流感病毒在人间的传播及防控

禽流感病毒是正粘病毒，流感病毒属的一个成员。流感病毒由特异的不具交叉反应的核糖核蛋白抗原区分为三个不同的抗原型，即A、B、C三型。A型和B型人流感病毒可造成季节性流行，一般出现在10月和5月。野生水禽是所有已知A型流感病毒的天然宿主，特别是某些野鸭、鹅、大雁、天鹅、海鸥、水鸟和燕鸥。     

鱼类病毒性出血性败血症病毒核蛋白基因的原核表达

通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48ku。诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清分别用于SDS-PAGE电泳,结果表明目的蛋白主要以包涵体的形式存在。表达蛋白经过复性、纯化,得到了较高纯度的可溶性蛋白。经Western-blot检测表明,该表达产物能被羊抗VHSV阳性血清特异性识别。     

应用C—ELISA检测禽流感病毒核蛋白抗体

应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ－ＥＬＩＳＡ），用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡，１１２３只火鸡，７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比，Ｃ－ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％；而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比，则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ－     

巨型艾美耳球虫Eimeria maxima内生发育阶段的细胞化学研究:Ⅰ.多糖、核酸、碱性核蛋白

本试验利用组织化学技术对巨型艾美耳球虫内生发育阶段细胞内的多糖、核酸、碱性核蛋白进行的研究证明,裂殖体、大配子、小配子体、卵囊内都存在 DNA、RNA 和碱性核蛋白。滋养体、多核体和小配子体内未检出多糖。裂殖体、大配子和合子含有多糖、成熟的大配子和合子多糖含量丰富。结果表明,多糖是由球虫自身合成并在其发育过程中消耗。     

Class Ⅰ新城疫病毒核衣壳蛋白在体外细胞感染过程中表达定位的检测

为分析核衣壳蛋白(NP)在新城疫病毒(NOV)感染真核细胞过程中细胞内定位的情况,本研究以NDV Class I强毒株9a5b作为免疫原制备4株NP特异性单克隆抗体(MAb),并将病毒株9a5b按5 MOI感染量接种DF1单层细胞,当接种后1 h～3 h时,NP有极少量表达并逐量增加,主要呈点状分布于细胞浆内;当接种后4 h～20 h时,NP聚集于细胞浆中,聚集数量与感染时间成正比;感染24 h后,细胞核碎裂,NP散在分布于细胞浆中.表明NP作为立早期蛋白,始终在胞浆中进行复制;在病毒感染初期,NP介导核糖核蛋白复合物发挥转录和翻译功能.本研究为深入开展NP与病毒mRNA转录、复制和包装的相互关系机制的研究奠定了基础.     

H3N2亚型SIV核蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

【目的】克隆和表达H3N2型猪流感病毒(SIV) A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的核蛋白（NP）基因,为制备NP抗体和SIV基因工程疫苗奠定基础。【方法】提取SIV A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的RNA,用RT-PCR扩增NP基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体,构建重组表达载体,并将其转化入大肠杆菌Rosetta中表达,用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物,同时考察IPTG不同浓度（0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mmol/L）和不同诱导时间（2,4,6,8 h）对重组NP蛋白表达量的影响。【结果】克隆到1 512 bp的NP基因,与预期的核蛋白基因大小一致,共编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌Rosetta中表达出了分子质量约60 ku的重组核蛋白,其主要以包涵体的形式存在。IPTG不同诱导浓度和不同诱导时间对重组NP蛋白表达量的影响均较小。【结论】克隆和表达了H3N2亚型猪流感病毒的核蛋白基因。     

端粒酶调节的基本机制

目前,我们能够确定,端粒酶调节与人类疾病密切相关。端粒酶调节的分子基础高度复杂,受多种因素影响。首先,端粒酶催化亚基(TERT)在端粒酶调节中起着主要作用,同时端粒酶RNA(TR)也发挥一定作用。其次,基因量的变化、端粒酶中心亚基的类型也都制约着端粒酶调节。     

α-突触核蛋白在神经损伤中的作用

α-突触核蛋白是存在于中枢神经系统突触前膜的小分子可溶性蛋白质,其突变或过表达是人和动物神经退行性疾病的一个重要特征,本文从α-突触核蛋白的结构、生理功能、在帕金森病中的作用以及抗生剂对其的影响等方面介绍了近年来对α-突触核蛋白的研究进展。     

犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析

根据GenBank中报道的CDV核苷酸序列,设计合成了2对特异性引物,对犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)核蛋白(N)和融合蛋白(F)两种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,CDVLP株N蛋白基因全长1571bp,预测编码523个氨基酸;F蛋白基因全长1989bp,预测编码662个氨基酸,F蛋白氨基酸序列中含有5个潜在的N-联糖基化位点。聚类分析提示,CDVLP株是一株与CDV强毒株亲源关系很近的毒株。用DNAstar软件对CDVLP株和Onderstepoort弱毒株N蛋白和F蛋白进行了疏水性及抗原表位预测分析。抗原表位差异提示CDVLP毒株N和F蛋白的免疫原性可能要优于Onderstepoort弱毒株。在分子水平上阐明了CDVLP株的N和F蛋白基因更适合作为构建基因疫苗和重组活载体疫苗的目的基因。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及原核表达

通过RT-PCR技术从细胞毒液中扩增N蛋白cDNA,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,所获得的重组质粒pET-28a-N经酶切鉴定正确后,将其转化入表达菌E.coliBL21plysS诱导表达,用SDS-PAGE与Western blotting对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为372 bp的N蛋白基因,诱导表达重组质粒pET-28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1 mmol/L时,诱导4 h蛋白表达量最高,出现分子质量约为18 ku的目的蛋白带,与N蛋白的理论值相符。经Western blotting检测,该表达产物可与PRRSV阳性血清发生特异性反应。获得的PRRSV N蛋白为建立针对该病毒抗体的间接ELISA检测方法,以及为进一步研发PRRS抗体检测试剂盒奠定了基础。