镉胁迫下水稻种子的萌芽生长及体内水解酶的活性变化

利用室内培养方法研究了不同镉离子浓度胁迫下水稻种子的萌芽状况。结果表明,在镉胁迫下,水稻种子萌芽力受挫,生长势削弱,直至完全失活,与种子体内淀粉酶（Amy）,酸性磷酸酯酶(Acp)这二种主要水解酶活性受镉的剂量抑制效应有关。镉对水稻种子造成伤害的临界浓度为0.05 mmol/L,抑制种子萌芽的浓度为0.5 mmol/L,使种子完全失活的致死浓度为5 mmol/L。对镉胁迫的反应Amy较Acp敏感,但二者活性大小均可作为鉴定水稻受镉害程度的酶学生理指标。     

磷胁迫下大豆叶片及根系酸性磷酸酯酶酶谱的研究

通过营养液栽培试验,研究了低磷胁迫下4种不同磷效率基因型大豆叶片和根系的酸性磷酸酯酶(APase)同工酶的酶谱和活性变化.结果表明,大豆叶片和根系APase同工酶含量在低磷处理第10 d、20 d、30 d均比对照高,酶谱染色加深和谱带条数的增加,说明低磷胁迫增加该酶活性,磷高效基因型酶活性升高的幅度大于磷低效基因型.     

北京地区家蝇抗药性与酶活性的关系

试验结果表明，不同抗性水平种群的羧酸酯酶活性与其对拟除虫菊酯的抗性程度明显相关．北京崇文区、宣武区和密云等地区的家蝇种群以及用残杀威选育的种群和用残杀威、７５０４、溴氰菊酯选育后合并的种群，多功能氧化酶（ＭＦＯ）活性明显高于农大敏感品系（ＳＡ），最多相差近１０倍，但是用溴氰菊酯选有的种群和用残杀威选育后加敏感品系稀释的种群，ＭＦＯ活性没有明显的提高。说明ＭＦＯ活性的提高与家蝇对残杀威的抗性有密切关系，而与对溴氰菊酯的抗性关系次之。抗性家蝇种群的乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）对敌百虫的敏感度明显低于ＳＡ品系的ＡｃｈＥ，说明ＡｃｈＥ的敏感度降低是家蝇对有机磷杀虫剂的抗性机制之一。酸性磷酸酯酶、碱性磷酸酯酶以及谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）活性在不同家蝇种群中没有明显差异，说明这三个酶系可能与家蝇的抗药性无关。     

二色补血草海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶基因的克隆及分析

以二色补血草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段为0.8 kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu.mL-1。通过随机测序从文库中获得的海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(trehalose-6-phosphate phosphatase,TPP)基因的全长cDNA序列,该序列长1 986 bp,其中5’非翻译区163 bp,3’非翻译区680 bp,开放读码框长1 143 bp,编码380个氨基酸,蛋白分子质量为42KD,理论等电点为6.68。海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶在海藻糖合成过程中起关键作用,该基因的克隆为研究海藻糖在二色补血草中的合成奠定了基础。     

籼型两用核不育系水稻培矮64S的育性表达——幼穗发育过程中的NAD+-MDH和AP同工酶的变化

 以籼型两用不育系水稻培矮64S和常规稻粳籼89为材料，采用PAGE分析同工酶的方法，比较水稻幼穗发育过程中花粉母细胞形成期、减数分裂期和花粉完熟期NAD+-MDH和AP同工酶的变化，以期了解不育系的育性转换与表达机理。结果表明，在1993年2月25日、3月10日和3月30日三期播种的水稻培矮64S均表现不育，花粉不育度在99.7%以上，结实率在0.3%以下，1994年8月1日播种的培矮64S表现可育，结实率在19%以上，而同期播种的常规稻粳籼89均能得到正常结实，结实率在68%以上。同时发现1993年培矮64S的不育性在花粉完熟期与颖花及花药的NAD⁺-MDH活性的显著降低关系较大。在花粉母细胞形成期—减数分裂期与颖花AP的活性及同工酶组成的变化关系较密切。1994年表现可育的培矮64S与粳籼89相比不存在这种差异。由此可认为培矮64S育性表达可能与花粉发育前期的脂肪代谢以及花粉发育后期的呼吸代谢有关。     

杂色鲍紫色酸性磷酸酯酶基因克隆及应激下的表达

 利用本实验室获得的杂色鲍(Haliotis diversicolor)转录组测序数据库, 筛选出杂色鲍紫色酸性磷酸酯酶(Purple acid phosphatase, PAP)同源片段, 进而克隆获得PAP的cDNA全序列, 命名为HdPAP, 并进行了HdPAP蛋白的结构分析和功能预测, 同时利用实时定量PCR(qRT-PCR)技术分析HdPAP基因的组织表达谱和应激条件下的HdPAP表达变化。HdPAP基因cDNA全长1 215 bp, 含有1个编码322 个氨基酸的969 bp的开放阅读框。经Blast比对, 与无脊椎动物半索动物门囊舌虫(Saccoglossus kowalevskii)的PAP氨基酸序列一致性最高, 达59%。通过实时定量PCR检测, HdPAP在检测的杂色鲍各组织中均有表达, 其中在血细胞和肝胰腺的表达量显著高于其他各组织(P<0.05)。高温应激下, 在检测的6个时相中, HdPAP在血细胞、肝胰腺和鳃中均出现不同程度的表达抑制。缺氧应激后, 4 h血细胞中HdPAP显著低于对照组, 24 h恢复到正常水平, 96 h显著高于对照组(P<0.05), 到192 h又恢复到正常水平。副溶血弧菌感染实验中检测到HdPAP在血细胞中同样出现表达抑制现象, 3 h和6 h均检测到感染组HdPAP表达量显著低于对照组(P<0.05)。PAP在高温、缺氧及弧菌感染下显著的表达抑制从转录水平揭示了其作为表达下调的酯酶可能参与胁迫下的生物代谢和免疫反应。

     

叶酸和维生素B12对五龙鹅肝脏中磷脂酸磷酸酯酶1基因表达量的影响及其与血清脂类代谢、脂肪沉积和肉品质指标的相关性分析

本试验旨在探究饲粮中添加不同水平叶酸和维生素B12对五龙鹅肝脏中磷脂酸磷酸酯酶1(Lpin1)基因表达量的影响及在不同组织中的表达差异性,并分析Lpin1基因表达量与血清脂类代谢、脂肪沉积、肉品质指标之间的相关性。试验选用5周龄五龙鹅420只,随机分为7个组,每个组6个重复,每个重复10只鹅。试验采用2×3两因素(叶酸添加水平×维生素B12添加水平)交叉等重复的析因设计,空白对照组饲喂基础饲粮,不添加叶酸和维生素B12;试验组饲粮叶酸添加水平分别为0.25、2.00 mg/kg,维生素B12添加水平分别为0.003、0.009、0.018 mg/kg。试验期为4周。结果表明:1)不同添加水平的叶酸和维生素B12的互作对五龙鹅的末重影响显著(P0.05)。2)不同添加水平的叶酸和维生素B12的互作对皮脂率、腹脂率、肌间脂带宽、胸肌肌内脂肪率和腿肌肌内脂肪率影响显著(P0.05)。3)不同添加水平的叶酸和维生素B12及其互作对五龙鹅肝脏中Lpin1基因表达量影响显著(P0.05)。4) Lpin1基因在五龙鹅的心脏、肝脏、肾脏、腹脂、肺脏、肌胃、腺胃、胸肌、腿肌、脾脏、胰腺11个组织中均有表达,其中Lpin1基因表达量表达量最高的为腹脂,显著高于其他组织(P0.05);其次为肌胃、胰腺、肺脏,显著高于腺胃、心脏、肾脏、腿肌、胸肌(P0.05)。5)五龙鹅肝脏中Lpin1基因表达量与血清甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇含量呈显著负相关(P0.05),与血清葡萄糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量呈负相关(P0.05)。6)五龙鹅肝脏中Lpin1基因表达量与腹脂率、腿肌肌内脂肪率呈显著正相关(P0.05),与胸肌肌内脂肪率、肌间脂带宽呈极显著正相关(P0.01),与皮脂率呈负相关(P0.05)。7)五龙鹅肝脏中Lpin1基因表达量与胸肌和腿肌pH、肉色、剪切力、失水率均无显著相关性(P0.05),但与腿肌滴水损失呈显著正相关(P0.05)。由此可见,不同添加水平的叶酸和维生素B12及其互作对五龙鹅肝脏中Lpin1基因表达量有显著影响,且Lpin1基因表达量与血清脂类代谢、脂肪沉积和肉品质指标有一定的相关性。     

黑曲霉固体发酵物的应用效果研究

当前市场上所用复合酶制剂多为几种纯酶制剂按一定配方复配、稀释而成,由微生物制取酶制剂时常要提取其发酵物中的粗酶,提取过程中可能漏掉一些不溶的酶。提取时只能获取微生物的胞外酶,而要获取其胞内酶则必须先进行菌体破碎再抽提,在抽提过程中酶活力不免受到损失,而且酶自细胞中抽出之后,大多数是不稳定的。     

朱砂叶螨酸性磷酸酯酶测定条件的研究

应用最优４因子组合测定朱砂叶螨（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ（Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ）酸性磷酸酯酶，并进行了主因子效应分析。结果表明，在醋酸缓冲液ｐＨ值４．４、反应温度４２℃、温浴４０ｍｉｎ、底物８．５×１０^－３ｍｏｌ／Ｌ的组合条件，波长４０５ｎｍ下，该酶吸收值最大，其中温浴时间是影响朱砂叶螨酸性磷酸酯酶活性的关键因子     

茶叶的乐果生物解毒研究

应用昆虫对农药的抗性机理,在茶叶加工过程中加入磷酸酯酶,使茶叶中乐果残留得到了显著的降解(P<0.01),改善了茶叶品质,提高了社会和经济效益。