籼稻YTB成熟胚愈伤组织继代培养条件试验

为确定籼稻YTB成熟胚愈伤组织继代培养的最佳条件,对籼稻愈伤组织进行不同继代培养条件优化组合试验,研究不同因素对籼稻愈伤组织继代培养的影响。结果表明:NB培养基是较适合籼稻愈伤组织继代生长的培养基;籼稻YTB成熟胚愈伤组织不适合二次继代;铁盐浓度对籼稻愈伤组织的继代培养有明显影响;水解酪蛋白、脯氨酸、谷氨酰胺及硫代硫酸钠等能改善籼稻愈伤组织的质量,降低褐化率;抗坏血酸(VC)对籼稻胚愈伤组织的继代生长及抗褐化无明显影响;形态学观察和细胞学观察的一致性证明了外源腐胺PUT(30 mg/L)在籼稻愈伤组织继代培养中可以使愈伤组织保持良好的胚性,从而提高后续遗传转化的转化率。     

鸡胚19期原始生殖细胞慢速冷冻和玻璃化冷冻保存的研究

本研究对发育至第19期的鸡胚性腺原始生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)分离提纯后，在DMEM中添加冷冻保护剂DMSO（二甲基亚砜）、EG（乙二醇）、蔗糖、PVP（聚乙烯吡咯烷酮）分别组成6种慢速冷冻保护液和6种玻璃化冷冻保护液，进行超低温冷冻保存。复苏后苔盼蓝染色测定细胞存活率，体外接种培养、传代。结果：①慢速冷冻保存中，PGCs在慢速冷冻液V（10％EG+10% FBS+0.1 mol/L蔗糖）条件下复苏后存活率最高（92.20%），且与慢速冷冻液I（10％ DMSO+10% FBS）存活率之间差异显著（P<0.05）。②玻璃化冷冻保存中，PGCs在玻璃化冷冻液I（10% DMSO+10% EG+20% FBS+10% PVP）条件下复苏后存活率最高（84.15%），且与其余5种玻璃化冷冻液下复苏后存活率之间差异均极显著（P<0.01）。③培养传至第3代的慢速冷冻复苏后PGCs细胞和培养传至第2代的玻璃化冷冻复苏后PGCs细胞，PAS染色、AKP染色呈阳性并保持完整的二倍体核型。     

细叶百合组培继代培养与生根移栽的研究

为建立细叶百合离体快繁的再生体系,对细叶百合组培苗的继代培养、生根培养及移栽条件进行了研究。结果表明:继代培养在MS 6-BA 2.0 mg/L NAA0.1 mg/L上培养基上鳞茎的增殖系数为6.95,且苗粗壮、长势良好;生根培养在1/2MS IBA 0.5 mg/L生根最快,生根率达100%,根粗壮,平均每个小鳞茎生根8.77条,平均根长为2.85 cm,苗长势较好;移栽基质以泥炭土效果最好。     

维生素对继代培养中蛹虫草菌落形态及子实体产量的影响

研究维生素对蛹虫草继代培养中菌落类型及子实体产量的影响,旨在探讨优型菌落子实体产量最高,延缓退化的维生素配方.采用正交试验,将蛹虫草优良菌株J8在不同维生素培养基上进行10次继代培养.结果表明:菌落在不同维生素培养基中继代培养后形成5种菌落类型,有子实体形成能力的菌落为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,其中Ⅰ型菌落产量最高,Ⅲ型居中,Ⅱ型最低;Ⅳ、Ⅴ型无子实体形成能力.子实体产量最高,且最稳定的Ⅰ型为优型菌落.有利于优型菌落子实体高产的维生素配方为(VB1)2(VB2)3(VBC)4(VB6)2(VPP)3,并且5种维生素均有利于提高优型菌落子实体产量,但只有VB2对其子实体产量影响差异不显著.优型菌落形态特征为菌丝深黄色,气生性中等,菌丝致密绒毛状,有同心纹,有角变.     

牡丹愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以牡丹为材料,研究了不同外植体、激素对愈伤组织诱导和继代增殖的影响,结果表明:①牡丹子叶、胚轴是诱导愈伤组织的最佳外植体;②牡丹子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+Ca2+;③牡丹愈伤组织增殖的最佳培养基为:MS+2,4-D 0.5 mg.L-1+NAA 1.5 mg.L-1+Vc 500 mg.L-1;④在培养基中添加500 mg.L-1Vc或去除Cu2+,具有较好的抗褐化效果。     

美洲南蛇藤组织培养技术

以美洲南蛇藤幼嫩的顶芽或带腋芽的茎段为外植体,进行外植体消毒、增殖培养、瓶内生根和过渡移栽研究,结果表明：外植体用75%的乙醇消毒20 s,0.1%的HgCl2消毒2.0 min效果最佳;适宜的增殖培养基为MS＋6-BA 1.0mg·L^-1（单位下同）＋IBA 0.2＋3.0%蔗糖;壮苗培养基为MS＋6-BA 0.1＋IBA 0.05＋3%蔗糖;适宜的生根培养基为1/2MS＋IBA 0.5＋1.5%蔗糖,生根率82.0%;最佳过渡移栽基质为蛭石∶珍珠岩=2∶1,成活率为98.3%。     

矮壮素对孟士德薰衣草组培苗的影响

试验研究了矮壮素(CCC)对孟士德薰衣草组培苗生长、生根及移栽的影响。结果表明,在继代培养时,培养基中加入0.1～1.0 mg/L的CCC有利于形成壮苗;在生根培养基中加入0.5 mg/L的CCC能显著提高生根率,生根试管苗移栽成活率也较高。     

濒危植物香果树愈伤组织经长期继代后的6种同工酶研究

[目的]研究濒危植物香果树愈伤组织经长期继代后的6种同工酶酶谱的变化。[方法]采用用非变性聚丙烯凝胶电泳技术对长期继代后的香果树愈伤组织的酯酶（EST）、酸性磷酸酯酶（ACP）、ATP酶（ATPase）、淀粉酶（AMY）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）6种同工酶进行分析。[结果]香果树的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在6种同工酶水平上均有差异,均可作为鉴别2者的依据。非胚性愈伤组织中的EST、ACP和POD的表达量明显高于胚性愈伤组织。褐化的非胚性愈伤组织与正常非胚性愈伤组织相比,在AMY、SOD和POD同工酶水平上无差别,而EST、ACP和ATPase同工酶含量减少;褐化的胚性愈伤组织与正常胚性愈伤组织相比,EST同工酶含量升高,其他5种同工酶含量降低。[结论]为研究香果树的长期组织培养过程中愈伤组织形态差异及褐化现象提供理论基础。     

濒危植物香果树愈伤组织经长期继代后的6种同工酶研究

[目的]研究濒危植物香果树愈伤组织经长期继代后的6种同工酶酶谱的变化.[方法]采用非变性聚丙烯凝胶电泳技术对长期继代后的香果树愈伤组织的酯酶(EST)、酸性磷酸酯酶(ACP)、ATP酶(ATPase)、淀粉酶(AMY)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)6种同工酶进行分析.[结果]香果树的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织在6种同工酶水平上均有差异,均可作为鉴别2者的依据.非胚性愈伤组织中的EST、ACP和POD的表达量明显高于胚性愈伤组织.褐化的非胚性愈伤组织与正常非胚性愈伤组织相比,在AMY、SOD和POD同工酶水平上无差别,而EST、ACP和ATP同工酶含量减少;褐化的胚性愈伤组织与正常胚性愈伤组织相比,EST同工酶含量升高,其他5种同工酶含量降低.[结论]为研究香果树的长期组织培养过程中愈伤组织形态差异及褐化现象提供理论基础. Abstract： [Objective] The aim was to study the changes of zymography in 6 kinds of isozymes after long-term subculture of Emmenopterys henryi Oliv..[Method]Non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis was used to analyze isozyme patterns such as esterase (EST),acid phosphatase (ACP),ATP enzyme (ATPase),amylase (AMY),superoxide dismutase (SOD) and peroxidase (POD) in long-term subculture callus of Emmenopterys henryi Oliv. [Result] The research showed that there were differences among the 6 kinds of isozymes in embryogenic callus and non-embryogenic callus of Emmenopterys henryi Oliv.,and both levels could be taken as the basis for identification,the EST,ACP,and POD of non-embryogenic callus were significantly higher than embryogenic callus.The browning of non-embryogenic callus was non-level in the AMY,SOD and POD isozymes when was compared with normal non-embryogenic callus,while the EST,ACP and ATPase isozymes decreased;When the browning of embryogenic callus was contrasted with normal embryegenic callus,EST isozyme increased and the other 5 kinds of enzymes decreased. [Conclusion] The study provided theoretical basis for research morphological difference and browning of long-term tissue culture of Emmenopterys henryi Oliv..     

半滑舌鳎脾脏、卵巢组织细胞离体培养的初步研究

实验采用胰酶消化法,对半滑舌鳎脾脏、卵巢组织细胞进行离体培养,结果显示,脾脏、卵巢细胞能够在添加20%FBS,50 mmol/L 2-Me,100 U/mL青霉素,100μg/mL链霉素,1mmol/L丙酮酸钠,10 ng/mLbFGF的MEM完全培养基中生长,两种细胞的形态均为成纤维样,脾脏细胞可传至第9代,卵巢细胞至今已传至第11代。脾脏、卵巢细胞染色体中期分裂相均为正常的二倍体核型(2n=42),且具有异型W染色体。20%的血清浓度更适用于卵巢细胞传代培养。利用脂质体可将含有RFP荧光报告基因的质粒成功转入脾脏细胞中。