西门塔尔牛bLF-exon11基因多态性及其与乳房炎易感性和部分乳性状的相关分析

为了探讨西门塔尔牛乳铁蛋白基因第11外显子多态性,及其与乳房炎和部分乳性状的关系,利用PCR-SS-CP和DNA测序技术,对118头健康牛和38头感染乳房炎牛个体,进行了第11外显子的基因多态性分析。结果发现,健康牛和感染乳房炎牛个体的第11外显子基因型和基因频率分布差异均极显著(P<0.01),感染牛中AA基因型和A基因频率均极显著高于健康牛(P<0.01)。而且,AA基因型个体SCS显著高于AB和BB型个体(P<0.05),AA型个体的乳蛋白极显著高于AB型(P<0.01)、显著高于BB型(P<0.05),而BB型显著高于AB型(P<0.05)。这表明乳铁蛋白基因第11外显子的A基因,可能是一个西门塔尔牛乳房炎的易感基因。     

重组Taq DNA聚合酶的表达和纯化鉴定

【目的】表达、纯化Taq DNA聚合酶,并检测其扩增性能。【方法】活化含Taq DNA聚合酶基因的菌株JM109,IPTG诱导表达。目的蛋白利用AKTA蛋白纯化系统,依次过Affi-Gel Blue Sepharose,Heparin Sepharose Fast Flow,Q-Sepha-rose Fast Flow,经SDS-PAGE分析,以国外进口Taq酶为标准,采用对比法初略测定酶活性,验证产品质量。【结果】制备的Taq DNA聚合酶具有扩增效率高、纯度高、特异性强、无核酸酶污染、活性稳定等优点。【结论】成功表达纯化Taq DNA聚合酶,其扩增性能达到甚至超过国外同类产品。     

一种采用阴离子交换柱快速纯化Taq DNA聚合酶的方法

通过37℃恒温振荡培养含有Taq DNA聚合酶基因的E.coli菌株,并用IPTG诱导该基因表达获得TaqDNA聚合酶蛋白,利用40％硫酸铵沉淀该蛋白后溶解于storage buffer中.此法获得的Taq DNA聚合酶带负电荷,因此采用阴离子交换柱纯化蛋白.试验结果表明,此法与传统的透析方法相比能快速地去除生物小分子杂质,同时去除透析方法无法除去的杂蛋白;既能保证Taq DNA聚合酶的生物学活性,同时能缩短纯化时间、提高Taq DNA聚合酶的纯度.以土壤微生物DNA、水稻cDNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行测序,结果显示纯化后的Taq DNA聚合酶具有较高的扩增效率和保真性.     

鹅膏毒肽与RNA聚合酶Ⅱ相互作用的研究进展

RNA聚合酶Ⅱ是真核生物中最活跃最复杂的RNA聚合酶之一,具有非常重要的生物学功能,而鹅膏(Amanita)毒肽对其活性具有专一的高抑制性,这使鹅膏毒肽与RNA聚合酶Ⅱ相互作用的研究尤为重要。鉴于国内对鹅膏毒肽与RNA聚合酶Ⅱ相互作用的研究薄弱,笔者从鹅膏毒肽活性位点的确定、两者相互作用方式、抑制机理及抑制能力等方面进行总结,以期为两者的深入研究提供参考。     

南昌市郊梨轮纹病病原菌鉴定

为了明确江西省南昌市郊区梨轮纹病菌的种类归属,本文从果园采集呈典型症状的梨轮纹病样本,采用组织分离法进行病菌分离和病菌纯化,获得5个梨轮纹病菌分离株,其培养性状相同且与已报道的葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的培养性状一致。用菌饼对离体梨枝条进行接种,结果5个分离株均导致典型病斑,对该病斑进行再分离,又分离到与原接种菌一致的病原菌。任选其中的一个分离株NC-1进行rDNA-ITS序列扩增和序列测定,获得片段长为543bp的核苷酸序列,通过BLAST分析,发现该序列与GenBank中葡萄座腔菌的同源性高达100%。结果表明,南昌市郊区梨轮纹病菌属于葡萄座腔菌。     

猪细小病毒PCR检测与分离研究

根据猪细小病毒(PPV)结构蛋白VP2基因序列,设计合成1对引物,建立了检测PPV的PCR方法。检测14份临床组织,检出阳性11份,阳性检出率为79.5%。阳性样品扩增产物用EcoRⅠ酶切得到了预期的结果,对PCR产物进行测序,测序结果与已发表的PPV基因核苷酸序列比较,同源性达99%~100%,所编码的氨基酸同源性为93%~100%。从PCR检测阳性的一份病料组织中分离出1株PPV。试验证明,建立的PPVPCR检测方法特异性强、敏感性高,适用于临床样品的快速检测。     

一个遗传性FXIII缺乏症家系的mRNA转录的表达

目的：观察F13基因缺陷对F13转录表达的影响,从而了解F13基因缺陷与F13功能不足的关系。方法：采用RT-PCR法对一个遗传性F13基因缺乏症家系的FXIIIA亚基mRNA转录表达水平进行分析。结果：家系不同成员中FXIIIA亚基mRNA的不同片段的转录水平存在差异。FXIIIA亚基mRNA片段l和片断2的水平在携带双重基因突变杂合子基因的先证者及其弟中明显低于在其父母中;FXIIIA亚基mRNA片段3的水平在整个家系中无明显差异。结论：复合杂合子基因中双重基因突变导致FXIIIA亚基mRNA转录表达异常．不能表达足量正常的FXIIIA亚基,导致FXIII缺乏症。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA定量检测的临床意义

目的：探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者血清HBV DNA含量的变化与慢性乙型肝炎病情变化的关系。方法：对191例CHB患者[包括CHB轻度、中度、重度以及慢性乙型重型肝炎（CSHB）、乙型肝炎性肝硬化（HBC）],采用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测每组血清HBV DNA水平．并进行组阀对比分析。结果：血清HBV DNA水平、HBV DNA阳性率随病情加重均有下降趋势（P〈0．01）;CSHB组、HBC组与CHB轻度、中度、重度相比较差异有显著性（P〈0．05）;CSHB组HBV DNA水平和阳性率最低,但CSHB组与HBC组比较．慢性乙型肝炎（CHB）轻度、中度、重度之间比较差异无显著性（P〉0．05）。结论：慢性乙型肝病患者血清HBV DNA水平变化在一定程度上反映了肝脏病变的严重程度。     

ADV感染阳性母貂产仔情况及幼仔分窝时ADV的感染率

用聚合酶链式反应（PCR）方法检测、筛选出19只ADV感染阳性的母貂作为试验组,跟踪观察母貂配种后的产仔情况,并与ADV感染阴性的11只母貂的产仔情况进行了对比分析。使用PCR方法对试验组母貂所产幼仔分窝时感染ADV的情况进行了检测。结论：试验组母兽产仔的数量少,死胎数及发育不良的幼仔数要明显高于对照组;试验组母兽所产幼仔分窝时感染ADV的比例为100％。