改良CTAB法提取核桃总RNA试验

从植物组织中提取高质量的RNA是进行基因克隆和基因表达分析的基础。不同植物的组织由于组成成分的差别,其RNA的提取有不同的难点。本试验针对核桃嫩叶内含物复杂的典型特点,在对比各种提取方法的特点及总结他人研究的基础上改良了CTAB法。此方法提取的核桃嫩叶总RNA的电泳结果可见清晰完整的条带,表明改良CTAB法能有效去除多糖和多酚以及色素等次生代谢物的污染,提取RNA纯度较高、完整性好,易于进行RT-PCR和cDNA文库的构建。此方法简单易行而且所用试剂成本较低。     

DNA-AFLP分析用辣椒基因组DNA提取方法的优化

采用SDS法、CTAB-1法和CTAB-2法提取辣椒(Capsicu mannuum)叶片DNA,通过紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳检测,证明CTAB-2法所提取DNA的质量和纯度较高;以此DNA为模板进行DNA-AFLP分析,特征条带清晰、基本无脱尾,适用于DNA-AFLP等分子生物学研究。     

瘤胃微生物总DNA快速提取法研究

本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取植物的CTAB法进行改进而成。与经典反复冻融 SDS/蛋白酶K裂解法相比,该法可在数小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA,经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行检测,证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求。     

不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究

以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好.     

核桃不同组织高质量总RNA的提取方法

利用改良CTAB法,分别从富含多糖、多酚及黄酮类物质的核桃叶、绿果、茎、种子和根中成功提取高质量的总RNA。经电泳、紫外分光光度计、RT-PCR和Northern杂交分析,结果显示,各组织的总RNA至少有2条清晰的电泳条带,产量可达174μg/g,A260/A280比值在2.0左右,通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18S基因的cDNA片段,而且以18S基因为探针在不同组织中也分别获得清晰的Northern杂交信号,说明利用此法分离核桃各组织的RNA纯度和浓度完全符合后续分子生物学研究的要求。     

一种制备富含多糖丝状真菌基因组DNA的方法

采用改进CTAB法提取的红曲霉、镰刀菌和微小毛霉基因组DNA数量和质量都较为理想,DNA产量在90～130 μg·g-1湿菌体,大小均在21kb.4℃可保存4～6个月.用该方法提取的基因组DNA为PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确.分别用限制性内切酶SacⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶解红曲霉M34均能得到较为均一的完全酶切带.该方法快速、简便,成本低,适合富含色素和多糖的真菌的基因组DNA的提取.此外,还适合真菌分子育种等的筛选和样本量大的PCR检测.     

果梅基因组DNA提取方法的比较及ISSR分析

以果梅品种鸳鸯梅、皇后梅和肖山选的幼嫩叶片为试材,提取果梅的DNA.针对果梅组织细胞体内含有较多的酚类、糖类及萜类等次生代谢物质的特点,采用传统的CTAB法、改良的CTAB法和改良的SDS法提取果梅基因组DNA,并比较其提取效果.结果表明:改良的CTAB法可获得高质量、高得率的基因组DNA,OD260/280比值在1.80左右.通过基因组DlNA-ISSR分析,完全满足试验要求.并进一步对改良的CTAB法的关键步骤作出具体的分析讨论.     

基于正交试验设计优化真菌DNA提取的CTAB法

【目的】从统计学的角度明确CTAB法提取真菌DNA过程中各因素的影响,确定CTAB法提取真菌DNA的最优方案.【方法】本试验以菌体量、破壁、抽提、沉淀为考察因素,以核糖体RNA(rRNA)内转录间隔区(ITS)和28SrRNA基因序列的PCR反应扩增率为指标,用SPSS软件设计混合水平正交试验L25(5×34)并进行方差分析.【结果】采用CTAB法提取真菌基因组DNA时,菌体细胞破壁和沉淀DNA这两个步骤对真菌DNA提取效果的影响最大,其次是抽提步骤,在100mg范围内,菌体量对DNA的提取效果影响不大.【结论】采用CTAB法提取DNA时,挑取40~80mg菌体,用带有无菌塑料钻头的手电钻研磨进行菌体细胞的破壁,研磨时可先加入液氮冷冻后再进行研磨,或直接在冰上研磨,酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,等体积异丙醇沉淀DNA,可以得到较好的DNA提取效果.     

青麻总DNA的简易提取和鉴定

青麻成熟组织中酚类、黃酮类等次生代谢物较多,要从中提取出高纯度的DNA比较困难。本研究利用黄酮等次生代谢物未大量合成的青麻幼芽为材料,采用简化CTAB法提取青麻总DNA,可以获得高纯度、高产量的DNA。经实验鉴定,DNA纯度符合分子遗传实验要求。该方法快速、简便,也适于其它麻类作物总DNA提取。     

几种内生真菌DNA提取方法的比较

通过3种内生真菌DNA提取方法的比较,即CTAB法、SDS法、改良的CTAB法,结果表明三种方法都能得到目的DNA,而且得率都较好,但改良的CTAB法效果最好,不仅DNA纯度高且质量也好.用改良的CTAB法所提取的DNA作为模板,进行PCR扩增,得到了清晰的、单一的扩增普带,完全可用于酶切、测序等后续实验.