食蟹猴支持细胞的分离、纯化以及不同血清浓度对其增殖的影响研究

[目的]纯化培养食蟹猴支持细胞,并测定不同血清浓度对细胞增殖的影响。[方法]分离并纯化食蟹猴支持细胞后,分别以5%、10%、15%、20%4种不同血清浓度的培养基对食蟹猴支持细胞进行培养。利用MTT比色法判断支持细胞的增殖情况,从而确定最佳的血清培养浓度。[结果]5%血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响与10%血清浓度的培养基差异不显著,15%与20%的血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响差异不显著,5%、10%与15%、20%的血清浓度的培养基对细胞增殖能力的影响差异极显著。[结论]15%的血清浓度是支持细胞增殖的最佳比例。     

仰鼻猴属野外食性的季节性变化研究

对4种仰鼻猴的野外生境和食物的季节性变化进行研究,发现黑白仰鼻猴与金仰鼻猴和灰仰鼻猴在食性方面没有本质不同。疣猴亚科食叶灵长类有发酵小室的前胃,这决定了它们在觅食生态学方面基本相似,均采用一种富于弹性的觅食策略,而非专食性,这对该物种的保护非常有利。     

猴D型逆转录病毒P27基因的表达、纯化及重组蛋白的鉴定

根据GenBank上已发表的猴D型逆转录病毒SRV-2株基因组序列设计合成了一对特异性引物,通过PCR扩增出P27基因。将扩增出的片段克隆到原核表达载体pBAD/Thio-TOPO上,通过序列分析证实该片段与猴D型逆转录病毒SRV-2株P27基因序列一致。将阳性重组质粒转化至大肠杆菌T0P010中,用阿拉伯糖诱导表达,表达的融合蛋白进行SDS-PAGE和WesternBlot分析,并用proBondTM柱在天然状态下进行纯化。结果表明,表达的融合蛋白分子量约为50KDa,其大小与预期相符。     

靶向食蟹猴NTCP基因的CRISPR/Cas9系统gRNA筛选

本研究旨在通过CRISPR/Cas9体外酶切法及细胞水平上的PCR扩增测序筛选出靶向食蟹猴NTCP基因具有高敲除活性的gRNA。首先通过比对食蟹猴与人类NTCP氨基酸序列,选择差异位点,即第84-87位和第157-165位氨基酸作为基因靶点序列区;利用gRNA软件设计针对上述基因靶点序列的gRNA,每个靶点设计3~4条候选gRNA序列;然后利用gRNA体外检测试剂盒,筛选出靶向NTCP基因的体外敲除活性较高的两条gRNA序列：gRNA1.2和gRNA2.1。将gRNA1.2和gRNA2.1分别插入pLV hUbC-Cas9-T2A-GFP载体中,转染食蟹猴原代肝细胞。提取转染后细胞基因组DNA,通过PCR扩增NTCP基因并将其克隆到T载体中进行测序分析。结果表明,gRNA1.2和gRNA2.1均可使NTCP基因产生移码突变,但gRNA2.1比gRNA1.2具有更高的敲除活性。本研究为下一步编辑食蟹猴NTCP基因及研究其在乙型肝炎病毒（HBV）感染中的功能奠定了基础。     

广西地区人工饲养雌性食蟹猴雌二醇和睾酮含量变化的研究

探索广西地区人工饲养的雌性食蟹猴在少年、青年和中年阶段睾酮和雌二醇分泌情况。使用放射免疫方法分别测定血清中的睾酮、雌二醇含量变化。试验结果表明：广西地区人工饲养的雌性食蟹猴少年组、青年组和中年组间雌二醇分泌的量分别是38.81±21.57 pg/ml、76.09±56.23 pg/ml、64.37±39.48 pg/ml,分泌水平差异极显著（P〈0.01）,其中青年组雌二醇分泌量大于中年组,少年组的含量最少。雌性食蟹猴少年组、青年组和中年组间睾酮的分泌量分别是52.36±24.93 ng/ml,37.95±21.69 ng/ml、80.91±29.19 ng/ml,分泌水平差异极显著（P〈0.01）,其中中年组分泌水平最高,青年组其次,少年组最少。     

我国非人灵长类实验动物产业发展的现状、问题及对策

非人灵长类是人类近亲。作为重要科技支撑条件,在引领和支撑生命科学研究、生物技术创新和生物医药产业发展中发挥着不可或缺的重要作用,其战略地位受到了世界各国的普遍重视。我国对非人灵长类实验动物资源建设与共享,重大疾病模型的自主研发高度重视,在《国家"十二五"科学和技术发展规划》以及《科研条件发展"十二五"专项规划》中明确提出了"加强具有中国特色实验动物资源培育,重点     

太平猴魁茶

太平猴魁茶,主要以柿大茶品种茶树鲜叶为原料精制而成,原产安徽省黄山区新明乡猴坑、猴岗、颜家一带,创制于1900年,至今已有100多年的历史.当时南京江南春茶庄设在新明茶区的茶叶收购站,将尖茶中大小整齐的芽叶单独拣出,单独包装,运往南京高价销售,结果深受嗜茶者欢迎.其时家住猴岗的茶农王魁成(人称王老二)由此受到启发,认为与其在成茶后挑选,不如在采制时就开始精挑细制.于是他在凤凰尖的高山茶园内精心选出又壮又嫩的一芽二叶鲜叶进行加工制作,结果制出的成茶规格好、质量高,被称为王老二"魁尖",又由于其产于太平县猴坑、猴岗一带,故此茶全称为"太平猴魁"茶.太平猴魁茶茶园海拔在300m以上,植被覆盖率大于90%,土壤属变质页岩风化的乌砂壤土及黄砂壤土.     

Dot-ELISA法检测某食蟹猴场猴群B病毒感染的情况

正B病毒(B virus,BV)隶属于疱疹病毒科(Herpesviridae)单纯疱疹病毒属(Simplexvirus),以恒河猴(Macaca mulatta)和食蟹猴(M.fascicularis)等为自然宿主。该病毒最初由恒河猴咬伤的病人脑组织中分离获得[1]。B病毒在猴群中常呈隐性感染,感染率在10%~60%,但其感染人后往往引起死亡,即使存活下来也会产生严重的神经后遗症[2],危害甚大。《实验用猴微生物学检测国家标准》中规定B病毒为必检项目,为此选择适用于基     

猴源环孢子虫巢式PCR检测方法的建立

环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫。为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测。结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法(饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法)提高2.3%~3.4%。可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。