大豆脂肪酸脱氢酶GmFAD3C-1基因的克隆及功能分析

研究通过对大豆脂肪酸脱氢酶GmFAD3家族中4个关键酶基因序列进行比对,与对照JN18相比,大豆低亚麻酸突变体MT72中GmFAD3C-1基因在起始密码子后+966bp处存在一个碱基位点的缺失（G→?）,产生移码突变,导致氨基酸序列上产生较大变化（该突变基因命名为gmfad3c-1）。构建GmFAD3C-1基因超表达及CRISPR/Cas9编辑载体,利用花粉管通道法获得T₂转化植株。脂肪酸脱氢酶酶活测定结果显示,超表达植株T₂籽粒中,酶活与对照相比上升47.62%~78.85%,编辑载体T₂籽粒中,酶活与对照相比下降25.67%~47.11%。脂肪酸相对含量测定的结果进一步表明,GmFAD3C-1基因的表达与植株亚麻酸含量密切相关。     

Cr3+对土壤酶活性的影响

【目的】研究Cr3+含量对土壤脲酶和脱氢酶活性的影响,以筛选出土壤Cr3+污染评价的酶学指标以及影响酶与Cr3+关系的主要因素。【方法】以采自全国的18种典型土样为材料,采用室内模拟方法,研究不同含量Cr3+对18种土壤脲酶和脱氢酶活性的影响。【结果】Cr3+总体上抑制了土壤脲酶和脱氢酶活性。拟合土壤脲酶和脱氢酶活性与Cr3+含量间的关系,结果显示二者呈显著或极显著负相关,且机理为完全抑制(包括竞争性抑制和非竞争性抑制)作用。计算获得Cr3+对脲酶和脱氢酶的临界污染浓度分别为16.38和4.32mg/kg,远小于Cr3+污染国家二级标准。【结论】土壤脲酶和脱氢酶在一定程度上可表征土壤Cr3+污染的程度,土壤pH和有机质分别是影响Cr3+对土壤脲酶和脱氢酶毒害的主要因素。     

大豆萌发过程中谷氨酸脱羧酶活性变化研究

研究了大豆在浸泡、萌发两个过程中谷氨酸脱羧酶(GAD)的活力变化。通过测定大豆中γ-氨基丁酸(GABA)的含量变化,间接测定大豆中GAD的活性。结果表明,大豆在25℃,浸泡10h,大豆中的GAD活性达到浸泡中最高水平,酶活性为2.45U。浸泡后的大豆在30℃,萌发40h时,酶活性达到萌发中最高水平,为1.28U。大豆在浸泡和萌发两个状态下,GAD活性较储藏期都有很大提高,且浸泡时酶活总体水平高于萌发期酶活总体水平,其中大豆GAD在25℃,浸泡10h时活性最高,为2.45U。     

甜菜碱对猪不同阶段脂肪和蛋白质代谢的影响

对断奶仔猪、生长猪和肥育猪分别饲喂添加甜菜碱800、1000、1750mg/kg的饲粮，分别进行为期36、62、40d的饲养试验，并进行屠宰取样和分析测定。结果表明甜菜碱使断奶仔猪、生长猪、肥育猪的日增重分别提高8.71%(P<0.05)、13.20%(P<0.01)、13.32%(P<0.01);胴体脂肪率分别降低12.97%(P<0.01)、19.62%(P<0.01)、12.49%(P<0.01)；瘦肉率分别提高4.08%(P<0.05)、7.15%(P<0.05)、3.31%(P<0.05);肝脏中游离肉碱含量分别增加8.98%(P<0.05)、21.36%(P<0.05)、30.18%(P<0.01);血清中生长激素(GH)水平分别增高46.15%(P<0.01)、102.11%(P<0.01)、58.33%(P<0.05)；胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平分别增高38.74%(P<0.05)、44.74%(P<0.01)、47.95%(P<0.01)。生长猪和肥育猪皮下脂肪组织中苹果酸脱氢酶(MDH)的活性分别上升13.60%(P<0.05)和14.59%(P<0.01)，断奶仔猪有提高趋势，但差异不显著(P>0.05)。     

谷氨酰胺的抗疲劳生化机制研究

用两批各 48只小鼠分 4组 (n =12 )每天分别灌喂生理盐水和 3 4mmol·kg-1的谷氨酰胺、谷氨酸和天冬酰胺 ,连续 10d。结果显示 ,三者都可提高小鼠血清、肝和骨骼肌中的肌酸磷酸激酶活性 ,降低乳酸脱氢酶活性 ,并显著增加肝、骨骼肌糖原积累。其中有相同碳架结构的谷氨酰胺、谷氨酸能极显著提高小鼠的游泳耐力 ,但与谷氨酰胺有相等酰胺氮的天冬酰胺作用不强。结果提示 ,谷氨酰胺提高机体抗疲劳作用与其碳架结构有关     

转甜菜碱醛脱氢酶基因马铃薯的抗旱耐盐性

通过根癌农杆菌介导法将甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因导入马铃薯栽培品种甘农薯2号, 经PCR、Southern杂交和Northern杂交证明BADH基因已整合到马铃薯基因组中并在转基因植株中转录和表达。测定表明对照植株没有BADH酶活性, 各转化株系在胁迫前后BADH酶活性近似, 在2~11 U之间。BADH酶活性与叶片的相对电导率呈一定的负相关(y= –3.7738x+57.083, r=0.989^**)。在NaCl和PEG胁迫下, 转基因植株生长正常, 株高比对照提高0.41~1.00 cm, 单株重量比对照增加10%~35%, 说明外源BADH基因的导入提高了马铃薯植株对干旱和盐碱的抗性。     

转甜菜碱醛脱氢酶基因水稻种子萌发和苗期耐盐性的研究

用0.0、3.0、5.0g/L NaCl对2个转甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因水稻51-22、52-7与受体亲本中花8进行萌发期盐胁迫试验.结果表明,盐胁迫下转基因材料受抑程度小于受体亲本,尤以52-7表现明显.用0.0、3.0、5.0g/L NaCl对51-22、52-7和中花8在幼苗期进行14 d盐胁迫试验.结果表明,低盐胁迫时幼苗受盐害较小,高盐胁迫时转基因材料耐盐性优于受体亲本;在盐胁迫7 d后,转基因材料体内脯氨酸含量明显高于受体亲本,同一品种随盐度增大,脯氨酸含量升高.     

野油菜黄单胞菌6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因的初步分析

野油菜黄单胞菌野油菜变种是发酵工业生产黄原胶的菌种,对该菌8004菌株全基因组序列进行分析,发现基因组中有两个编码6-磷酸葡萄糖脱氢酶的基因,编号分别为XC1977和XC4082,同源性分析显示这两个基因演绎的氨基酸序列只有36.3%的相似性。为了解这两个基因的功能,采用自杀质粒pK18 mob对XC1977和XC4082分别进行诱变,构建这两个基因的非极性突变体,对突变体表型初步分析,发现XC1977和XC4082分别突变后不影响细胞的生长繁殖,但对胞外多糖产量的影响则不相同,XC1977突变使胞外多糖产量降低56.3%,而XC4082突变基本不影响胞外多糖产量,表明8004菌株的两个zwf基因在细胞中的功能不同,XC1977与细胞的胞外多糖合成产量有关。     

Hypoglycemic effect of lupin seed γ-conglutin in experimental animals and healthy human subjects

A lupin seed γ-conglutin-enriched preparation was tested in a glucose overload trial with both murine models and adult healthy volunteers. The results with rats showed a dose-dependent significant decrease of blood glucose concentration, which confirmed previous findings obtained with the purified protein. Moreover, three test-product doses equivalent to 630, 315, and 157.5 mg γ-conglutin, orally administered 30 min before the carbohydrate supply, showed a relevant hypoglycemic effect in human trials. Insulin concentrations were not significantly affected. The general hematic parameters did not change at all.This is the first report on the glucose-lowering effect of lupin γ-conglutin in human subjects.