盐酸克伦特罗的检测方法研究进展

近年来,食品安全问题受到越来越多的社会关注.盐酸克伦特罗（CL）最初作为临床上支气管扩张剂用于治疗哮喘、支气管炎等.CL属于β-肾上腺素类兴奋剂,在动物饲料中加入CL可以明显提高动物的瘦肉率,因此不少商家大量使用它来提高肉畜的品质.然而,残留在动物体内的CL会使食用的人出现不同程度的中毒情况,严重时可导致食用者死亡.目前国内外检测CL残留含量的常用方法有气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GS）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、毛细管电泳法（CE）、胶体金免疫测定法（CGIA）等.综述了近年来国内外几种检测CL残留含量的方法.     

γ辐照降解水中四环素的研究

研究了γ辐照对水中四环素(TC)的降解作用,探讨了TC初始浓度、溶液pH值,以及联合H2O2、CH3OH对其辐照降解效果的影响。结果表明:γ辐照可有效降解水中TC。在酸性和碱性条件下,TC降解效果均有明显提高,其中以pH=9时TC去除率最高。添加H2O2可在一定程度上促进TC的γ辐照降解率;而添加CH3OH则明显抑制TC的γ辐照降解。通过量化计算和液质联用(LC-MS)分析发现,γ辐照降解水中TC主要是基于.OH自由基的氧化过程。     

牛粪原料浓度对厌氧消化削减四环素类抗性基因的影响

为了探究不同原料浓度厌氧消化体系中四环素类抗性基因(Tetracycline resistance genes,TRGs)的变化,设置牛粪原料浓度为100%、75%、50%和25%,分析了TRGs、理化因子和微生物群落的变化特征及三者之间的相互关系。结果表明:不同处理之间产气速率相似,原料浓度从100%降低至25%时总产气量从358.83 mL·g~(-1)·d~(-1)增加至400.89 mL·g~(-1)·d~(-1)。消化后的大部分处理中tetO、tetQ和tetT相对丰度减小为原料的1.04%～87.06%,而tetC、tetG、tetW和tetX相对丰度增加至原料的1.32～34.99倍。与100%原料浓度相比,较低原料浓度消化后多数TRGs如tetC、tetG、tetO和tetX以及intⅠ1的相对丰度更高。不同条件下微生物群落差异明显,较低浓度原料(50%和25%)消化后优势菌门从Firmicutes变为Proteobacteria,且TRGs潜在宿主菌属的种类和数目均随着原料浓度的改变而改变。冗余分析表明,理化因子通过影响潜在宿主菌的变化从而影响TRGs的变化。综上,由废水干预的牛粪原料浓度较低的情况可能有利于TRGs潜在宿主菌的增殖,从而增加TRGs传播的风险。     

盐酸土霉素可溶性粉质量标准中鉴别方法的修正

为严格控制盐酸土霉素可溶性粉的质量,对盐酸土霉素及其可溶性粉按标准中鉴别方法进行试验。结果发现：该方法鉴别（1）、（2）项存在疏漏之处,不能客观地评价产品的质量。通过查找原因和分析,对标准提出修正建议,以便质量标准更加科学客观,可操作性更强。     

超高效液相色谱－串联质谱法检测饲料中盐酸可乐定和盐酸赛庚啶

建立了检测饲料中盐酸可乐定和盐酸赛庚啶的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC/MS/MS）分析方法。样品经酸性甲醇提取,浓缩后用乙腈-0.2%甲酸溶解,经超高效液相色谱-串联质谱在多反应检测（MRM）模式下测定。结果显示盐酸可乐定和盐酸赛庚啶标准曲线在0.2～50μg/L浓度范围内线性良好。线性相关系数（r）分别为0.999 4和0.999 2;在0.02～1.0 mg/kg添加水平下,盐酸可乐定和盐酸赛庚啶的加标回收率在70%～110%,相对标准偏差（RSD）均小于10%（n=6）;本方法对动物饲料中盐酸可乐定和盐酸赛庚啶的定量限为0.02 mg/kg（S/N〉10）,检出限为0.01 mg/kg（S/N〉3）。     

紫外分光光度法测定盐酸环丙沙星、盐酸小檗碱预混剂中盐酸小檗碱的含量

以0．05mol／L硫酸作对照液，用紫外分光光度法在421nm测定了盐酸环丙沙星、盐酸小檗碱预混剂中盐酸小檗碱的含量。结果表明，盐酸小檗碱在8-56μg／mL范围内，吸光度与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0．9992，平均回收率为101．32％，RSD为0．94％（n=5）。本方法简便、快速、结果准确，适用于该制剂中盐酸小檗碱的质量分析检验。     

不同生长阶段猪粪四环素,头孢及双抗耐药细菌的数量比较研究

随着我国畜禽养殖业集约化规模化的发展,各种抗生素类化学药物的滥用问题日益明显,导致抗生素耐药菌株大量产生,这些耐药菌随动物粪便排出机体进入环境,可能扩散进入食物链,并对食品安全和人类健康造成严重威胁。本实验选取哺乳仔猪、断奶仔猪、育肥猪和空怀母猪四个生长阶段的猪粪便作为研究对象,采用微生物培养技术,较全面的监测和比较分析了不同生长阶段猪粪便中单一抗生素和多重抗生素耐药细菌的数量。结果表明:断奶仔猪粪便中四环素耐药细菌所占比例(73.02%)最大,育肥猪粪便中头孢耐药细菌占比(82.78%)最大,而双重耐药细菌主要存在于幼龄仔猪粪便中。本研究为猪不同生长阶段减抗低抗养殖提供了理论参考和依据。     

247株猪源沙门菌对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测分析

为探究猪源沙门菌分离株对四环素类抗菌药物耐药性及四环素耐药基因(tet)的流行与分布情况,从7省的合作猪场采集病死猪肝脏、肺脏、肠道作细菌分离,利用沙门菌属特异性侵袭基因(invA)和16S rDNA扩增、测序等方法进行鉴定,并用微量肉汤稀释法测定沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的敏感性,PCR方法测定tet基因,以及ERIC-PCR方法分析猪源沙门菌之间的相关性和遗传关系。从823份病料中分离鉴定出247株猪源沙门菌,分离率为30.01%。药敏结果显示,对多西环素、土霉素的耐药率分别为87.45%和94.74%。PCR检测发现,分别有62,66,3株单独携带tetA、tetB、tetC基因;分别有38,8,4,7,1株菌同时携带两种不同的tet基因(tetA+B、tetA+C、tetA+D、tetB+C、tetC+D);分别有9,6,1,6,1,4,3株菌同时携带3种不同的tet基因(tetA+B+C、tetA+B+D、tetA+B+M、tetA+C+D、tetA+D+M、tetB+C+D、tetB+C+M);分别有6,2株菌同时携带4种不同的tet基因(tetA+B+C+D、tetA+C+D+M);没有检测到单独携带tetD、tetM以及同时携带5种tet基因的菌株。接合试验表明,tetM可与tetA或tetC共同在沙门菌与大肠杆菌间转移,导致菌株多西环素抗性水平转移。试验菌共分为A~δ共30个ERIC型,tet基因分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。本试验首次在猪源沙门菌中发现了编码核糖体保护蛋白的四环素类耐药基因tetM。猪源沙门菌对四环素类药物耐药严重,对多西环素、土霉素具有普遍耐药性,tetA、tetB基因在7省猪源沙门菌中流行最广泛,分离菌对四环素类药物的普遍耐药性与单个或多个tet基因的普遍存在密切相关。     

2型猪链球菌对四环素的耐药机制

采用微量稀释法测定36株2型猪链球菌对四环素的耐药性,应用PCR扩增四环素相关耐药基因tet（M）、tet（O）、tet（K）、tet（L）、tet（Q）、tet（S）、tet（T）和tet（W）,将扩增到的耐药基因克隆、测序,并进行序列分析。结果显示,36株2型猪链球菌对四环素的耐药率为100%,MIC90高于512mg/L;其中29株扩增出tet（M）基因,6株扩增出tet（O）基因,5株同时扩增到tet（M）、tet（L）基因,同时扩增到tet（M）、tet（L）基因的菌株MIC均高于512mg/L;同源性分析结果显示,扩增到的tet（M）基因与GenBank中已公布序列的同源性为95%～100%,tet（O）基因与GenBank中已公布序列的同源性为95%～99%。结果表明,我国大部分地区的2型猪链球菌对四环素均具有很强的耐药性,主要耐药机制是由tet（M）基因介导的核糖体保护作用。     

半胱胺盐酸盐对泌乳中期热应激奶牛生产性能的影响

本试验旨在研究散栏式饲养方式下,饲喂半胱胺盐酸盐对泌乳中期热应激奶牛生产性能的影响。选择48头健康荷斯坦奶牛[体重(562.25±37.85)kg,泌乳天数(123.64±10.67)d,胎次(1.23±0.42)胎,日产奶量(26.58±1.58)kg],根据体重、泌乳天数、产奶量相同或相近的原则,随机分成4组(每组12头),对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加半胱胺盐酸盐3、15、30 g/kg。预试期12 d,正试期30 d。结果显示:随半胱胺盐酸盐添加剂量的增加,奶牛呼吸频率和直肠温度呈显著的线性降低(P0.05);干物质采食量、乳脂较正乳产量、能量校正乳产量、乳脂率、乳蛋白率均呈先升高后降低的显著的二次曲线变化(P0.05),并且以添加3 g/kg组的效果较好;正试期末,3、15 g/kg组血清甲状腺素浓度显著低于对照组(P0.05),15 g/kg组血清皮质醇浓度显著高于对照组(P0.05)。结果提示,半胱胺盐酸盐能有效缓解散栏饲养的泌乳中期奶牛热应激,提高产奶量和乳品质,本试验条件下,饲粮中添加3 g/kg半胱胺盐酸盐较为适宜。