ELISA操作要求及质量控制

酶联免疫吸附试验（ELISA）是医学检验的免疫学检验方法之一,已广泛应用于对病原微生物的免疫学检查试验中。用ELISA法检测是目前最常用的实验室检验方法之一。与任何实验室检查方法一样,ELISA存在少量的假性结果（假阳性、假阴性）,对临床诊断和治疗会有一定影响。目前,ELISA已经普遍使用洗板机、全自动酶标分析仪,使试验数据的准确性和真实性都有明显提高。但试验设备的自动化并不代表试验数据100％可靠,还要求试验人员具备扎实的专业知识和熟练的试验操作技术,并且要对实验室的内外环境进行适时监控,从试验软件、仪器设备、操作程序、人员素质及环境监控等方面确保试验结果的准确性和可靠性。     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用

为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。     

植物香豆素生物合成途径及关键酶基因的研究现状

香豆素是广泛存在于自然界的有机杂环化合物,具有抗感染等多种生物活性,是我国许多中草药材中的有效成分,如独活等多种常用中草药含有香豆素衍生物,香豆素类化合物是具有显著生物活性的物质,具有作用机制特殊等特点。香豆素对植物生长发育具有重要作用,许多香豆素化合物在植物中含量较低,对天然香豆素类化合物化学合成成为研究热点。综述香豆素合成途径及关键酶基因研究进展,分析总结香豆素研究问题,展望未来研究方向。     

油菜籽皮发酵饲料添加剂——纤维素酶

本研究对绿色木霉116的发酵条件和无机盐配方进行了正交试验优选。试验结果表明产纤维素酶的最佳条件是:接种量为2%,油菜籽皮:稻草:麸皮=3:2:5;水分:干料=1:1;装量为5%;无机盐固态发酵的最佳配方是:(NH4)2SO40.5%,KH2PO40.4%,MgSO40.04%,CaCl2·2H2O0.05%。产酶酶活可达242U/g鲜糟。     

金钱豹猫瘟热疫苗免疫后血清抗体水平的检测

金钱豹经2种猫瘟热灭活疫苗和1种弱毒疫苗免疫接种后,间隔不同的时间采血分离血清,用SPA-ELISA和HI两种方法测定猫瘟热血清抗体效价。结果猫瘟热灭活疫苗和弱毒疫苗均能有效诱导金钱豹产生较高效价的抗体,抗体持续时间相对较长。3种疫苗免疫效果比较显示,美国Fort Dodge猫三联灭活疫苗免疫效果最好。在猫瘟热血清抗体检测中,SPA-ELISA和HI的吻合率达到93%以上。     

应用单克隆抗体的免疫组织化学法研究雏鸭体内鸭瘟病毒的分布

本实验应用了免疫组织化学的单克隆抗体间接酶标染色法，对人工感染鸭瘟病毒雏鸭的组织切片进行染色观察。旨在研究病毒在鸭体内分布，对其进行定位。研究结果显示，鸭的心脏、肝脏、脾、胸腺、肠、法氏囊、胰、肺、肾等组织的细胞浆内均出现了染色的特异阳性反应物。结果表明，鸭瘟病毒广泛分布于感染雏鸭的各种组织器官，并造成一定的组织病理变化。     

溶菌酶在饲料中的应用

正溶菌酶(Lysozyme)又称胞壁质酶或N-乙酰胞质聚糖水解酶,是动物体内一种非特异性免疫因子,具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力、促进双歧杆菌等有益菌增殖的作用。本文介绍了溶菌酶的特性、分类,重点综述了溶菌酶作为饲料添加剂在猪、鸡、鸭以及反刍动物等饲料中的应用。1溶菌酶的特性溶菌酶,又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,能水解肽聚糖中的N-乙酰葡萄糖和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键,以此破坏细菌的细胞壁,具有较强的抑菌抗菌活性。溶菌酶是一种白色、微白色结晶型或无定型粉末,无臭、味甜且易溶于     

运用RT-PCR／酶切技术快速检测猎传染性胃肠炎病毒

猪传染性胃肠炎（TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪的一种急性高度接触性传染病,临床特征为严重腹泻、呕吐和脱水,不同年龄和品种的猪都易感,1513龄以内的仔猪病死率很高,尤其是10龄以内的仔猪死亡率可达100％。本试验的目的在于建立快速检测TGEV的RT—PCR／酶切方法,为该病的诊断、检测和流行病学调查研究提供更为敏感和可靠的手段。     

日本脑炎诊断技术研究进展

日本脑炎是一种严重危害养猪业以及人类健康的虫媒病,每年造成大量的经济损失。为了更好地控制与预防该病,及时的诊断尤为重要。用于日本脑炎诊断的技术主要有病毒分离与鉴定、血清学诊断技术及分子生物学技术等。由于每种诊断技术都有其优势和不足之处,所以应根据具体情况选择合适的诊断方法。论文就各种诊断技术的原理、特点进行概述,并对日本脑炎诊断技术的发展趋势进行展望。