高羊茅胚性愈伤组织的高效诱导及其耐盐突变体筛选

以高羊茅Fine-lawn种子和下胚轴为外植体,分别在诱导培养基D1、D3、D5和D9上培养.下胚轴愈伤组织的出愈率除了在D1培养基上为51.3%外,在其他诱导培养基上均为100%.在D5培养基上继代3个月左右,从下胚轴获得了胚性愈伤组织.取在NaCl浓度为0.5%～3.0%的培养基上生长13 d的高羊茅胚性愈伤组织,分别测定其存活率、相对生长量、鲜干重比和脯氨酸含量.利用直接筛选的方法,将胚性愈伤组织分别放在含1%, 2%和3% NaCl的选择培养基上连续筛选60 d,在1% NaCl浓度下获得了耐盐的胚性愈伤组织并且获得了再生植株.再生植株能够在含有1% NaCl的Hoagland培养液中生长.     

提高培养温度建立水稻成熟胚再生体系

为了探索在较高温度环境中,以水稻成熟胚为外植体进行组织培养,是否能够提高水稻再生效率,本试验以"超2-10"和"中花11"两种粳型水稻为材料,设置了26℃和36℃温度环境,对两种水稻成熟胚进行愈伤组织诱导和继代培养,并完成整个再生过程.结果表明,36℃温度环境不会影响"超2-10"和"中花11"水稻成熟胚愈伤组织的诱导;尽管两种水稻在36℃环境生长的愈伤组织在继代培养中重量增幅低于26℃的愈伤组织,而且36℃环境培养的愈伤组织分化率也低于26℃的愈伤组织,但是,36℃诱导和继代培养的"超2-10"和"中花11"两种水稻愈伤组织再生率都高于26℃环境培养的愈伤组织,两种水稻的再生率分别提高105.15%和57.28%.     

外源激素在玉米离体培养中的作用研究

以玉米自交系黄早4、综31的幼胚为材料,对外源激素在玉米离体培养中的作用进行了研究。结果表明,2.0 mg/L的2,4-D可以诱导出高频率的胚性愈伤组织,而添加高浓度的6-BA不利于胚性愈伤的诱导;6-BA(0.5 mg/L)+KT(1.0 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)的激素组合对于胚性愈伤组织的分化明显优于其他的激素组合;单独使用1.0 mg/L的NAA有利于根的生长和发育,虽然NAA1.0 mg/L+多效唑2.0 mg/L的激素组合中,根的平均数量和平均长度不如单独使用1.0 mg/L的NAA,但是幼苗的移栽成活率二者无显著差异。     

玉米愈伤组织的遗传转化和对草丁膦抗性及植株再生的研究

以玉米自交系7922、P2和H99的胚性愈伤组织为材料,通过愈伤组织对草丁膦的敏感性实验,确定愈伤组织适宜选择压,并探讨了不同激素对愈伤组织分化的影响,用带有质粒PGBIloxAp.Bt.35sp.bar的根癌农杆菌LBA4404转化玉米愈伤组织,PCR检测证明,目的基因已整合到玉米基因组中。     

香蕉胚性细胞悬浮培养方法的改进

针对香蕉胚性悬浮细胞培养过程中存在的胚性愈伤组织的诱导率低、周期过长、胚性易丢失等问题, 以“苹果蕉”及“威廉斯”香蕉的未成熟雄花为试验材料, 对香蕉胚性愈伤组织的诱导、 悬浮培养的理化条件进行改进。 结果表明： （1）光照条件较暗培养更有利于诱导理想的香蕉胚性愈伤组织; （2）M1培养基中加入酪蛋白和脯氨酸有利于胚性愈伤组织的诱导; （3）用微孔板代替三角瓶悬浮培养, 有利于悬浮细胞分裂增殖, 而且可减少污染的可能。     

利用细胞工程技术培育玉米耐盐自交系及单交种

以玉米骨干自交系黄早 4、齐 319和 8112的幼胚为外植体 ,用含有 10g/LNaCl的培养基筛选获取耐盐愈伤组织。耐盐愈伤组织分化出幼苗 ,自交结实。子一代通过水培进行耐盐性测定 ,选择耐盐植株 ,对其后代继续进行耐盐性鉴定、筛选 ,获得耐盐突变体。以农艺性状稳定和耐盐性稳定的自交系为材料 ,组配出耐盐杂交种N2 - 1×N1- 4A和 8112 - 1×N1- 6A等杂交组合。盐碱地试验表明 ,这些组合适合于在中度盐碱地种植 ,且在生长后期可以用 5 0 %海水灌溉     

香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除

[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法。[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250~500μm的不锈钢筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进行实时观测。[结果]运用孔径在250~500μm的不锈钢筛网能够有效去除悬浮细胞系中的褐化坏死组织和分生组织小球,但如果在悬浮细胞系诱导后3 d立即进行去除,则易使之后胚性细胞的增殖变得困难;如果在悬浮细胞系诱导后14 d左右去除,则褐化坏死组织释放的酚类物质很容易损伤并杀死正在增殖的胚性细胞。悬浮细胞系诱发后7 d是一个比较恰当的过滤去除时间点。[结论]在培养的过程中,将悬浮细胞系定期放置在倒置显微镜下进行观察,用移液器能将液泡化的细胞和胚去除。在操作前,需将倒置显微镜放置在超净工作台内,用紫外线长时间照射进行表面灭菌。这样即可以将悬浮细胞系中的非胚性成分过滤去除,又能预防感染。     

盐胁迫水稻愈伤组织的生理生化指标检测

对水稻幼穗外植体诱导产生的愈伤组织进行盐胁迫筛选后,经对连续继代３～４次的愈伤组织生理生化指标检测,结果表明：在一定盐浓度下,水稻愈伤组织会产生积极的防御反应,通过积累脯氨酸、增强酶活性和表达新的同工酶来适应盐胁迫环境。一系列生理生化变化为水稻抗盐愈伤组织筛选提供了参考指标。     

红皮云杉胚性愈伤组织保持与增殖阶段影响因子的筛选与分析

通过对红皮云杉胚性愈伤组织保持与增殖阶段各影响因子的筛选与分析,确定出适宜该阶段培养的培养基为附加5g·L-1肌醇、0.21mg·L-1BA、0.20mg·L-1KT、1.85mg·L-1NAA、20g·L-1蔗糖、450mg·L-1L-谷氨酰胺、750mg·L-1水解酪蛋白、2g·L-1凝胶(Gelrite)的改良RJW基本培养基,在22℃条件下暗培养。结果表明:以固体/滤纸交替培养方式的增殖率、增殖量最高,胚性愈伤组织诱导率与增殖率、增殖量之间存在正相关关系。随着继代次数的增加,增殖率和增殖量却逐渐下降,不同的细胞系下降的速率也不相同。     

石刁柏胚状体诱导与影响因素的研究

本试验对石刁柏体细胞胚及花粉胚状体诱导进行了研究。试验表明，不同基因型对胚状体发生频率影响很大，接种材料不同会导致胚性愈伤组织形成上的差异，外源物质及植物激素种类、配比对胚状体诱导、分化起着重要作用。ＭＳ培养基附加６％蔗糖，水解酪蛋白６００ｍｇ／Ｌ，谷氨酰胺７００ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．８ｍｇ／Ｌ，胚性愈伤组织诱导率最高；而ＭＳ＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋嘧啶醇０．８ｍｇ／Ｌ培养基，胚状体诱导效果最佳，平均每块愈伤组织形成体细胞胚１．７２个，花粉胚状体１．４６个。