山东地方鸡种NR3 C2基因多态性检测及其与繁殖性状的关联分析

为研究NR3C2基因与鸡繁殖性能的相关性,本试验采用PCR-RFLP方法检测了鸡盐皮质激素受体(NR3C2)基因在汶上芦花鸡、济宁百日鸡和莱芜黑鸡3个地方鸡种和1个引进高产蛋鸡品种海兰褐中的多态性,结果在4个群体中检测到NR3C2基因3 714 nt处发生点突变G→A,基因型GG在3个地方鸡种中表现为劣势,而在高产蛋鸡海兰褐中表现为优势基因型,频率为88.84%,优势等位基因G频率为93.93%。该位点各基因型与392只莱芜黑鸡4个繁殖性状的关联分析结果表明3 714位点与43W产蛋量(P=0.0467)、44W产蛋量(P=0.0486)和45W产蛋量(P=0.0499)均表现出显著相关,且GG基因型个体的开产日龄最早,比GA基因型个体平均早1.17 d。因此,GG基因型可以作为地方鸡种繁殖性状的分子标记,在地方鸡种遗传改良过程中加以利用。     

潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达

 从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒( Turnip m osaic virus, TuMV) 分离物(TuMV-Ra) , 通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白(CP) 基因, 对其进行了序列测定, 并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明, TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.9% ～99.0% , CP氨基酸序列同源性为94.8%～99.7%; 其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高, 核苷酸序列的同源性为98.7%和99.0% , 氨基酸序列同源性为99.0%和99.7%。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CHINA-WF CP基因核苷酸同源性为93.66% , 氨基酸同源性为96.53% , 说明病毒发生了比较大的变异, 而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra CP基因克隆到原核表达载体pET-22b ( + ) , 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达出分子量为38 kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-Ra CP在大肠杆菌中得到了正确表达。     

苹果属小金海棠MxIrt1基因特异性片段的原核表达及多克隆抗体的制备

 MxIrt1是从苹果属植物小金海棠中克隆出的二价阳离子转运膜蛋白基因。为进一步研究该基 因的功能, 利用MxIrt1基因位于第3和第4跨膜区之间的162 bp片段, 构建了原核表达载体pGEX-MxIrt1,经原核表达、亲和层析、获得GST2MxIRT1融合蛋白, 以融合蛋白为抗原, 制备多克隆抗体, ELISA方法检测抗体效价阳性, 蛋白质印迹检测植物体内总蛋白, 获得与预期大小一致的特异性条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。     

番茄黄化曲叶病毒的系统发育分析及多重PCR快速检测

通过对国内已报道的番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）的DNA-A全基因组进行序列比对分析,发现TYLCV各中国分离物具有较高的相似性。TYLCV全序列及CP序列核苷酸和氨基酸系统发育分析结果显示,我国中东部及东南沿海地区为番茄黄化曲叶以色列病毒（TYLCV-IL）各分离物所侵染,而西部和西南部内陆地区为番茄黄化曲叶中国病毒（TYLCCNV）各分离物所侵染。基因多态性分析结果表明,TYLCV在进化上具有较强的保守性,但核苷酸突变位点（Pi）在染色体上的分布却具有较高的多态性,因此针对TYLCV的严格保守区设计出3对特异性引物,建立了以多重PCR技术为基础的快速、高效、特异性检测TYLCV的方法。