蟠桃果实总RNA提取方法的研究

[目的]筛选获得提取蟠桃果肉中总RNA的适宜方法.[方法]以盛花后100 d的蟠桃为材料,采用Transplant plus植物总RNA提取试剂提取法、RNAisoTM试剂盒法、改良SDS法、改良CTAB法等四种方法提取总RNA.[结果]两种试剂盒法提取的总RNA质量差,有严重的基因组污染;改良SDS法提取物中含有大量的多糖;采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰无降解,无基因组污染.经过RT - PCR和Northern blot检测后,表明该RNA能够满足后续分子生物学操作的要求.[结论]蟠桃果实总RNA适宜提取方法-改良CTAB法的确定为后续果实发育分子生物学的研究奠定了基础.     

改良CTAB法在核桃叶片基因组DNA提取中的应用研究

核桃叶片中酚类、多糖和蛋白含量丰富,影响了基因组DNA的提取。以CTAB法为基础进行了改良,并对核桃叶片基因组DNA进行提取。结果表明,通过在研磨时添加PVPP后的改良CTAB法不仅操作简单,经济高效,而且去除多糖和多酚类物质彻底,能成功用于核桃的基因克隆研究,在核桃DNA提取中值得大力推广使用。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文)

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

金针菇DNA提取方法比较

[目的]筛选有效的金针菇DNA提取方法。[方法]以培养的金针菇菌丝体为材料,分别采用CTAB法和试剂盒法提取金针菇DNA,并用琼脂糖凝胶电泳法和分光光度法检测所提取DNA样液的浓度与纯度。[结果]分光光度结果及电泳鉴定表明CTAB法提取的DNA产量较大但杂质多,试剂盒法提取的DNA产量小但杂质少。[结论]CTAB法和试剂盒法均可用于金针菇DNA的提取,如后续试验对提取的DNA纯度没有特别要求,可用CTAB法替代试剂盒法。     

Specific detection of Phytophthora cactorum in diseased strawberry plants using nested polymerase chain reaction

Validated protocols for DNA purification and PCR amplification are reported for detection of Phytophthora cactorum in diseased strawberry plants. To remove PCR inhibitors, necrotic strawberry tissues were soaked in 5% alconox solution for >12 h before DNA extraction, and the extracted genomic DNA was embedded in an agarose gel chamber and subjected to electrophoresis. The purified DNA was amplified reliably by PCR. Nested PCR was used to detect a portion of the rRNA gene of P. cactorum in samples. In the first round of PCR, primers ITS1 and ITS4 amplified fragments of varying sizes from total genomic DNA from diseased strawberry plants. In the second round of PCR, a 1:25 dilution of the first-round PCR products was used as template with two P. cactorum- specific primer pairs (BPhycacL87FRG and BPhycacR87RRG, which amplified a 340-bp fragment and a 480-bp fragment from the rRNA gene; and BPhycacL89FRG and BPhycacR176RRG, which amplified a 431-bp fragment). Validation tests using culture-based isolations as a standard for comparison indicated that the DNA purification and PCR primers and amplification protocols were reliable and specifically amplified a portion of the rRNA gene of P. cactorum from necrotic root, crown and petiole tissues of strawberry naturally infected by the pathogen.     

一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法（英文）

[目的]建立一种快速微量提取柑橘基因组DNA的方法。[方法]采用优化的CTAB微量提取法,以20.0,10.0,5.0,2.5mg的早期杂种胚为材料进行基因组DNA的提取,并对其DNA进行质量检测和SSR验证。[结果]该方法简单易行,所需材料少,提取的DNA纯度较高,OD260nm/OD280nm在1.800～2.000,可满足SSR等以PCR扩增为基础的试验需要。[结论]建立的方法可以用于快速微量提取柑橘基因组DNA。     

魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较

本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。     

CTAB法提取瓜叶菊不同组织基因组DNA的研究

获得高质量DNA是进行分子生物学研究的基础。通过CTAB法提取瓜叶菊叶、茎、花的基因组DNA,提取的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,分子量接近21Kb。以提取的DNA为模板,用一对引物扩增瓜叶菊中与花色相关的特异基因,得到条带单一、大小与已知一致,说明提取的DNA可以满足相关的分子生物学研究。CTAB法提取瓜叶菊不同组织的DNA产率不同,其中叶的DNA产率最大,茎的产量居中,花的最低。     

果树果实总RNA提取方法的改良研究

植物总RNA的提取尽管已成为一种常规的技术,但由于果树果实材料的特殊性,其RNA的提取至今没有一种比较理想的技术和方法。本研究在以往CTAB方法的基础上,对其进行改良以探讨一种适于果实总RNA提取的通用方法,从而为果实分子生物学研究奠定基础。研究结果表明,在提取缓冲液中加入PVP和β-巯基乙醇,使其终浓度分别为16%和3%,在匀浆上清液中加入1/3体积5 mol/L KAC(pH4.8),可有效地提高RNA提取的质量。利用改良后的CTAB法成功地从苹果、桃、草莓和葡萄果实中提取出总RNA。经过紫外、电泳、反转录分析结果表明,该改良的CTAB法是一种适合果实总RNA提取的首选方法。     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度，关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验，对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进，即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2．5％CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260，OD2踯比值检测结果为平均1．824，而且DNA得率也较高，证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果．本文还讨论了高庸量DNA提取应注意的有关技术环节．