温度对绿豆萌发芽生长特性及酸性磷酸酯酶活力的影响

实验研究不同温度对绿豆萌发芽生长特性及酸性磷酸酯酶活力的影响。结果表明,温度对豆芽生长特性有显著影响(P0.05);在25~35℃的温度范围内,萌发时期的绿豆,酸性磷酸酯酶的活力趋势为先上升达到最大限度后,又稍有降低。     

柑桔磷酸酯酶活性的测定方法探索

以柑桔叶片为试验材料,研究了磷酸酯酶活性的测定方法及其与全磷量的相关性。结果表明,酶反应的最适ｐＨ为８．４,最适反应温度为３０℃,反应保温时间最适为１５ｍｉｎ,比色时间宜在２０ｍｉｎ内;柑桔居花需要大量的磷素营养,相应磷酸酯酶的活性也增加;叶片磷酸酯酶活性与含磷量呈显著正相关关系,可作为植物磷素营养的生化测定指标。     

小菜蛾碱性磷酸酯酶受体表达与分子模拟

【目的】利用原核表达小菜蛾(Plutella xyllostella)中肠膜结合碱性磷酸酯酶(membrane-bound alkaline phosphatase,mALP)并经Ligand blot验证其具有与Cry1Ac毒素结合的能力;通过同源建模和分子对接研究Cry1Ac-mALP的结合模式,预测毒素和受体结合区域及关键氨基酸位点(热点残基),为了解毒素-受体互作机制及分子改造增强Cry毒素活性的研究打下基础。【方法】针对小菜蛾mALP全长设计引物,并以小菜蛾c DNA为模板扩增mALP基因,双酶切后用T4连接酶连接至pET-26b原核表达载体,将构建的pET-26b-mALP载体转化Trans1-T1克隆感受态,挑取克隆并提取质粒后进行PCR、双酶切和测序验证,将验证无误的重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达感受态细胞,进行诱导表达。将诱导表达后的mALP转至PVDF膜上,通过Western blot和Ligand blot分别验证mALP是否成功表达以及是否具有与Cry1Ac毒素结合的能力。对mALP进行同源建模、分子动力学模拟以及模型评价,获得的mALP最佳三维结构与Cry1Ac毒素利用Patch DOCK和Fire Dock程序进行分子对接试验,对确定的最佳毒素-受体复合物进行结合区域和结合氨基酸位点分析,并通过计算机辅助的丙氨酸突变扫描试验确定毒素和受体参与的关键氨基酸残基。【结果】扩增出小菜蛾mALP基因并克隆至pET-26b原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)表达感受态后挑取阳性克隆提取质粒后进行PCR、双酶切和测序均显示构建正确。通过原核表达和Western blot验证成功表达了mALP蛋白,并经Ligand blot试验证实了原核表达的mALP具有和Cry1Ac毒素结合的能力。利用同源建模成功获得了mALP的三维结构,通过Patch DOCK和Fire Dock分子对接程序,获得毒素和受体的对接复合物,通过溶剂可及表面积变化计算和Ligplot分析,确定毒素结构域Ⅱ和结构域Ⅲ均参与了受体结合,并且毒素和受体均以疏水结合和氢键结合模式参与结合,最后通过热点残基预测发现Cry1Ac毒素和mALP中分别有3个氨基酸残基(376ASN、443SER和486SER)和4个氨基酸残基(452ARG、499THR、502TYR和513TYR)是参与互作的关键氨基酸位点。【结论】经原核表达的小菜蛾mALP同样具有与Cry1Ac毒素结合的能力,并利用分子模拟技术预测了小菜蛾mALP三维结构及与Cry1Ac毒素结合模式。     

水杨酸对高温强光胁迫下小麦叶片蛋白激酶和磷酸酯酶活性的调节作用

为了探讨外源水杨酸对高温强光胁迫下小麦叶片蛋白激酶和磷酸酯酶活性的调节作用,在灌浆期对小麦叶面喷施0.5 mmol/L水杨酸后,进行高温强光胁迫处理,并测定蛋白激酶活性和磷酸酯酶活性。同时用1 mmol/L蛋白激酶抑制剂(FSBA)处理进行验证。结果表明,外源水杨酸处理显著提高了2种酶活性,蛋白激酶相对活性最高达312%,磷酸酯酶相对活性最高达217%。外源水杨酸通过促进高温强光胁迫下小麦叶绿体蛋白的可逆磷酸化反应,保护了光合机构的完整性。     

嗜卷书虱和嗜虫书虱体内磷酸酯酶的生化与毒理学特性比较研究

采用药膜法对嗜卷书虱和嗜虫书虱进行生物测定,从5种杀虫剂对两种书虱的LC50可以看出,嗜卷书虱对两种拟除虫菊酯类药剂较嗜虫书虱敏感,嗜虫书虱对丁硫克百威较为敏感,而对有机磷类药剂的作用两种书虱的敏感性相似。两种书虱体内酸性磷酸酯酶（ACP）和碱性磷酸酯酶（ALP）的活力比较结果表明：嗜卷书虱和嗜虫书虱体内ACP的比活力为分别14 μmol/mg&#8226;30 min和2.2 μmol/mg&#8226;30 min,ALP的比活力分别为0.092 μmol/mg&#8226;30 min和0.046 μmol/mg&#8226;30 min。经方差分析,两种书虱ACP和ALP的比活力之间均存在显著性差异(p<0.05)。动力学参数比较结果显示,两种书虱ACP的V _max值之间的差异达到显著水平,而ALP的K _m值之间存在显著性差异。离体试验结果表明,5种药剂对磷酸酯酶的作用各不相同,个别药剂在低浓度下表现诱导作用,说明磷酸酯酶在不同外源毒物的解毒代谢过程中所起的作用有所不同。     

敌百虫对荔蝽脂肪体酯酶及其超微结构的影响

本文研究了荔枝蝽象(Tessarotoma papillosa Drury)在不同季节期间脂肪体酯酶活力及其超微结构的特点,并探讨了敌百虫对它们的影响。结果表明:1.碱性 磷酸酯酶在新羽化成虫中活力较高,为1.83微克分子/分钟,到越冬期最低,仅0.30微克分子/分钟,在生殖期活力为0.67微克分子/分钟。用敌百虫处理后对酶活力有诱导作用。2.酸性 磷酸酯酶的变化与碱性磷酸酯酶不同,从新羽化成虫经越冬到生殖期,酶活力从高逐渐降低,分别为5.7微克分子/分钟,5.47微克分子/分钟和4.8微克分子/分钟。敌百虫处理后其酶活力有所降低。3.羧酸酯酶的活力变化与碱性磷酸酯酶相似,新羽化成虫为1.48毫克分子/分钟,越冬虫为0.42毫克分子/分钟,生殖期为0.72毫克分子/分钟。敌百虫对此酶也有诱导作用。4.新羽化成虫的脂肪体亚细胞结构以液泡为主,越冬期以脂肪、精原颗粒为多,到生殖期线粒体、粗面内质网大量出现。未观察到敌百虫处理后的生理病变。本文还讨论了有关自然抗药性机理的一些问题。     

木薯海藻糖-6-磷酸酯酶MeTPP6基因克隆及其表达分析

海藻糖-6-磷酸酯酶(TPP)负责海藻糖生物合成催化反应的最后一步,是植物海藻糖生物合成途径的关键酶。采用RT-PCR的方法从木薯叶片中克隆了1个TPP基因,命名为MeTPP6,该基因含有1个1 122 bp的开放阅读框,编码373个氨基酸,具有TPP家族保守结构域。系统进化树分析表明,MeTPP6与杞柳和杨树中同源基因的亲缘关系较近,序列相似性高达89.7%和89.0%。启动子分析表明,MeTPP6含有干旱、低温、热胁迫、激素(如ABA)和光响应等相关元件。荧光定量PCR分析表明,MeTPP6在叶片和叶柄中表达量最低;在须根和储藏根中表达量最高,分别为叶片表达量的4.2倍和4.5倍。而且,MeTPP6基因的表达能被干旱、低温和ABA处理显著诱导。这些结果表明,MeTPP6通过依赖于ABA的信号通路在转录水平参与木薯干旱和低温胁迫,可作为重要候选基因进一步研究其在木薯非生物逆境中的功能。     

北京地区家蝇抗药性与酶活性的关系

试验结果表明，不同抗性水平种群的羧酸酯酶活性与其对拟除虫菊酯的抗性程度明显相关．北京崇文区、宣武区和密云等地区的家蝇种群以及用残杀威选育的种群和用残杀威、７５０４、溴氰菊酯选育后合并的种群，多功能氧化酶（ＭＦＯ）活性明显高于农大敏感品系（ＳＡ），最多相差近１０倍，但是用溴氰菊酯选有的种群和用残杀威选育后加敏感品系稀释的种群，ＭＦＯ活性没有明显的提高。说明ＭＦＯ活性的提高与家蝇对残杀威的抗性有密切关系，而与对溴氰菊酯的抗性关系次之。抗性家蝇种群的乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）对敌百虫的敏感度明显低于ＳＡ品系的ＡｃｈＥ，说明ＡｃｈＥ的敏感度降低是家蝇对有机磷杀虫剂的抗性机制之一。酸性磷酸酯酶、碱性磷酸酯酶以及谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）活性在不同家蝇种群中没有明显差异，说明这三个酶系可能与家蝇的抗药性无关。     

转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫磷酸酯酶活性的影响

研究了转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫磷酸酯酶活性的影响,结果表明:取食Bt玉米后亚洲玉米螟幼虫体内的酸性磷酸酯酶活性在72 h后显著降低,碱性磷酸酯酶的活性则在24 h后就受到抑制,72 h时酶活与对照组的比值仅为0.3.随着取食时间增长,酶活力减弱,幼虫的体重也显著低于对照,两者存在一定相关性.     

鸡传染性支气管炎病毒(M41)HI抗原的制备与初步应用

实验比较了不同方法制备IBV HI抗原,并比较不同PLC1处理浓度、不同保存时间等因素对制备IBV HI抗原的影响,筛选出制备抗原的最佳条件:选择10 U/ml的PLC1与等体积超速离心后的M41 IBV以及pH值7.40、.01 mol/L PBS稀释液混合,在37℃水浴作用2 h并不断振荡,取出后加入β-丙内酯4℃灭活24 h。在HI实验中,该抗原不与AIVH5、AIVH9、ND单因子血清反应,仅与IB阳性血清反应,有高度特异性。用高岭土37℃处理1 h可明显降低SPF阴性血清非特异反应。上述抗原在4℃保存3周血凝价达到最高。应用该抗原检测免疫前后鸡群IBV抗体,取得良好效果,证明用该方法与条件所制备的抗原可以用于IB诊断及临床实验。