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91.
CD4分子为动物辅助性T细胞(TH)和部分胸腺细胞的共受体与信号传导分子,参与TCR介导的TH细胞活化和胸腺细胞分化过程。本研究应用RT-PCR和RACE技术从猪胸腺细胞总RNA中扩增克隆了猪CD4全长cDNA序列,并进行了序列特性分析。序列分析结果表明,在猪胸腺细胞和外周血淋巴细胞中存在2种方式剪接的CD4 mRNA转录本,其中一种mRNA转录本缺失编码40个氨基酸残基的120nt序列,提示该转录本可能编码猪分泌型CD4分子;猪CD4全长cDNA序列为2715nt。其中5′非编码区159nt,3′非编码区1183nt,1374nt的开放阅读框编码457个氨基酸的猪CD4前体蛋白(含4个糖基化住点);猪CD4分子的7个Cys残基(Cys^43、Cys^122、Cys^327、Cys^418、Cys^421、Cys^444和Cys^446)和2个Ser残基(Ser^432和Ser^439)在动物种间保守;在猪CD4分子胞浆区.存在高度保守的Src家族蛋白酪氨酸激酶p56^kk。识别位点KKTCQC和内化相关双亮氨酸基序。推导氨基酸序列分析结果显示,猪与人、免、猫、狗和鼠CD4蛋白的氨基酸同源性分别为56.0%,54.5%。56.9%,56.5%和44.9%。 相似文献
92.
大豆孢囊线虫4号生理小种侵染大豆根系诱导表达的cDNA分析 总被引:1,自引:0,他引:1
大豆孢囊线虫(Heterodera glycines Ichinohe;Soybean Cyst Nematode,SCN)是一种土传的专性内寄生线虫。SCN的二龄幼虫侵入到大豆幼嫩的根组织中,导致大豆根内的细胞变形并与之形成“合胞体”。合胞体在形态上和生理上的变化是SCN直接诱导大豆基因表达的结果。本研究以高抗SCN的灰布支黑豆为材料,用大豆孢囊线虫二龄幼虫直接接种大豆的根系,应用DDRT—PCR技术及RDB(Reversedot—blotting)杂交鉴定,获得6个阳性cDNA克隆,分别是SCN侵染后5天的A32克隆(GenBank登录号为B1173978);侵染后10天的B12克隆(GenBank登录号为B1173979)、B71克隆(GenBank登录号为B1173980);侵染后15天的Cll克隆(GenBank登录号为B1173981)、CPl2(GenBank登录号为B1173982)克隆和CP32克隆(GenBank登录号为B1173983)。序列的同源比较表明,6个cDNA均与Shoemaker构建的大豆基因表达库中的cDNA序列有非常高的同源性,证明这些cDNA是大豆基因表达的产物。其中A32克隆的序列与控制拟南芥下胚轴生长的MYB转录因子、营养元素缺失诱导的番茄根的表达文库中的一个cDNA及番茄抗假单胞杆菌表达文库中的一个cDNA有较高的同源性。 相似文献
93.
FtsH (Filamentation Temperature-Sensitive H)是一种ATP和Zn2+依赖型金属蛋白酶,广泛存在于原核生物和真核生物中,在真核生物中是多基因家族。FtsH具有ATP酶活性、蛋白水解活性和分子伴侣活性,参与多种胁迫反应。从抗旱马铃薯(Solanum tuberosum)二倍体品系H145中分离得到cDNA-AFLP差异片段,利用RACE技术克隆了SoFtsH cDNA全长序列, 并对其进行分析。结果表明, 该序列包含完整的开放阅读框,长为723 bp, 编码129个氨基酸。SoFtsH具有2个铁氧化还原蛋白结合位点,并存在信号肽序列、跨膜区域和Zn2+结合域。SoFtsH基因序列与GenBank数据库中的其他FtsH基因进行同源序列比对, 并构建系统进化树, 发现该基因与番茄、烟草、拟南芥等高等植物FtsH基因同源性达90%以上。半定量RT-PCR和Northern Blot杂交结果表明SoFtsH基因在干旱胁迫下叶片和根系里的表达量明显增加, 且在抗旱品系H145与干旱敏感品系H214中表达模式不同。说明SoFtsH基因在马铃薯抗旱中起作用。 相似文献
94.
95.
96.
根据已发表的鸡D28k钙结合蛋白(CaBP—D28k)基因序列设计合成1对引物,利用RT—PCR技术从新扬州鸡小肠组织RNA中扩增出鸡CaBP—D28k cDNA,并克隆至pGEM—T中,经PCR、XhoⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定测序后,用DNAStar软件对克隆出的cDNA进行同源性分析。结果表明:新扬州鸡CaBP—D28k基因片断长为18.5kb,与GenBank中的CaBP—D28k基因具有高度的同源性(99.2%),在开发阅读框内仅有一个碱基的差别,中间没有出现缺失和插入,证明所得到的是鸡CaBP—D28k cDNA。 相似文献
97.
香蕉果实expansin cDNA克隆及序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
陆旺金 《华南农业大学学报》2003,24(3):40-42
提取成熟香蕉果肉的RNA并分离mRNA,以mRNA反转录合成cDNA,以该cDNA为模板,设计expansin的简并引物,进行RT-PCR(退火温度为50℃),得到的扩增产物纯化后与pGEM-T-Easy载体连接,转化大肠杆菌,任意挑选2个阳性克隆,进行序列分析,结果得到2个序列相同的expansin的cDNA基因片段,命名为MA-Exp3(以示与已登录的香蕉MA-Expl和MA-Exp2的区别),MA-Exp3中存在expansin基因的保守区域,即8个半胱氨酸残基和3个色氨酸残基,它编码177个氨基酸,与MA-Exp1的核苷酸同源性为74.2%,氨基酸同源性为86.4%。 相似文献
98.
新城疫病毒F_(48)E_8株cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以SPF鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒F_(48)E_8强毒株,经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚-SDS法提取病毒基因组RNA,作为反应模板、采用Promega公司商品试剂盒合成双股cDNA。以同聚物加尾的方法将cDNA克隆到质粒pGEM3Zf(一)中,经AIX平板筛选,限制性内切酶分析和Digoxigenin标记的核酸探针检测,共获得插入外源片段大小在0.6~4.8kb的阳性克隆75个,初步构建了F_(48)E_8株的cDNA文库 相似文献
99.
乳清酸蛋白 (WAP)和 β -酪蛋白 (β -Casein)是哺乳动物乳汁中的主要蛋白质 ,其基因 5′侧翼区常作为乳腺定位表达的调控序列。表达载体pSVL -WAP -tPA和pSVL - βb -tPA分别含 1.1kb的大鼠WAP启动子和 0 .6kb的牛β Casein启动子序列及t-PAcDNA。采用基因直接注射方法将 2种表达载体分别注入家兔乳腺中。溶圈试验结果显示 ,两种表达载体均能在兔乳腺细胞中得到表达 ,且以分娩后第 4天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 45 0ng·mL-1和390ng·mL-1。为进一步研究t-PA基因乳腺定位表达调控和建立t-PA乳腺生物反应器奠定了基础。 相似文献
100.
库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。 相似文献