PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达

【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。     

金针菇杂交育种中亲本菌株的选择模式

对23个菌株进行ISSR聚类分析,选择遗传距离较远的5个菌株,通过PDA平板拮抗试验验证它们为不同的菌株;测定了这5个菌株的脱氢酶活性、羧甲基纤维素酶活性、菌丝生长速度,并建立了它们与产量的关系.结果表明:上述指标与产量有较高的线性正相关;用这些指标来预测菌株的产量和杂交优势,不需进行繁琐、周期较长的出菇试验;用这种模式来选择金针菇杂交育种中的亲本,具有简便、快速等优点,可以缩短杂交育种的周期.     

木材弯曲工艺研究综述

木材弯曲制品因优美流畅的曲线造型而备受人们的欢迎, 然而木材弯曲制品的成品率较低。文中对木材弯曲的软化、形变固定工艺和机理及其他影响因素进行总结归纳, 并讨论当前木材弯曲工艺中存在的问题和未来的发展方向。复杂的弯曲工艺、众多的影响因素和对工人较高的操作技能要求是造成木材弯曲制品成品率低下的主要原因, 而纵向预压缩技术因其可在很大程度上解决传统木材弯曲中的问题, 可能成为木材弯曲新的发展方向。     

酿酒酵母新型分泌缺陷突变株突变基因的鉴定

对酿酒酵母新型分泌缺陷突变株分泌缺陷特性进行鉴定,结果发现Invertase和Bgl2p的分泌在37℃下受阻,但电镜观察未见胞内分泌小泡积累.用酵母基因组文库挽救突变株,克隆挽救片段上各候选基因与pRS315构建重组质粒并转化突变株以检验它们的挽救效果,发现具有挽救功能的基因是TEL2.从突变株克隆了TEL2的全序列并进行序列测定,检测到了两个突变位点,即:P367→L,S545→F.对该基因突变前后编码的蛋白质产物进行了生物信息学分析,推测出TEL2蛋白可能参与极性外排途径的结构功能域在246～434氨基酸范围内.本试验首次揭示了端粒长度调控基因TEL2在极性外排途径中的重要作用.     

马尾松毛虫种群球孢白僵菌自然流行病流行菌株的异质性

2006年在皖东明光市紫阳林场,马尾松毛虫Dendrolimus punctatus种群中发生由球孢白僵菌Beauveria bassiana引起的流行病。本研究通过4对引物,对采自流行区的44株球孢白僵菌进行28S rDNAⅠ型内含子分析,以探讨流行菌株的遗传多样性及遗传类型。结果显示,存在8种不同内含子单倍型。各单倍型所占比例不同,其中BABA型占据优势地位,为79.55%;BCBC和BCBA型次之,皆为4.54%;而BAAA等5种单倍型仅各占2.27%。表明引起自然流行病的球孢白僵菌是一个异质性的群体。从生态适应性的角度出发,在球孢白僵菌种群中占据主导地位的BABA型菌株,今后可以作为明光地区生防菌株的重点筛选对象。     

Experimental Analysis on the Deformation of Sandstone underPore Pressure and Constant Time

In order to discuss the deformation characteristics of rock mass under different water levels changing between 145 and 175 meter in the Three Gorges reservoir area, an experiment was carried out for the studying sandstone deformation under the conditions of three different axial stresses(σ1=55.54,34.18,12.82 MPa), two cyclic pore pressures(Pmin=2 MPa,Pmax=6 MPa) and two kinds of constant time(the upper limit time and the lower limit time(ΔT=120,240 s).With ε1-T curves and p-T curves, as well as p-ε1  hysteresis curves, it was found that the curves were continuous sine wave-shaped curves.At first, the strain decreased with loading pore pressure.And then, it decreased to valley value with pore pressure at stable upper limit.Next, it increased with unloading pore pressure and increased to peak value with pore pressure at stable lower limit.The p-ε1  hysteresis curves of the sandstone had two typical stages.And one was caused by the closure of some primary pores and crack under increasing compaction, in which the strain did not form obviously hysteresis curves, and the other was pore pressure coupling stage which showed obvious hysteresis curve in form of the anti-clockwise from the dispersed to the dense.In addition, Δε-n curves in four sections (loading, unloading, steady upper limit, steady lower limit) of p-ε1 curves were compared and respectively ananlyzed in the condition of various axial stress and different constant time .     

新城疫Ⅰ系病毒不同空斑克隆株生物学测定试验

新城疫Ⅰ系种毒稀释接种鸡胚成纤维细胞(CEF)单层后覆盖含中性红的1.6%营养琼脂糖,37℃培养至72h,分别挑取大(φ2～3mm)、中(φ1～2mm)、小(φ1mm)三种空斑,反复冻融后收获病毒,同样方法空斑克隆三代后,通过SPF鸡胚继代增殖,对收获物进行ELD50、MDT、ICPI测定。结果表明,三种空斑克隆株继代培养物中,中斑毒力最强,大斑次之,小斑最弱;大斑克隆株增殖力最强,中斑次之,小斑最差。     

传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆、序列分析及原核表达

克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。     

画眉草弯孢霉菌株QZ-2000及其靶标若干酶活性测定

采用画眉草弯孢霉菌株QZ-2000的孢子、菌丝体,以及孢子与低剂量化学除草剂复配后侵染马唐,对侵染后的马唐进行了酯酶同工酶与过氧化物同工酶测定。结果表明:保藏6年的孢子,酯酶同工酶活性极低。贮藏1年、2年和3年的孢子,酯酶同工酶非常稳定,均有4条主带。贮藏1年的孢子酯酶同工酶具有较强活性;孢子及其萌发的菌丝体酯酶酶带略有差异;配制画眉草弯孢霉菌株QZ-2000浓度为1×106个/mL的孢子悬浮液、正常用量1/5的化学除草剂(分别为4%玉农乐悬浮剂,33%施田补乳油),另将两者在施用前复配,喷施盆栽三至四叶期马唐幼苗。处理后第3天,测定马唐酯酶同工酶和过氧化物同工酶。与对照相比,各处理后的马唐酯酶同工酶酶谱差异较大,主要表现在其酶带的条数、迁移率和活性差异等方面。