MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性（摘要）

[目的]建立一套适合于实验室的高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]首先,选用乙醇为溶剂对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术8种中草药植物材料进行浸提。然后通过MTT法对8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行初测。试验采用二甲基亚砜（DMSO）与甘氨酸-NaOH缓冲液作为溶剂,消除剩余培养基对吸光值的影响。为确保细胞株最大吸收峰位置不变,酶标仪采用570 nm波长测定OD值。为验证筛选出的3种物质对癌细胞的抑制作用,以活性物质浓度为横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标,描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。[结果]倒置显微镜下观察3种细胞阶段的形态：正常状态下,细胞的透明度大、折光性强、轮廓不清;当细胞受污染时,折光性变弱,胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质,细胞之间空隙加大,细胞变得不规则,失去原有特点;而受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但其萎缩,边缘清晰化;三者之间存在一定区别。MTT法培养板定性检测显示,柴胡、莪术、甘草细胞培养孔内的液体颜色都较浅且比较均匀,可见,它们对细胞生长具有明显的抑制作用。而半边莲培养孔内液体颜色深浅不一。还有一些培养孔内液体颜色较深,如卤地菌、蜜蒙花、地榆和旱芹,表明它们对细胞生长没有明显的抑制作用。进一步定量计算表明,浓度为1.0～1.5 mg/ml的甘草乙醇浸提液（ESCG）、莪术乙醇浸提液（ESCC）和柴胡乙醇浸提液（ESCB）对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%。甘草、柴胡和莪术3种物质的抑制作用曲线结果也验证了它们对细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制程度与浓度呈正相关。[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。     

肝癌细胞系中Runx3基因表达及启动子区异常甲基化分析

目的：通过检测6种肝癌细胞中Runx3基因异常甲基化状态及表达情况,探讨药物5-aza-2＇-deoxycytidine（decitabine）激活Runx3基因重新表达的能力及对肝癌细胞生长的影响。方法：采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术分别对6种肝细胞癌细胞系Runx3基因启动子区域甲基化状态进行检测,同时采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测5种肝癌细胞中Runx3的表达情况及药物5-aza-2＇-deoxycytidine处理其中3种肝癌细胞前后Runx3表达变化。结果：6种肝癌细胞系中,有3种细胞Runx3基因启动子区域存在甲基化异常,药物5-aza-2＇-deoxycytidine处理3种肝癌细胞后,Runx3基因明显表达或表达活性增强。结论：启动子区异常甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与肝细胞癌发生早期密切相关,可作为肝细胞癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

新城疫强毒株体外诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的试验研究

新城疫病毒(NDV)是副黏病毒科腮腺炎病毒属的病毒,主要感染禽类,对人可引起发热等轻微症状。其基因组是约为15kb的单股负链RNA,NDV只有一个血清型。目前国外研究表明,NDV溶肿瘤株73     

X光结合B超诊断肝癌晚期病犬

随着宠物诊疗技术和设备的逐渐完善,一些宠物体内外的肿瘤可以通过X光和B超得以发现,并通过病理切片判定肿瘤的性质和可能的生发细胞,为宠物肿瘤病的研究提供临床资料。本文就是对临床检查怀疑患腹腔恶性肿瘤的金毛,采取腹部X光摄影结合B超诊断为肝癌病例的报告,为以后相关病例的诊断和对肿瘤的发生率的统计提供参考。     

竹节香附素A抗肝癌作用机制的研究进展

竹节香附素A(RDA)是中药两头尖中主要抗肿瘤活性的单体成分,其在抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞血管生成,以及联合化疗的协同增效作用等方面具有显著作用,搜集并分析近年来竹节香附素A抗肝癌作用机制的相关文献,综述竹节香附素A抗肝癌作用机制的研究情况。     

中医中药治疗晚期肝癌48例体会

原发性肝癌是多种因素所致的肝细胞或肝内胆管上皮细胞所发生的癌肿。其治疗有多种措施,包括手术、放射治疗、化学治疗、免疫治疗和中医中药治疗等。笔者自1992~2005年收治肝癌68例,其中48例晚期病人采用中医中药等综合治疗,治疗后1年生存率30.9%,现报告如下:1临床资料48例中男     

JA1体外诱导HCC细胞凋亡的实验研究

采用噻唑蓝(MTT)还原法,测定了梯度浓度的某植物种子粗提物JA1对人肝癌细胞株HCC增殖作用的影响;同时采用流式细胞术、DNA凝胶电泳和透射电子显微镜技术,在体外观察了JA1对HCC细胞凋亡的诱导作用。结果显示,JA1可显著抑制肝癌细胞HCC的增殖,而且这种抑制有浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞仪分析表明,经JA1作用后的肝癌细胞HCC检测标本中有明显的DNA低含量颗粒(“亚G1期”峰);凝胶电泳呈现出典型的DNA梯形条带;电镜下出现细胞凋亡典型的形态学改变。     

中药材云芝被仓储害虫危害的初步调查

中药材云芝(彩绒革盖菌、杂色云芝)Coriomus versicolor(L.:Fr.)Quel.属多孔菌科革盖菌属. 云芝具有较高的经济价值,云芝入药能去湿、化痰,治疗肝炎、小儿痉支炎有疗效.云芝还可做为肝癌免疫治疗的药物.菌丝体提取的多糖和从发酵液中提取的多糖均具有强烈抑癌性.但云芝在储藏过程中易受仓储害虫危害.2003年10月28日在由吉林省汪清市调入的一批云芝6t,欲出口朝鲜,该批云芝自野外采收后仓储时间达2个月之久,检疫中发现仓储害虫活成虫危害严重,我们进行了初步观察并做了灭虫处理试验.     

川牛膝多糖联合维生素C体外抑制HepG-2肿瘤细胞活性的作用

为了解川牛膝多糖联合维生素C抑制肿瘤细胞活性作用,采用超声波提取法从川牛膝根中提取川牛膝多糖(RCP),经Sevage法除去蛋白,并采用30%双氧水脱色、浓缩、冻干,得到川牛膝粉针剂,通过苯酚硫酸法制作葡萄糖标准曲线,进而测得多糖含量。体外联合维生素C作用于肝癌HepG-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法研究对HepG-2细胞的抑制作用。结果表明,川牛膝多糖与维生素C均可抑制肝癌HepG-2细胞的增殖,当多糖质量浓度为5、50、100、200 mg/mL时,对肝癌HepG-2的抑制率分别为19.7%、62.1%、59.1%、65.1%。当维生素C的浓度为0.1、0.2、0.3、0.4 mmol/L时,对肝癌HepG-2的抑制率为10%、11%、12%、54%。研究结果提示两者对肿瘤的抑制均呈剂量依赖性,当两者联合用药时,两者呈协同增效抗肿瘤作用,随着两者浓度的增加抑制率逐渐增强,对HepG-2细胞的最大抑制率可达84.2%。