利用CTAB法提取灵芝属部分菌株基因组DNA

灵芝是著名的药食兼用真菌之一。现代医学证明,灵芝含有多种生理活性物质,能够调节、增强人体免疫力,对神经衰弱、风湿性关节炎、冠心病、高血压、肝炎、糖尿病、肿瘤等有良好的协同治疗作用。最新研究表明,灵芝还具有抗疲劳,美容养颜,延缓衰老,防治艾滋病等功效。目前,随着灵芝制药需求量的不断增加,市场上灵芝生产菌种的混乱现象越来越严重。随着分子生物学及其相关生物技术的发展,人们更加注重从分子的角度对其进行研究,灵芝菌株基因组DNA的提取就是在分子水平上对其进行系统分析与研究的基础性工作。现将相关研究结果报告如下：     

栗蚕基因组DNA提取方法比较试验

栗蚕蛹中含有大量的脂肪和蛋白质类物质,这些物质易与DNA结合形成粘稠的胶状物,影响栗蚕基因组DNA的提取。针对上述问题,本研究采用十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)消化法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取栗蚕基因组总DNA进行比较试验。结果表明:CTAB法提取的DNA产量高;SDS-PK法提取的DNA质量好。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

相思基因组DNA提取及其RAPD初步分析

以马占相思、大叶相思、厚荚相思幼苗的叶片为材料,采用SDS法、改良SDS法和改良CTAB法进行了基因组DNA的提取并对DNA提取方法作了比较,结果表明改良CTAB法提取效果最好。同时利用改良CTAB法提取出的DNA为模板进行了RAPD分析,鉴别了不同树种之间的多态性。其中有11个引物共扩增出117条谱带,树种间多态性比率为54.7%,遗传多态性明显高于种内。     

一种东北虎全血DNA抽提的方法

以8只东北虎全血为材料，用CTAB自配细胞裂解液和细胞沉淀液，采用改进的方法提取基因组DNA。结果表明，提取的基因组DNA纯度高，用琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA，主带清晰、无拖尾现象。     

高山离子芥愈伤组织总RNA的提取方法研究

为了探寻提取高山离子芥（Chorispora bungeana）总RNA的最佳方法和条件。本研究分别采用改良的Trizol法、柱式离心法和CTAB法提取高山离子芥RNA,比较其得率、纯度、完整性和反转录后的PCR扩增效果;并对RNA的保存以及去RNA酶的处理进行了优化。结果表明,改良的Trizol法提取的RNA纯度和得率高、完整性好,转录后的PCR扩增效果好;RNA提取后室温保存8 h内降解较少,-80 ℃至少保存30 d。枪头、离心管等去RNA酶处理不完全会导致大量RNA降解,电泳槽等工具及电泳液的RNA酶灭活不彻底会使RNA在电泳过程中降解。     

SSR fingerprinting Chinese peach cultivars and landraces (Prunus persica) and analysis of their genetic relationships

Thirty-two Chinese peach landraces/cultivars, a major subset of the core Chinese peach collection, were fingerprinted using seven pairs of SSR primers to assess their genetic diversity and relatedness. The seven primer pairs detected eight loci and revealed an allele richness of 3.125 (average alleles per locus), an expected heterozygosity (He) of 0.450, and a Shannon index of 0.728 among the landraces/cultivars. This level of genetic diversity is lower compared to other fruit trees and Prunus congenus species (cherry and apricot), but it is comparable to previous reports in peaches. A greater level of genetic diversity was observed in landraces than in cultivars, indicating that peach landraces are valuable for germplasm collection. All cultivars and landraces, except two, were unambiguously identified based on multi-locus genotypes. Eight unique alleles were detected among this group of Chinese peaches. UPGMA clustering analysis separated the 32 cultivars/landraces into two distinct groups, which is generally in accordance with the known pedigree information. The results provide accurate genetic information for defined acquisition policy in the repositories, improving the integrity and efficiency of germplasm management and giving evidences for protection of breeder's intellectual rights.     

银杏RNA的提取

采用CTAB法提取银杏叶的RNA,结果表明:抽提的RNA经电泳检测,可见28SrRNA和18SrRNA两条主带;紫外吸收值测量,A260/A280接近2.0;反转录合成的cDNA经RAPD扩增,出现清晰的条带,这些说明提取的RNA纯度高,质量好。此方法简便易行,成本也较低,适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取。     

CTAB法高效提取苹果叶片DNA的研究

为研究CTAB法在正常条件和逆境条件下,从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的苹果树叶片中分离出高质量的基因组DNA,以抗旱能力较强的八棱海棠(Malus micromalusRehd. )和抗旱性较弱的平邑甜茶(Malus hupehensis pamp Reld.)幼苗为试验材料.用20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)模拟干旱,采取CTAB提取缓冲液,按一定比例加入PVP和β-巯基乙醇,用Tris平衡酚-氯仿-异戊醇除去蛋白质及杂质,在粗提时用异丙醇沉淀DNA,并用DNA洗液(10 mmol/L醋酸铵,75%乙醇)洗涤DNA,在纯化时用乙醇沉淀DNA,且没有加入RNase去除RNA的方法,分别提取2个品种正常和干旱胁迫的苹果属叶片总DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测.结果表明:此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,得到高质量、特征带形清晰的大量DNA.并就提取过程中遇到的问题,提出了相应的解决办法.     

华山松胚乳不同提取方法比较

以华山松（Pinus armandi）种子胚乳为实验材料,分别采取经典CTAB法、简易CTAB法和SDS法微量法提取华山松基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计分析、标准差和标准误、卡方检验和SPSS软件显著性分析,将它们在DNA产量、质量和方法稳定性等方面的优缺点进行总结。得出结论：通过对数据进行卡方检验,所有数据都是差异是由方法所引起的,不是偶然误差所引起的;相比于经典CTAB法,SDS微量法和简易CTAB法的（OD260-OD320）/（OD280-OD320）标准差和标准误相差不大,数据相对精确,结果相对精确;通过SPSS软件分析分析,简易CTAB法和其他2种方法相比存在显著差异性,SDS微量法与经典CTAB法的P〉0.05,差异不显著,提取效果相差不大。综上所述：相比于简易CTAB法,SDS微量法与经典CTAB法的（OD260-OD320）/（OD280-OD320）都接近2.0,可能存在RNA污染污染,DNA的浓度也相对较低,SDS微量法与经典CTAB法不适合华山松胚乳DNA提取。简易CTAB法的（OD260-OD320）/（OD280-OD320）比率很接近1.80,不存在蛋白质和RNA污染,DNA纯度也最好,DNA浓度最高,比较适合华山松胚乳DNA提取。