文心兰HSP70基因的克隆及表达分析

为研究文心兰热激蛋白70基因（命名为OnHSP70）的分子特性及表达特点,以文心兰‘柠檬绿’（Oncidium hybridum ‘Honey Angel’）为材料,采用RT-PCR技术克隆OnHSP70,利用生物信息学方法分析其分子特性,通过qRT-PCR技术分析其在不同组织及不同非生物胁迫处理下的表达特点。生物信息学分析表明：该基因开放阅读框为1944 bp,编码647个氨基酸,翻译的蛋白为稳定蛋白,属于HSP70超家族,其蛋白二级结构由41.11%的α-螺旋、17.77%的延伸链、7.73%的β-转角和33.38%的无规卷曲组成,具有2个高度保守的功能域。聚类分析表明：该蛋白与铁皮石斛和深圳拟兰的HSP70亲缘关系较近。qRT-PCR分析表明：文心兰HSP70在4种不同组织器官中具有表达差异性,在花中的表达量最高;高温处理后基因的表达量明显上升;40 ℃高温胁迫4 h时表达量达峰值;茉莉酸甲酯及水杨酸处理时表达量呈现下调响应。本研究为后期该基因功能研究及提高文心兰对高温的适应性提供理论基础。     

4种文心兰的光合作用特征研究

以自主选育品种玉香、金香和引进品种白力士、光华为材料,对其叶片叶绿素含量进行测定,并通过CI-340便携式光合作用测定仪测定光响应曲线,研究其光合作用。结果表明:玉香的叶绿度显著高于其他3个品种,表明其对光能的利用率较高;4个品种的文心兰基本表现出2个类型,相对于白力士和光华而言,玉香和金香具有较高的光补偿点、较低的饱和点和最大光合速率,表明其对光强环境的适应能力相对较低,也就是对栽培环境的光条件要求较高。     

茉莉酸拮抗乙烯延缓文心兰花朵衰老的研究

文心兰(Oncidiumhybridum)花朵的花药帽易脱落，导致切花加速衰老。以‘柠檬绿’文心兰为试验材料，研究脱药帽后花朵乙烯释放速率和茉莉酸(jasmonic acid,JA)含量变化，外源茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)及其抑制剂乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid,ASA)对脱药帽文心兰花朵衰老、乙烯释放及乙烯合成关键基因OhACO1和OhACO2表达的影响，探究乙烯和JA在文心兰花朵衰老过程中的作用。研究结果表明：脱药帽处理会加速文心兰花朵衰老，脱药帽处理1 d时乙烯释放速率已达168.23 nL·g^-1·h^-1，而同期未脱药帽对照没有乙烯释放，JA含量显著增加，但脱药帽处理比对照低57.86%。此外，外源MeJA处理显著抑制文心兰花朵衰老，而其抑制剂ASA处理则明显促进衰老，外源MeJA处理抑制了乙烯生物合成关键基因OhACO1和OhACO2的表达，而ASA不同程度地增加了其表达，说明JA可能通过抑制乙烯合成来延缓文心兰花朵衰老，在文心兰花朵脱药帽处理诱发的衰老过程中JA具有拮抗乙烯、延缓...     

文心兰高效再生体系的建立

[目的]建立文心兰高效再生体系,为利用转基因技术进行品种改良提供科学依据.[方法]以文心兰柠檬绿的无菌苗叶片为材料,探讨不同植物生长调节剂配比对其原球茎诱导的影响,开展增殖、生根及移栽研究,建立其高效稳定的再生体系.[结果]影响文心兰原球茎诱导的3种植物生长调节剂主次排序为萘乙酸(NAA)>噻苯隆(TDZ)>6-苄氨基嘌呤(6-BA),在1/2MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA和0.3 mg/L TDZ的诱导率最高,达48.0%.培养基中活性炭含量及碳水化合物种类对文心兰原球茎增殖的影响存在明显差异,不同活性炭含量处理间的原球茎增殖系数存在显著差异(P<0.05,下同),添加1.0 g/L活性炭较添加0.5 g/L活性炭的增殖系数显著升高,不同碳水化合物种类间的原球茎增殖系数排序为海藻糖>麦芽糖>蔗糖,最佳增殖和分化培养基为1/2MS+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭+20 g/L海藻糖.添加10%椰子水的文心兰幼苗生根数显著高于添加10%香蕉汁和10%苹果汁,每株平均生根量接近4.00条,即生根效果最佳的培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+10%椰子水.移栽过程中根部用水苔包裹后再移至椰糠中,保证光照、水分适宜,适当添加缓释肥,移栽成活率可达100%.[结论]利用海藻糖或麦芽糖作为碳源的文心兰原球茎增殖效果较优,生根数和生根质量优势明显;不同植物生长调节剂配比、碳源和有机物的添加对文心兰组织培养具有明显的促进效果.     

文心兰类原球茎的诱导与增殖技术的优化

以文心兰试管苗叶片为材料,在(25±1)℃,光照强度24～30μmol/m2.s,光照时间10 h/d下研究类原球茎的诱导和增殖技术。结果表明:①蔗糖适于作为类原球茎诱导的碳源,类原球茎诱导率52%,单位叶片类原球茎2.725个;②附加3～5 mg/L的Ad处理有利于类原球茎诱导(诱导率57%,单位叶片类原球茎数量3.725～4个);③6-BA是影响文心兰类原球茎增殖的主导因子,中等浓度的6-BA(3.0 mg/L)有利于类原球茎的增殖,增殖率(15.29)极显著高于其它水平;④培养基1/2MS+6-BA 3.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖20 g/L最有利于文心兰类原球茎的增殖,增殖率最高(15.95),极显著高于其它处理组合。     

文心兰EMS离体诱变及再生苗RAPD检测

采用3种浓度的EMS对离体培养的文心兰类原球茎薄切片进行不同时间的诱变处理研究.发现EMS使部分薄切片褐化死亡,再生类原球茎的生长受到抑制,再生苗数量减少;EMS的伤害作用随诱变剂浓度的提高和处理时间的延长而加重,但对试管苗的生长影响并不大.采用10条RAPD引物进行的PCR检测结果表明,经EMS处理的再生苗DNA序列...     

文心兰栽培技术及病虫害防治

文心兰（Oncidium spp．）花形奇特,花色丰富,盆花和切花花期长久,因此近年来在我国产业化生产发展很快。介绍了文心兰的形态特征、生物学特性、主要栽培品种,从繁殖技术、栽培环境管理、栽培基质、种植、挟盆、修剪、肥料管理等几个方面详细阐述了文心兰的栽培技术,并对其病虫害防治方法作了介绍。     

文心兰组织培养基激素选择及组培苗的移植管理技术

以文心兰杂交新品种星战、达卡、爪哇的茎尖及花蕾为组培材料，对适合外植体的原球茎增殖、分化的培养基、培养方式进行试验研究。对培养基激素进行筛选试验结果表明：利于原球茎诱导增殖的培养基为1／2MS 6-BA5．0mg／L NAA0．5mg／L；利于不定芽增殖的培养基为1／2MS 6-BA2．0mg/L NAA0．1mg／L；利于生根的培养基为1／2MS NAA0．5mg／L。其试管苗移植的栽培基质以小石子 小树皮(1：1)为佳。并从控制温、湿度，采取合理的水肥管理措施，进行病害防治等方面，介绍了文心兰组培苗的移植管理技术。     

文心兰的茎尖及花梗组织培养和快速繁殖探讨

将文心兰的茎尖以及花梗使用N6+6-BA 2.0mg/L的培养基;花梗分化芽,同时茎尖同时分化芽和原球茎。使用6-BA低浓度培养液对分化芽进行促进生长;使用高浓度6-BA促进原球茎的分化。结果表明:1/2N6+6-BA0.2mg/L+NAA 0.2mg/L培养基对于文心兰继代增值以及后期苗木成长促进效果良好。在培育、繁殖文心兰的后期肥料及激素的使用以及病虫害的防治,也是影响文心兰幼苗快速繁殖的重要因素。