猪繁殖与呼吸综合征病毒入侵受体唾液酸黏附素的表达与纯化

为了探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)假定受体唾液酸黏附素(sialoadhesin,Sn)的结构生物学信息及其在PRRSV入侵过程中所发挥的作用,利用昆虫表达系统(果蝇胚胎细胞,S2细胞)表达了猪源Sn v-set Ig-like结构域重组蛋白,并进行了Western blotting检测、质谱检测及镍柱纯化试验。结果表明,成功表达了目的重组蛋白,表达的重组蛋白序列与Sn v-set Ig-like结构域目的蛋白序列100%匹配,且获得的重组蛋白具有生物学活性,纯度高达99%。     

唾液酸及其分析方法研究进展

随着糖生物学和糖组学研究的不断深入,已阐明了碳水化合物对生物识别系统的巨大作用。唾液酸是糖基化的一种主要表现形式,涉及机体的多种生理和病理过程,尤其在作为肿瘤和癌症疾病的药物靶标方面发挥了重大作用。论文从唾液酸的基本结构、连接形式、化学衍生化方式及其分析检测方法等方面对唾液酸的主要分析方法进行综述,对唾液酸及其多糖衍生物的物质结构和生物学功能有了更全面的认识,有助于发现基于唾液酸的生物标记和药物靶标,用于临床疾病诊断或监测治疗效果,对未来的生物学研究和医学实践提供了一条新的研究途径。     

生一次病 抵抗力上一个台阶

家长通常认为,免疫力强就是不得病。其实并非如此。人的免疫力分为两部分:先天性免疫和后天性免疫。先天性免疫是与生俱来的,人人都有,比如胃酸、唾液酸、呼吸道黏膜、血液里的细胞都能够杀菌,排汗、排     

唾液酸黏附素SN及其介导PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞的研究进展

PRRSV是一种能够引起母猪的生殖性疾病和各个年龄阶段猪的呼吸性疾病的RNA正链病毒,在动物体内,PRRSV对单核细胞和巨噬细胞分化的亚群细胞有选择性趋性.唾液酸黏附素SN,又称为CD169或Siglec-1,是唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素,属于Ig超家族的I型膜蛋白.猪SN基因与人、小鼠等物种存在显著的差异,物种间...     

微波辅助酶法提取燕窝唾液酸及其益智功能性的研究

为优化燕窝唾液酸微波结合木瓜蛋白酶提取工艺,并研究燕窝对幼鼠学习记忆能力的影响。在单因素试验的基础上,选取微波处理时间,酶解温度和pH三个因素进行响应面实验设计,优化燕窝唾液酸的提取工艺;采用水迷宫试验,测试燕窝对正常幼鼠学习记忆能力的改善作用。确定了燕窝唾液酸微波结合木瓜蛋白酶提取的最优工艺,工艺参数为微波时间100 s,酶解温度60℃,pH 7,在此条件下唾液酸提取率为12.58%;水迷宫试验表明,燕窝唾液酸提取液灌胃组幼鼠寻找平台平均潜伏期均缩短,穿越平台次数都增加。响应面法优化微波结合木瓜蛋白酶提取得到燕窝唾液酸的工艺,燕窝对幼鼠的学习记忆能力有一定的改善作用。     

民猪唾液酸合成酶基因的克隆、表达及进化分析

为进一步了解猪的唾液酸合成酶基因(SAS)的生物学功能,研究采用RT-PCR技术克隆了民猪唾液酸合成酶基因的全长CDS序列;采用生物信息学的方法对其编码的氨基酸序列进行分析;构建分子进化树;采用实时定量PCR方法对该基因在大肠、腿肌、肺、脂肪、心、脾和肝脏组织的表达情况进行分析。结果表明:民猪的唾液酸合成酶基因全长1080 bp,编码359个氨基酸,是一种跨膜蛋白。该蛋白存在1个似抗冻蛋白域标记,同时具有多个磷酸化位点。所构建的分子进化树与物种进化的拓扑结构基本一致。该基因在肺和脾中表达水平最高,其次是脂肪在大肠、肌肉、心和肝中表达水平较低。     

尼罗罗非鱼Siglec-4b like基因的克隆与表达特性分析

从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)嗜中性粒细胞中克隆了唾液酸结合型免疫球蛋白凝集素 Siglec-4b like基因,对其进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR检测：1)早期胚胎发育过程的表达;2)成鱼组织中的分布;3)人工感染无乳链球菌（Streptococcus agalactiae, GBS）后组织表达的变化。结果表明,尼罗罗非鱼Siglec-4b like具有与哺乳类Siglec-4相似的特异性结构域及保守氨基酸残基;早期胚胎发育Siglec-4b like基因在卵子中有一定表达量,受精后7 h 即卵裂期表达上调,随后表达下降;Siglec-4b like基因在所检测的各组织中均有表达,鳃的表达量最高,其次是肌肉、皮肤、头肾和肠,其他组织的表达量较低;人工感染无乳链球菌后,Siglec-4b like在鳃、肾与肠等多个组织的表达均呈下调趋势。研究结果为进一步开展Siglec-4b like对罗非鱼免疫系统的调控作用及其与无乳链球菌免疫逃逸机制关系的研究奠定基础。     

检测胸水与血清的唾液酸、癌胚抗原及乳酸脱氢酶对鉴别良、恶性胸水的价值

检测良、恶性胸水患者各２０例的血清与胸液的唾液酸（ＳＡ）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和４０例健康人的血清ＳＡ的结果表明：（１）良、恶性胸水患者的血清ＳＡ均高于正常人组（Ｐ＜０．０１），但良、恶性两组间比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）；（２）良、恶性胸水患者的胸水与血清ＳＡ、ＣＥＡ、ＬＤＨ及ＳＡ＋ＣＥＡ联合，ＳＡ＋ＣＥＡ＋ＬＤＨ联合检测，鉴别良、恶性胸水以ＣＥＡ（胸液／血清比值≥１．５）最优，特异性高达９５％，敏感性为５５％。     

SPF鸡胚St3galⅠ基因的克隆及其在MDCK细胞中的表达

为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3galⅠ),并将回收的片段插入到pMD18-T载体中。酶切pMD18-T-St3galⅠ和pCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3galⅠ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染MDCK细胞,在G418的筛选下,获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和PCR检测,筛选可稳定表达St3galⅠ基因的细胞株。结果表明,从鸡胚中克隆的St3galⅠ基因成功的插入到pCI-neo质粒,从而实现真核表达载体pCI-neo-St3galⅠ的构建。在G418选择压力下,初步获得了稳转目的基因的MDCK细胞系。将抗性细胞混合克隆进行稀释,经选择后挑选出30个单克隆抗性细胞株。分别以转染细胞基因组DNA和总RNA为模板,经PCR检测显示,目的基因已整合入MDCK细胞的基因组中并可稳定的进行表达。     

pAPN和NEU3的敲除对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)侵染的影响

氨基肽酶(pAPN)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)侵染的主要受体,为了验证pAPN和唾液酸神经氨酸酶(NEU3)双基因对TGEV入侵机制的影响,应用CRISPR-Cas9基因编辑技术,敲除ST细胞的2个基因pAPN和NEU3。经过病毒感染试验,测定敲除2个目标基因pAPN和NEU3的ST细胞,对病毒的侵染变化以及病毒拷贝数的变化和细胞病变改善,同时监测病毒侵染后纤连蛋白的变化。结果表明,与对照组相比,敲除2个目标基因pAPN和NEU3的ST细胞,明显减轻TGEV侵染引起的细胞病变,TGEV的拷贝数也明显出现下降。此外,同样滴度的TGEV侵染pAPN和NEU3双基因敲除ST细胞后,诱导ST细胞的免疫应答物IFN-β的mRNA水平明显低于野生型ST细胞组。pAPN和NEU3双基因的敲除,明显降低了ST细胞中TGEV的拷贝数,同时也减轻病毒引起的细胞病变,结果证实细胞中的pAPN和NEU3双基因可作为将来养猪生产中抗病毒治疗及抗病品种选育的靶基因。