5种方法提取真菌基因组DNA作为PCR模板效果的比较

本研究旨在比较CTAB法、改良CTAB法、SDS法、氯化苄法和Chelex-100法提取真菌DNA作为PCR模板的效果,以生长速率、菌落形态差异较大的11个煤污病菌属真菌为研究对象,以核糖体RNA(r RNA)基因中的内转录间隔区(ITS)序列和28S r RNA基因部分序列的扩增率为指标,采用SPSS软件对结果进行方差分析。结果表明,CTAB法和改良CTAB法适用真菌范围最广,分别有7个和9个属真菌的扩增率都大于70%且无显著性差异;氯化苄法和Chelex-100法适用范围居中,分别有6个和8个属真菌的扩增率较高且无显著性差异,扩增率分别大于70%和50%;SDS法适用范围最窄,有6个属真菌的扩增率高于50%且无显著性差异。大多数煤污病菌至少有2种及以上的DNA提取方法能够取得较好的效果,但链丝孢属真菌只有用氯化苄法提取DNA效果最好。采用改良CTAB法结合氯化苄法,能够满足所有供试煤污病菌类群真菌提取基因组DNA用作PCR反应模板的需要。     

棉花基因组DNA快速提取方法改良

选择2种简化的棉花基因组DNA提取方法并进行适当精简改良后与传统CTAB提取法进行实验对比的结果显示,改良SDS-CTAB法所提DNA得率较高,纯度好,但其操作步骤相对复杂。改良CTAB法操作更加简捷,但DNA得率相对较低,所得DNA溶液浑浊度较高。相对于传统的CTAB提取法,两种改良方法都能够更加快捷的得到足量且纯净的基因组DNA,完全能够满足转基因后代PCR筛选检测的要求。     

4种高粱基因组DNA快速提取方法的比较

[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少,纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后两种方法提取的DNA降解严重,纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。     

CTAB法在金黄色葡萄球菌DNA提取中的应用

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aures（以下简称金葡菌）是革兰氏阳性球状菌,直径0．8～1．0μm,呈葡萄状排列,有些菌株具有荚膜或黏层,广泛分布于空气、土壤、水、食具以及患有化脓性皮肤病人畜的皮肤上。金葡菌是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种主要细菌,食品受其污染后,不仅腐败变质,     

基于农用氢能的Ag/Co-B/CTAB催化氨硼烷产氢性能研究

氢能作为推动全球能源转型的一种清洁能源,逐渐成为世界能源领域的研究热点,研究发现氢气在农业能源应用、植物信号感知等领域具有重要意义.制备了一种高效催化剂(Ag/Co-B/CTAB)用以催化氨硼烷(AB)水解制氢,通过FTIR、XRD、XPS等技术表征Ag/Co-B/CTAB催化剂的物理化学性质,分析不同温度、催化剂含量...     

富含多糖葡萄风信子花瓣总RNA提取方法研究

在普通CTAB法与SDS法提取RNA的基础上,从去除多糖和DNA污染两个方面进行优化,筛选出适于富含多糖类葡萄风信子花瓣RNA提取的方法,经检测OD260/280值在1.8～2.0之间,电泳28S条带和18SrRNA条带都很清亮,比值约1.5.对改进的CTAB法提取的总RNA进行RT-PCR能扩增出所需目的条带.有效去除多糖类物质污染对于富含多糖类花瓣组织RNA提取很重要.     

咖啡叶片DNA提取方法的比较研究

以咖啡成熟叶片为材料,进行多种DNA提取方法比较研究,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测所提的DNA样品。结果表明,CTAB改良Ⅰ和CTAB改良Ⅱ均可用于咖啡叶片的DNA提取,尤其是CTAB改良Ⅱ法,提取的DNA产量较CTAB改良Ⅰ高,能满足后续分子生物学研究的要求。     

胡枝子高质量RNA的提取及ALMT基因片段的克隆和表达分析

针对木本植物胡枝子组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点,采用改良的CTAB法,成功地从胡枝子组织中提取了总RNA。所提取的胡枝子总RNA OD260/OD280值介于1.9~2.1之间,产率介于100~250μg/g之间。采用该方法提取的胡枝子总RNA,经过RT-PCR成功地克隆到了胡枝子ALMT基因片段,克隆得到的胡枝子ALMT基因片段序列与已知ALMT基因序列之间具有较高同源性,经半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR表达分析,证明该基因在根中表达且受铝诱导。试验结果表明利用改良的CTAB法提取的胡枝子总RNA样品质量较高,能够用于基因的半定量和定量表达分析。     

"顽拗"植物春石斛基因组DNA的提取研究

提取“顽拗”植物春石斛的基因组DNA,并对其进行质量检测。［方法］采用普通CTAB法、试剂盒法和改良CTAB法提取10个春石斛品种的基因组DNA,然后分别用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳法和荧光AFLP法对3种方法所提取的基因组DNA质量进行检验。［结果］改良CTAB法所提取春石斛基因组DNA得率较高,基本排除了春石斛体内多糖等次生代谢物质对基因组DNA质量的干扰,完全能满足AFLP等分子生物学试验对DNA质量的要求;其他2种方法所提取的基因组DNA则不能满足试验要求。［结论］改良CTAB法为较好的适合春石斛基因组DNA提取的方法。     

不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响

比较了3种RNA提取方法提取石榴果皮RNA的效果。结果表明:改良CTAB法提取的总RNAOD值在1.91左右,得率为48μg/g;Trizol法提取总RNAOD值在1.15左右,得率为86μg/g;试剂盒提取得到的总RNAOD值在1.24左右,得率为124μg/g。分别反转录为cDNA,根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列,设计简并引物进行RT-PCR,其中只有改良CTAB法得到的cDNA有扩增条带。表明改良CTAB法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮总RNA的提取。