Flufenoxuron, an acylurea insect growth regulator, alters development of Tribolium castaneum (Herbst) (Coleoptera: Tenebrionidae) by modulating levels of chitin, soluble protein content, and HSP70 and p34 in the larval tissues

The effect of sublethal concentrations, 0.00141% (LC₂₀), 0.00251% (LC₃₀), and 0.0036% (LC₄₀) of a dispersible formulation of an acylurea insect growth regulator, flufenoxuron (Cascade) on certain biochemical parameters in the larvae of Tribolium castaneum was investigated. When neonates were fed on diet treated with sublethal concentrations for 24 h, it was observed that at all concentrations tested, there was a significant reduction in chitin content on the 15th day of development. Total soluble protein content at LC₂₀ and LC₃₀ decreased with increasing age of the larvae. At LC₂₀ and LC₄₀ concentrations there was a progressive increase in the protein: chitin ratio as a function of increase in age of the larvae. SDS-PAGE analysis of the larval tissue extracts indicated gross quantitative changes in some of the protein bands (MW 50-97 kDa). Western blot analysis revealed significant increase in the level of HSP70 in the extracts of larvae fed on LC₃₀ treated diet, on the 7th and 10th day of development in the decreasing order. Conversely, a significant decrease in the hyper-phosphorylated form of p34^cdc2 kinase due to flufenoxuron treatment indicating modulation of cell cycle regulation was observed. Thus, sublethal concentrations of flufenoxuron alter expression of developmentally regulated proteins, HSP70 and p34^cdc2 and chitin formation in a stage-specific manner thereby resulting developmental abnormalities in T. castaneum.     

结核分支杆菌HSP65 DNA疫苗的制备和重组蛋白的原核表达

结核分支杆菌分子量为65ku的热应激蛋白(HSP65)是一种非常重要的抗原，为了研制结核病核酸疫苗，构建编码HSP65DNA，并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达。以标准结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板，用PCR法扩增出HSP65基因，经限制性内切酶消化后，插入真核表达栽体pJW4303中，获得重组质粒pJW-HSP65。同时将HSP65基因插入原核表达栽体pET-22b( )，获得重组质粒pET22b-HSP65。将pET22b-HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)／PolysS，用IPTG诱导，进行蛋白表达。结果表明，经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65，构建成功了真核重组质粒pJW-HSP65即可作为结核病DNA疫苗。经SDS-PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达，将表达蛋白进行纯化，作为保护性结核杆菌抗原以便检测HSP65DNA疫苗的免疫效果。     

柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白70(Et HSP70)的重组表达及免疫保护效果

本研究初步评价了柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白70(EtHSP70)的免疫保护效果。以RT-PCR方法克隆获得E.tenella广东株的Ethsp70基因序列,插入表达载体pMAL-c2X后转化入大肠杆菌Rosetta株,经IPTG诱导,可高效表达分子量为112 ku的可溶性融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的27%。将Ethsp70基因插入真核载体pcDNA6,构建真核表达质粒pcDNA-Ethsp70。用纯化的重组融合蛋白(rEtHSP70)和pcDNA6-Ethsp70质粒分别以100μg/只剂量肌注免疫雏鸡,攻虫后以盲肠病变计分、相对盲肠卵囊产量(ROP)、相对增重率和抗球虫指数(ACI)为评价指标,结果表明2个免疫组相对盲肠卵囊产量分别为39.4%、45.2%,抗球虫指数由89分别提高至免疫组的164和150。提示EtHSP70可能是一种有潜在应用价值的保护性抗原。     

大菱鲆热休克蛋白90基因cDNA的克隆及其表达特征

从大菱鲆脾脏cDNA文库中筛选到HSP90,采用基因克隆方法获得含有1个97bp的5’UTR、2190bp的开放阅读框和501bp的3’UTR的全长cDNA序列。整个开放阅读框编码729个氨基酸,包含HSP90家族5个保守信号区。与其他物种已知序列同源比对的结果显示,此编码氨基酸更接近于热休克蛋白90β亚型(HSP90β),与牙鲆HSP90β的同源性高达96.6%。RT-PCR分析表明,在胚胎发育初期就能检测到HSP90,其表达量伴随着胚胎发育,先增加后减少,在尾芽期达到最高。HSP90在健康大菱鲆各供试组织中均有表达。经鳗弧菌感染处理后,在胚胎细胞中也有HSP90的强烈表达。结果显示,大菱鲆HSP90cDNA序列为HSP90β,是一种组成型表达的基因,其在维持正常生理机能、胚胎发育和应激中发挥重要的作用。     

雪峰乌骨鸡HSP70基因多态性与精液品质关联分析

旨在研究雪峰乌骨鸡HSP70基因多态性及其与鸡冻精品质的关系,以期筛选出鸡精液抗冻性相关分子标记,为鸡精液冷冻保存及其分子育种提供技术支撑。选取100只同一批次、性成熟的白羽雪峰乌骨种公鸡,测定采精量、精子密度和冻精活力等指标。翅静脉采血,提取基因组DNA并扩增HSP70基因,构建精液品质低、中、高3个混池并测序。单个样本测序后,比对测序峰图,完成基因分型,统计不同基因型个体数,并进一步进行精液品质关联分析。结果发现:HSP70基因436 bp处存在G>A突变,G为优势基因,将群体分成AA、AG和GG这3种基因型,各基因型频率依次为22%、44%和34%,该位点遗传多样性分析PIC=0.371 4,为中度多态位点,Hardy-Weinberg平衡适合性检验得χ²=1.148 0(P>0.05),该群体符合Hardy-Weinberg平衡规律。基因多态与精液品质关联分析表明,GG基因型个体采精量和精子密度极显著(P<0.01)高于AG型、AA型个体,且冻后活力显著(P<0.05)高于AG型个体,极显著(P<0.01)高于AA型个体;AG型个体采精量和精子密度极显著(P<0.01)高于AA型个体,冻精活力差异不显著(P>0.05)。综上所述,HSP70基因突变G/A位点与鸡冻精品质显著相关,可以作为雪峰乌骨鸡个体精液抗冻性的候选基因,基因型GG的个体精液更具抗冻性,其次为AG型个体。     

温度突变对凡纳滨对虾己糖激酶和丙酮酸激酶活力以及热休克蛋白表达的影响

研究了水温从17℃突变为27℃对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)稚虾己糖激酶(HK)和丙酮酸激酶(PK)活力及热休克蛋白(HsP70)表达的影响.主要结果如下:(1)温度突变后,凡纳滨对虾肝胰脏中己糖激酶活力逐渐增大,温度突变后3h达到最高,是温度突变前的2.54倍(P＜0.05).随后,对虾己糖激酶的活力逐渐下降,72h酶活力基本恢复到温度突变前的水平.(2)温度突变后1h,凡纳滨对虾丙酮酸激酶的活力降到最低,随后逐渐增大;6h达到最高,随后对虾丙酮酸激酶的活力逐渐下降并在72h恢复到温度突变前的水平.(3)温度突变0.5h后,凡纳滨对虾肌肉中HSP70的表达量迅速升高,1h达到最高,与温度突变前差异显著(P＜0.05),随后下降到比温度突变前稍高的水平并趋于稳定.实验结果表明,温度突然升高后,己糖激酶活力升高,随后恢复到起始水平;糖酵解过程先受到抑制,之后得以恢复;温度突变可导致凡纳滨对虾对环境的抗逆性提高.     

几种中草药抗蛋鸡热应激作用分子机制的初步研究

试验选用59周龄海兰褐蛋鸡80只,随机分为4个处理组,试验1～3组分别添加1%的女贞子、五味子和四君子汤,试验4组为对照组。试验期为4周。研究这几种中草药对热应激状态下蛋鸡生产性能、抗氧化功能、内分泌以及HSP70基因表达的影响。鸡舍内平均温度为(32.0±0.5)℃,相对湿度为60%～70%。结果表明:(1)女贞子、五味子和四君子汤显著提高了热应激状态下蛋鸡的产蛋率(P<0.05),女贞子和五味子显著降低料蛋比(P<0.05);(2)女贞子、五味子和四君子汤能显著降低蛋鸡组织和血清脂质过氧化物含量;(3)女贞子和五味子能显著降低血清GOT和ALT活性(P<0.05),四君子汤显著降低血清ALT活性(P<0.05);(4)五味子和四君子汤极显著提高了血清中T3含量(P<0.01),女贞子、五味子和四君子汤显著降低高温条件下产蛋鸡血清中Cor含量(P<0.05);(5)女贞子、五味子和四君子汤显著提高肝脏HSP70基因表达(P<0.05)。由本试验结果可见,女贞子、五味子和四君子汤能通过增强热应激下蛋鸡脂质稳定性、调节内分泌以及提高HSP70基因表达等途径改善热应激下蛋鸡的生产性能,减轻热应激对蛋鸡的危害。     

大豆卵磷脂对子宫内发育迟缓仔猪肠道抗氧化和热休克蛋白70表达的影响

【目的】研究大豆卵磷脂（soya lecithine,SL）对子宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation,IUGR）猪肠道生长、黏膜氧化应激（oxidative stress,OS）和热休克蛋白70（heat shock protein,HSP70）表达的影响。【方法】试验共选用12头7 d IUGR仔猪和6头正常体重（NBW）仔猪,所有IUGR仔猪随机分成两组（n=6）,分别饲喂基础人工乳（IUGR组）和添加1.5%SL的人工乳（IUGR+SL组）,所有NBW仔猪饲喂基础人工乳（NBW组,n=6）,试验期7 d。【结果】IUGR显著降低14 d仔猪空肠及其非黏膜绝对重量（P＜0.05）,降低空肠黏膜总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽还原酶（GR）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性（P＜0.05）,升高MDA水平（P＜0.05）,黏膜HSP70的 ELISA和免疫印迹法检测结果均显著升高（P＜0.05）。IUGR猪补充SL后,空肠肠段、黏膜和非黏膜绝对和相对重量均显著升高（P＜0.05）;空肠黏膜T-AOC、GPx和SOD显著升高（P＜0.05）,而MDA显著下降（P＜0.05）;ELISA检测结果显示HSP70蛋白水平显著降低（P＜0.05）,且与SL添加水平呈显著负相关（P＜0.05）。【结论】补充SL对恢复IUGR导致的仔猪肠道组织生长缓慢、HSP70表达升高和OS损伤有很好的效果。     

预热诱导HSP70表达对高温引致胚胎损伤的保护作用

用37℃2 h条件下体外培养的小鼠囊胚作为对照,将体外培养至囊胚期的小鼠胚胎分别施以38℃2 h、39℃2 h、40℃2 h的预热应激处理,以观察热休克蛋白70(HSP70)表达对高温所致胚胎损伤的影响。用W estern-b lot技术检测小鼠胚胎内HSP70的表达,然后分别将预热胚胎和对照组胚胎置于42℃高温下处理3 h,用台盼兰拒染法检测胚胎存活率,判断HSP70表达对胚胎抵抗高温损伤有无保护作用。结果显示:39℃热应激处理2 h后,HSP70表达量达到最高水平,与对照组差异极显著(P<0.01);38℃热应激处理2 h和40℃热应激处理2 h组HSP70表达与对照组相比均有显著(P<0.05)增加;预热诱导组胚胎存活率明显(P<0.05)高于对照组,其中以39℃2 h组最高。提示HSP70的高表达可以抵抗胚胎对外界不良因素的刺激。     

基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析

为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果：河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。