灰鹤痛风病的诊疗报告

痛风病是禽类的一种与核蛋白代谢障碍有关的尿酸血症,该病在家禽中比较常见,而在野生鹤类中较为少见。我园一只灰鹤于2000年8月20日发病,并逐渐消瘦而死亡。8月25日,又有一只灰鹤出现类似症状。经过查阅资料,仔细分析发病原因后及时采取治疗措施,症状明显好转,最后定为痛风病。     

禽流感病毒分子生物学研究进展

禽流感是由A型流感病毒引起鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑等家禽的传染病。禽流感病毒H5N1亚型于1997年、H9N2亚型于1999年、H7N7亚型于2003年和H5N1亚型于2004年先后发生感染人的事件，人们不得不重新认识禽流感的公共卫生意义。本文综述了禽流感病毒的基因组、主要蛋白及其功能、毒力分子学基础、分子生物学诊断和疫苗研究等。     

σ-共核蛋白在帕金森疾病中的功能

介绍了σ-共核蛋白的来源、结构,分析了对帕金森疾病有关键作用的多巴胺合成方面的σ-共核蛋白的调节作用,并探讨了σ-共核蛋白如何发生聚集及发生聚集后可能会造成PD的发生,最后重点讨论了σ-共核蛋白引起PD的多巴胺能神经元变性的作用。     

仙台病毒核蛋白的原核表达及鉴定

本研究从一株鼠仙台病毒（Sendai virus,SeV）中扩增获得核蛋白（nucleocapsid protein,NP）基因,将其克隆入pET32a（＋）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。将原核表达产物作为免疫原,免疫BALB/C小鼠,制备获得抗NP的特异性多抗,经间接免疫荧光法和Western blot法检测,该表达产物原具有良好的免疫原性。将该产物纯化作为包被抗原,建立了一种检测SeV感染的间接ELISA方法。通过H1N1流感病毒、H9N2流感病毒、新城疫病毒阳性血清进行交叉试验表明：该间接ELISA方法有很好的特异性。这为实验动物仙台病毒抗体的检测提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

哺乳动物端粒酶活性研究进展

正端粒位于真核生物染色体末端,由TTAGGG 6个碱基串联重复构成[1]。在新陈代谢过程中,细胞端粒逐渐变短,当端粒缩短到特定长度时,引发分裂性细胞衰老,衰老的细胞逐渐变扁、变平、变大,最后停止分裂直至凋亡[2]。因此,研究人员形象地将端粒称为细胞的"分裂时钟"[3]。端粒酶是一种核糖核蛋白复合物,其核心酶包含蛋白亚基和RNA元件两部     

猪传染性胃肠炎病毒重组核蛋白免疫原性的研究

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）核蛋白（NP）基因是高度保守序列．其编码的NP是病毒粒子的主要组成成分。N基因在PCR分离后，亚克隆到PQE30载体上的组氨酸亲合标志的N端，产生与组氨酸融合的重组融合N蛋白，经Ni-NTA金属亲合层析纯化后免疫家兔，产生了多克隆抗体，此抗体与相应的抗原反应所产生的特异性条带和此抗原与抗NP单克隆抗体反应所产生的特异性条带一致。证明重组融合N蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。     

H5N1亚型禽流感病毒NP基因的克隆与表达

根据已知H5N1亚型禽流感病毒NP基因序列设计、合成PCR克隆引物。自H5N1阳性病料中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶,经PCR扩增NP基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组NP蛋白,分子质量约66.0ku。采用单克隆抗体和阳性血清经ELISA、免疫印迹分析重组蛋白的免疫反应性。结果表明:所获得的重组NP蛋白在ELISA分析中均能与阳性血清和单克隆抗体发生特异性结合,但在免疫印迹分析中仅与阳性血清发生特异性结合。     

猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用

根据GenBank中A/Swine/Hong Kong/126/82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增了我国SIV分离株A/Swine/Heilongjiang/3/2000(H3N2)的核蛋白(NP)基因.将扩增所得NP基因克隆于pMD18-T载体,酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93.8%,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET-NP.用pET-NP转化受体菌BL21,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品.经SDS-PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG诱导下,6 h其表达量达到高峰,经Western blot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性,大小约为60kD.用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线,而与其它9种猪病原阳性血清不发生反应.正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应.通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95%以上.试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原,不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便,其灵敏度也能满足现地的使用要求.目前正在进行现地的中试试验.     

禽流感病毒A/chicken/Mudanjiang/0823/2000(H9N2)株NP及M1基因的克隆及序列分析

参照已发表的A型禽流感核蛋白(NP)、基质蛋白(M1)基因序列及其基因组特性,设计合成了一条通用反转录引物和两对特异性引物,采用RT-PCR法,成功克隆了禽流感病毒国内分离株A/chicken/Mudanjiang/0823/2000(H9N2)株的NP、M1基因.序列测定结果为NP基因cDNA全长1497bp,编码498个氨基酸.M1基因cDNA全长759bp,编码252个氨基酸.将其序列与数株A型流感病毒(H9N2)NP及M1基因序列进行比较,NP基因同源性为90.51%～98.46%,氨基酸序列同源性为95.38%～98.59%.M1基因同源性为90.78%～97.36%,氨基酸序列同源性为95.63%～99.60%.