在黄龙病敏感品种晚锦橙和耐性品种酸柚中均显著上调表达,其中在耐病品种酸柚中上调表达24倍,在感病品种晚锦橙中上调表达34倍;而在溃疡病病菌胁迫时,CitMYB20基因仅在溃疡病抗性品种四季橘中显著差异表达,感病后上调表达3倍。推测该基因对黄龙病和溃疡病的应答差异可能是因为不同的调控机制造成的,构建CitMYB20基因过表达载体拟对不同病原的应答情况进行深入研究。     

7种挥发性化合物对柑橘木虱引诱效果的评价

柑橘黄龙病对全球的柑橘产业造成了严重的经济损失,其传播媒介主要为柑橘木虱。在前期研究中利用柑橘木虱对4种芸香科植物的取食偏好结合代谢组学分析筛选出一批可能对柑橘木虱具有引诱效果的挥发性化合物,本研究鉴定了邻氨基苯甲酸甲酯、癸酸、正辛醇、左旋香芹酮、2-环己烯酮、反式-1,2-环己二醇、吡嗪等7种挥发性化合物在0、0.1%、1%、10%4个浓度和10、20、30、40、50、60 min 6个持续时间下对柑橘木虱的引诱效果,并比较了其中5种脂溶性挥发物在各自最优浓度下的引诱效果。试验结果表明,7种挥发物对柑橘木虱都有引诱效果,但是引诱效果与挥发物浓度及持续时间有关。吡嗪、左旋香芹酮、正辛醇、2-环己烯酮、癸酸、邻氨基苯甲酸甲酯和反式-1,2-环己二醇的最佳引诱浓度分别为0.1%、1%、1%、1%、10%、10%、10%。六臂嗅觉仪试验结果显示5种脂溶性挥发物中1%左旋香芹酮的引诱效果高于10%癸酸、10%邻氨基苯甲酸甲酯、1%2-环己烯酮、1%正辛醇及对照(矿物油),但与其他4种挥发物没有显著差异。研究结果可为柑橘木虱引诱剂的开发提供参考,促进柑橘黄龙病的绿色防控。