猪蓝耳病疫苗的免疫原性、保护效果以及安全性综述

<正>猪蓝耳病(PRRS)给世界各国的养猪业造成了严重的经济损失。近几年,由蓝耳病病毒(PRRSV)变异毒株引起的高致病性PRRS给中国以及泰国、越南、柬埔寨等东南亚国家造成了严重影响,导致极高的死亡率,并且几乎波及所有日龄段的猪群。PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属,为有囊膜的正链单股RNA病毒,基因组大小约15 kb,共有9个开放阅读框(ORF)。PRRSV可以分为欧洲(EU)和北美(NA)两种基因型。这两种基因型的病毒核苷酸序     

新发动物疫病检测方法研究及口岸检疫应用展望

目前我国口岸已有的一些疫病检测方法,主要是针对进境动物检疫疫病名录中提及的已知病原,而针对新发病原的检测方法较少。本文介绍了传统病原的检测方法,包括病原分离和培养、血清学方法、蛋白质免疫印迹和电子显微镜观察等,阐述了新型分子生物学检测方法,如随机引物PCR法、序列非依赖性单引物扩增技术、小RNA深度测序技术、病毒宏基因组学技术等,并对上述方法在口岸中的应用前景进行了分析。     

中国工程院农业学部考察西南大学蚕学与系统生物学研究所

2008年3月21日,出席中国工程院农业学部常委扩大会议的中国工程院农业学部常委管华诗、石玉林、方智远、戴景瑞、山仑、向仲怀、唐启升、孙九林、陈焕春等9位院士到西南大学蚕学与系统生物学研究所考察。长期以来,院士们对中国家蚕基因组计划给予了极大的关心和支持,对此,所长向仲怀院士特别表示了感谢。在中国家蚕基因组计划竞争最激烈、处境最艰难的时期,中国工程院多位院士以《院士建议》等方式,多次呼吁重视该战略性项目,为该计划的立项发挥了关键性作用。在蚕学实验室报告厅,蚕学与系统生物学研究所副所长夏庆友教授向院士们介绍了中国家蚕基因组框架图、桑品种选育等研究进展情况和家蚕基因组研究在丝绸产业、生物制药等方面取得的突破。专家们详细询问了我校桑品种在新疆沙漠地带成功种植的情况,并对在家蚕产业、基因图谱以及基因发现等三大研究平台、茧丝蛋白合成等四大性状研究、素材创新等五个目标的相关工作给予了充分肯定,院士们对家蚕基因组计划特别是后续研究的方向和所取得的成果表示赞赏。中国工程院农业学部考察西南大学蚕学与系统生物学研究所     

旋毛虫新生幼虫cDNA文库构建及其特异性基因的筛选与鉴定

构建旋毛虫新生幼虫cDNA文库并对旋毛虫新牛幼虫期特异件基因进行筛选与鉴定,筛选出期特异性的基因片段.用λZAPⅡExpress载体成功地构建了旋毛虫新生幼虫的cDNA文库,并用放射性同位素a-38P标记cDNA探针对筛选出的阳性克隆进行鉴定.所构建的cDNA文库容量为1.92×106,重组效率为98.6%,所有的克隆片段都在0.5～2.0 kb之间,筛选获得7个阳性克隆,其大小在1.4 kb左右;用放射性同位素a-32P标记cDNA探针后,与旋毛虫成虫、肌幼虫、新生幼虫及成虫/新生幼虫cDNA文库质粒DNA进行Southern印迹杂交,结果与新生幼虫和成虫、新生幼虫cDNA文库质粒DNA有杂交而与成虫、肌幼虫cDNA文库质粒DNA不杂交.该基因是新生幼虫期所特有的cDNA片段.     

江西省猪细环病毒1型和2型流行情况调查及全基因组克隆与序列分析

目前在我省许多地区猪群中是否存在TTSuV感染尚未见相关报道,为更好的了解猪细环病毒1型和2型在猪群中进化情况以及进一步研究其遗传变异,根据NCBI已发表的猪细环病毒两种基因型全基因组序列,在序列保守区域用设计特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)进行该病毒的检测及全基因的扩增。通过将扩增产物胶回收后进行T-A克隆,然后进行序列测定和同源性与系统进化分析。本试验检测出猪群TTSuV1型和TTSuV2型在猪群中的感染情况,全基因测序得到的序列确定为TTSuV1和TTSuV2全基因序列。对测得序列进行同源性分析与遗传进化分析,分析结果表明,分离株(JX TTSuV)与国内外不同地域TTSuV全基因组序列之间差异较大,同源性为67.8%~97.2%;进化分析表明,JX TTSuV与其他株TTSuV参考株亲缘关系远近各不相同,与日本分离株(AB076001)和巴西分离株(AY823991)亲缘关系较近。     

猪耳组织DNA的快速提取

采用一步法提取的猪基因组DNA,可直接用于PCR扩增、单链构象多态性(SSCP)分析及测序。操作步骤为:采取新鲜猪耳组织2～10mg,蛋白酶K消化,55℃1h,滤纸过滤消化产物。取孔径为1.2mm的滤纸(含有足量的DNA)作为模板进行PCR扩增。结果表明,提取的基因组DNA质量较高,PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和SSCP分析后可见清晰的条带,可进一步用于克隆测序。滤纸上的DNA干燥后可常温保存。该方法简单、快速,成本低,效率高,适用于大批量的基因分型,也可用于提取不同组织的基因组DNA。     

1株野鸭源禽流感病毒全基因的分子克隆和测序

从2004年8月采自黑龙江扎龙自然保护区的野鸭咽喉和泄殖腔拭子中监测到并成功分离出1株禽流感病毒。经亚型鉴定确定为H4N6型禽流感病毒。命名为A／maliard／ZhaLong／88（H4N6）。携带该病毒的野鸭外观健康，为隐性带毒。对此株禽流感病毒基因组的8个节段进行全序列扩增并测序，并与GenBank上发表的不同来源的H4亚型禽流感病毒进行核苷酸及氨基酸序列的同源性比较，分析了遗传变异关系及此株病毒的潜在致病力特点。     

专家文库

黄如渠,男,广东潮州人,1974年2月出生,农业推广硕士,高级畜牧师,现任湛江广垦沃而多原种猪有限公司总经理,广东省科技评估专家库专家,广东省农业技术专家库专家,国家职业技能鉴定考评员（畜牧类）。1995年毕业于广东海洋大学畜牧兽医专业,2010年获得华南热带农业大学硕士学位,从事养猪生产技术管理、兽医科学研究等工作17年。     

1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的分离鉴定及基因组序列分析

【目的】 研究1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的基因组信息。【方法】 采用厌氧培养法, 通过乳酸分解培养基(LADM)初筛、梭菌增殖培养基(RCM)复筛, 从饲喂乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离利用乳酸快、丁酸转化率高的菌株, 对所筛选的菌株进行形态鉴定、16S rDNA序列分析、乳酸转化特性试验、基因组重测序和框架图测序, 并对其编码蛋白进行功能注释。【结果】 分离得到1株分离菌LY33, 基于形态和16S rDNA序列分析鉴定为丁酸梭菌。菌株LY33对乳酸具有较好的利用能力, 在生长第6天可将66 mmol的乳酸基本转化完全, 生成17 mmol左右的丁酸。LY33菌株的重测序表明, 其编码基因整体变异较小, 与参考基因组相比, LY33菌株全基因组杂合比率为0.022‰, 单核苷酸多态性(SNP)位点变异总数21 590个(占整个基因组0.4666%), 插入缺失(InDel)突变总和594个(占0.0128%), 不存在拷贝数变异(CNV), 结构变异(SV)注释的变异总数103个(占0.0003%)。突变基因主要为与菌株生长、能量代谢调节、维生素合成(特别是生物素)有关的基因, 分布于2条染色体的多条序列上。LY33菌株框架图测序及其编码基因蛋白的功能注释表明, 其基因组序列长度4 627 127 bp, GC含量28.60%, 含有4 171个基因, 编码区总长度占比84.12%, 参与了糖代谢(carbohydrate metabolism)、膜转运(membrane transport)和氨基酸代谢(amino acid metabolism)等多种代谢途径转化过程, 基因组中抗大环内酯类药物、抗杆菌肽、VanI糖肽抗性基因个数较多。【结论】 本研究从饲喂4%乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离到1株利用乳酸快、丁酸转化率高的LY33菌株, 经鉴定为丁酸梭菌, 其具有良好的应用前景, 可作为一种新的微生物资源用于微生态制剂产品。     

羊驼皮肤中肌钙蛋白C(TnC)基因表达分析

从羊驼皮肤cDNA文库中筛选到TnC基因的克隆,经PCR鉴定并测序得知:克隆大小为722 bp,含有一个完整的开放阅读框(ORF)。并利用生物信息学方法对该基因进行分析,发现该基因编码160个氨基酸,为膜蛋白,部分具有高度同源性,并还有一个EFh家族的保守区域,是该蛋白的功能区域。