南瓜多糖提取分离条件的优化

试验选用锦州当地南瓜为原料,对其中的南瓜多糖进行提取。以投料比、提取温度、提取时间、碱液的浓度为因素进行正交试验,确定提取纯化南瓜多糖的最佳工艺参数,试验结果表明,提取温度为80℃,提取时间为2h,液料比为5:1,碱液浓度在0.4mol/L时为最佳。纯化时采用糖液与乙醇比例为1:3的的沉淀条件,温度62℃,加热32min,活性炭添加量为3%的脱色条件,10%三氯乙酸除蛋白方法和2～3天的透析时间为最佳。     

拟南芥乙烯应答基因HLS1的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】制备乙烯应答基因HLS1多克隆抗体,在过表达植物中检测HLS1的积累,为深入研究HLS1响应乙烯信号通路的分子机制奠定基础。【方法】构建pET28a-HLS1c原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导获得重组蛋白HLS1c-His;镍柱亲和纯化重组蛋白后免疫家兔获得抗HLS1血清,利用抗原亲和纯化抗血清获得高纯度的HLS1多克隆抗体;用HLS1抗体和GFP抗体,检测原生质体瞬时转化体系中GFP-HLS1c融合蛋白的表达;用农杆菌蘸花法获得过表达GFP-HLS1g的转基因植物,用HLS1抗体和GFP抗体检测GFP-HLS1g融合蛋白的表达。【结果】成功构建了原核表达载体pET28a-HLS1c,并在大肠杆菌系统中诱导获得重组蛋白HLS1c-His,且多以包涵体形式存在。纯化的HLS1c-His多克隆抗体,能清晰检测到约80 ng原核表达的HLS1抗原。纯化的HLS1抗体不仅能检测到原生质体中瞬时表达的GFP-HLS1c融合蛋白,也能检测到过表达转基因植物株系中的GFP-HLS1g融合蛋白,并且与标签蛋白GFP对应抗体所检测到的特异性条带大小一致。【结论】成功制备了拟南芥HLS1蛋白多克隆抗体,为HLS1蛋白在植物发育中的功能研究奠定了基础。     

反相液相色谱在多肽及蛋白质分离分析中的应用

反相液相色谱由于具有分辨率高、重复性好、回收率高等优点,在多肽及蛋白质研究领域中得到了广泛的应用。简要介绍了反相液相色谱及其分离机理,以及在多肽和蛋白质研究中分离纯化、肽图分析等方面的应用。     

水生栖热菌FL-03海藻糖合酶的分离纯化及特性研究

将从水生栖热菌FL-03中获得的海藻糖合酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析S、ephacryl S-200HR凝胶过滤层析后,纯化68.48倍,产率为18.4%。研究表明:该酶分子量约为101 kD,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0,在40~80℃、pH 6.0~9.0范围内具有较高的反应活性和稳定性。Fe3 对该酶具有一定的激活作用,Cu2 、Tris、Zn2 对该酶具有较强的抑制作用。该酶具有高度的底物特异性,只能专一地将麦芽糖转化为海藻糖。在40℃4、8 h条件下,麦芽糖转化为海藻糖的转化率最大可达到79%。     

黑曲霉木聚糖酶XynⅢ的纯化与酶学性质

通过超滤和DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析等方法,将黑曲霉J506发酵所产的木聚糖酶XynⅢ纯化至电泳级均一纯,分子量经SDS-PAGE测定为27.9 kDa.酶学特性研究表明,XynⅢ能够水解桦木木聚糖,燕麦木聚糖,地衣多糖和大麦β-葡聚糖,最适温度和最适pH值分别为50℃和4.6,具有较宽的pH稳定性,并且在50℃以下较稳定.Ca2 ,Co2 ,Cu2 ,Mn2 ,Pb2 ,K ,Zn2 and EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Fe2 和Mg2 对酶有轻微的激活作用.     

大肠杆菌k88ac菌毛蛋白亚基因的克隆、表达及亲和层析纯化

利用PCR技术,从E.coli C83902中扩增出不含信号肽序列的K88ac菌毛蛋白亚基基因片段,将其克隆到表达载体pQE-30中,构建了原核表达载体pQE30-K88ac,并转入E.coli XL1-Blue中。经IPTG诱导后,由T5启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的以包涵体形式存在的K88ac蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化,并获得了高纯度的融合蛋白。     

绿色木霉内切纤维素酶的分离纯化及酶学性质的研究

绿色木霉AS3.5455经固体发酵,提取胞外纤维素酶,经硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE Cellulose-52离子交换层析、SephadexG-150凝胶柱层析等纯化出单一组分的内切β-葡聚糖苷酶,经SDS-PAGE电泳分析,该内切酶的相对分子量约为58.7KD,内切β-葡聚糖酶的最适作用温度为55℃,最适反应pH为5.5。     

环状芽孢杆菌A6产生的果胶酶和木聚糖酶分离纯化及酶学性质

寄生于南方亚麻茎杆上的环状芽孢杆菌发酵产生的果胶酶和木聚糖酶经采用(NH4)_2SO_4沉淀与半透膜透析,CM-Sephadex C-50凝胶离子交换柱层析,Sephadex G-100凝胶柱层析分离纯化.经鉴定果胶裂解酶和木聚糖酶基本达电泳纯,果胶裂解酶两个亚基的相对分子质量分别为32253,27400,木聚糖酶两个亚基的相对分子质量分别为86 489,57422;果胶裂解酶和木聚糖酶最适反应温度为45℃;果胶裂解酶最适反应pH值为10.5,木聚糖酶最适反应pH值为7;对果胶裂解酶而言,K~ ,Mg~(2 )有轻度的抑制作用.Fe~(2 ),Cu~(2 )有强抑制作用,Ca~(2 )有一定的激活作用;对木聚糖酶,K~ ,Mg~(2 )有轻微抑制作用,Cu~(2 )有强抑制作用,Ca~(2 )和Fe~(2 )有一定的激活作用.     

鲢肠道淀粉酶的分离纯化及部分性质研究

以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)加工下脚料为原料,分离提纯其中的淀粉酶并对其部分性质进行了研究。结果表明经多级分离,得到了一种相对分子质量约2.15×104的淀粉酶,命名为SCIG1。SCIG1是鲢肠道淀粉酶的一种,酶活性的最适温度为30℃,最适pH5.5。     

牙鲆腹水病病原免疫血清的制备和纯化试验研究

用迟钝爱德华氏菌免疫家兔,制备出高效价迟钝爱德华氏菌免疫血清.先制备迟钝爱德华氏菌抗原, 耳缘静脉注射免疫家兔.经微量反应板法检测血清效价, 效价达到1 ∶ 2560;用Millipore Montage抗体纯化试剂纯化抗体,纯化的抗体经SDS-PAGE电泳,杂带较少,条带主要集中于50 kD处;用斑点酶联免疫吸附试验检测时, 迟钝爱德华氏菌呈阳性, 温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆菌均呈阴性.试验结果表明,特异、高效价的迟钝爱德华氏菌免疫血清,为快速检测牙鲆腹水病病原奠定了基础.