利用性控胚胎快速繁育美国高产奶牛的实用技术

1受体母牛的标准 1．1年龄：15-20月龄青年母牛为最佳，三胎以内的经产母牛要求发育良好、刚断奶母牛经恢复调整两个月后可进行移植。     

哺乳动物体细胞克隆研究进展

哺乳动物体细胞克隆技术是近年来才发展起来的技术，但体细胞克隆绵羊－多利的诞生却引起了世界轰动，充分显示了其重在的科学研究价值和潜在的应用价值。本文对哺乳动物体细胞克隆技术研究现状，理论基础研究，应用等方面作一综述。     

哺乳动物附植前胚胎的基因表达调控

哺乳动物胚胎附植前期包括:合子的形成,胚胎基因组的激活和细胞分化的开始。在这个时期,发育由母源物质控制转为合子基因控制,在此过程,同时形成染色质介导的转录抑制时期,要解除抑制必须经过胚胎基因组的激活。通过对体内、外附植前胚胎的mRNA的表达特点以及它们与成功发育联系的研究,可以筛选出最佳的体外培养条件,设计最佳的核移植方案。     

‘过山香’香蕉多芽体的诱导及其体细胞胚的发生

 以我国重要香蕉种质‘过山香’ (AAB) 为材料, 研究了香蕉多芽体诱导、多芽体茎尖薄切片即分生组织性的表层结构物( scalp) 愈伤组织诱导和体细胞胚发生的合适条件。结果表明, 该品种单个不定芽茎尖在P4培养基(含BAP 100 μmol·L ^{- 1}和IAA 1 μmol·L ^{- 1} ) 中继代5个周期后可诱导获得类似花椰菜结构的多芽体。从30 μmol· m ^{- 2} ·s^{- 1}光强, 光/暗周期(16 h /8 h) 培养的多芽体所获得的scalp在添加2,4-D 5μmol·L ^{- 1}和Zeatin 1 μmol·L ^{- 1}的愈伤组织诱导培养基中黑暗培养, 45 d后愈伤组织诱导率可达97.6%。诱导20 d后黄色分生小球体类结节状愈伤组织开始发生, 90～120 d后在分生小球体局部可获得白色或浅黄色松散的胚性愈伤组织(诱导率为17.5% ) 。从胚性愈伤组织诱导的体细胞胚在成熟培养基上培养60 d后体胚萌发率和植株转化率分别为14.5%和11.1%。     

芸薹属作物小孢子技术的发展与应用

1游离小孢子培养技术的发展 被子植物的花药中,细胞按染色体的倍性可分为两类:一类是单倍体细胞,即由花药中的花粉母细胞减数分裂后形成的小孢子(未成熟花粉);另一类是二倍体细胞,如药隔、药壁及花丝等组织.1950年Tulecke首次成功地培养了数种裸子植物的成熟花粉粒,发现在特定的培养基上,一些花粉可以不按正常的发育途径发育成成熟花粉,而是形成愈伤组织,1964年印度学者Guha和Ma heshuari首次报道从毛蔓陀罗花药培养中获得了单倍体植株.1972年Sharp等用看护培养法培养番茄的离体花粉,获得单倍体无性繁殖系.1973年Nitsch等首先成功应用游离小孢子培养技术获得毛蔓陀罗的小孢子胚与再生株.1982年,德国的Lichter等人成功诱导出甘蓝型油菜(Brassica napus L.)小孢子胚及再生植株.自此芸薹属作物游离小孢子培养技术进入快速发展阶段.在芸薹属作物中,小孢子培养已在埃塞俄比亚芥、黑芥、大白菜、结球甘蓝、小白菜和芜菁等蔬菜上获得成功.1989年日本学者Sato首次报道成功地诱导出大白菜游离小孢子胚和再生植株.1992年国内学者曹鸣庆等报道大白菜游离小孢子培养获得成功.目前,游离小孢子培养技术已经涉及芸薹属的6个主要栽培种.     

四川‘竹根姜’胚性细胞悬浮系的建立与植株再生

 选用四川省地方品种‘竹根姜’的茎尖组织建立了体细胞胚性细胞悬浮系, 并通过悬浮培养获得了姜再生植株。结果表明悬浮细胞干质量受pH影响。接种量和AgNO₃ 对悬浮细胞的生长都有影响:最佳接种量为1.0% , 最适AgNO₃浓度为6.0 mg·L ^{- 1}。胚性细胞悬浮系增殖后, 接种到前期筛选的成熟分化培养基上获得了再生植株。     

奶牛胚胎性别控制技术的试验研究进展

应用LAMP法进行了613枚胚胎的性别鉴定结果，雌性胚胎302枚(49．3％)，雄性胚胎311枚(50．7％)，移植成功率平均为40．9％(122／298)，出生后代中与性别鉴定结果一致的121头，性别鉴定准确率为96．0％(121／126)。应用奶牛性腔胶囊后输精的14头供体母牛，共采集69枚可用胚胎，对其中64枚胚胎进行性别鉴定，确定雌性胚胎的比例为71．9％(46／64)，头均获4．9枚可用胚胎。应用奶牛性控液对3头供体母牛宫注后输精，共采集26枚可用胚胎，经性别鉴定后确定雌性胚胎比例为73．1％(19／26)，头均获可用胚胎8．7枚。应用分离X精子冷冻精液对12头供体母牛进行输精，对采集到的61枚胚胎进行性别鉴定后，确定雌性胚胎比例为100％(61／61)，头均获得可用胚胎5．5枚。11枚性控冷冻胚胎移植后，40d以上未返情率为63．6％(7／11)。用分离的X精子冷冻精液对供体母牛输精后，可获得与未分离冷冻精液输精后相接近的超排供体母牛采集胚胎的数量和质量。     

分子育种成果之我国首例体细胞克隆猪

2005年8月5日中国农业太学成功获得我国第一头体细胞克隆猪,填补了我国在这一领域的空白,使我国成为世界上第七个拥有自主克隆猪能力的国家.     

猪胚胎移植时间与胚胎生长发育关系的探讨

在猪胚胎附植前期,在不同时期的母体子宫环境下,诱导胚胎发育通过胎儿和胎盘的发育状况确定猪胚胎移植的最佳时期。用24头(其中12头为供体,另12头为受体)出现发情症状24h之后的约克夏母猪与约克夏公猪交配,在妊娠60h,从供体输卵管中冲出胚胎(此时胚胎处于1～4细胞期),分别移入处于发情期36h、60h、84h的受体输卵管中。以胚胎的日龄计算,在妊娠的112d取出受体的子宫,分别检测胎儿体重、胎盘的重量、胎盘的表面积及胚胎附植位点的长度。通过比较,发情3.5d和2.5d移入受体的胎儿,虽然幼仔的数量相近(9.1±0.9),但胎儿比较重(分别为1.44±0.05kg,1.23±0.04kg,p<0.001),并有较大的胎盘表面积(1793±60cm2,1459±43cm2,p<0.01)和较长的附植位点(32.1±1.5cm,24.9±0.6cm,p<0.001)。表明胚胎位于输卵管时进行移植效果比较理想。     

粉纹夜蛾离体细胞对Bt Cry1Ac毒素的抗性发展及其交互抗性

以Cry1Ac活性毒素逐代筛选抗性粉纹夜蛾离体细胞BTI-TN-5B1,抗性发展速度呈S形曲线,经56代选择后,抗性比上升至1 280倍.在去除选择压力后,抗性比逐渐下降.低水平抗性细胞抗性衰退较快,而高水平抗性细胞抗性衰退较缓慢.抗性比衰退至1.5倍的细胞在复筛后抗性比恢复较快.抗性细胞对苏云金杆菌工程菌GC-91(Bt GC-91)、苏云金杆菌鲇泽亚种(B.t.awazai)和苏云金杆菌库斯塔克亚种(B.t.kurstaki)的复合毒素晶体的活性毒素都具有较高的交互抗性,但对农药无交互抗性,对杆状病毒的敏感性也没发生变化.