猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化

将猪链球菌2型(Streptococcus suis type2)江苏分离株HA9801接种于THB培养基中培养，得到含溶血素的培养液，其溶血价为128，再经50％饱和硫酸铵沉淀，脱盐，得到溶血素粗提物，溶血价为2048。粗提物用阴离子交换柱层析及凝胶过滤层析，所得活性峰收集液溶血价分别为4096、1024。通过以上三步的纯化，溶血素的比活提高200倍。纯化蛋白在SDS-PAGE中呈现一条带，达电泳级纯度。     

猪链球菌2型对PK-15细胞的黏附动力学

为研究携带不同毒力因子的猪链球菌2型对细胞侵袭作用的差异,本实验室从全国各地分离100多株猪链球菌,PCR鉴定出10株链球菌2型,其中携带毒力因子菌株为7-4［MRP⁺EF+］、8-3［MRP⁺EF^-］、ZH-1［MRP^-EF⁺］,另外选择1株LN-2 ［MRP^-EF^-］与PK 15细胞进行黏附动力学试验,结果表明MPR毒力因子与菌株对PK-15细胞黏附具有密切相关性。     

食品中A族乙型溶血性链球菌的PCR检测

为了建立食品中 A 族乙型溶血性链球菌的 PCR 检测方法，本试验根据 A 族乙型溶血性链球菌（GAS）DNA 酶B 相对保守基因的引物，用乙型溶血性链球菌CMCC32210S（2）为试验菌株，扩增目的DNA 片段，再用市售面包、灭菌乳为模拟样品进行乙型溶血性链球菌添加后的PCR检测。结果均扩增出808 bp的目的DNA片段，证明PCR检测方法特异性强，敏感性好，最低检测限为83.8 pg/μL。     

嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌增菌培养研究

对传统酸奶发酵剂菌种嗜热链球菌 (L N- 6 )和保加利亚乳杆菌 (L N- 8)的基础培养基和生长促进物质分别进行了研究。结果表明 ,无脂乳固体为 110 g/kg的脱脂乳作为基础培养基效果较好 ,L N- 6和 L N- 8的活菌数分别为 2 .8× 10 8和 1.9× 10 8m L- 1。生长促进物质番茄汁、猕猴桃汁、肝浸汁对 L N- 6有一定的抑制作用 ,蜜桔汁和酵母膏则有较明显的促进作用。对 L N- 8来说生长促进物质都有一定的促进作用     

猪链球菌亚种及1、2、9型四重PCR检测方法的建立

根据序列分析设计了4对引物,分别扩增猪链球菌gdh、cps1、cps2J和cps9G基因的725、212、387bp和556bp大小的片段,利用合成的4对引物并通过对反应条件与反应体系的优化建立了四重PCR,结果显示,猪链球菌阳性出现1条725bp目的带,猪链球菌1型阳性出现725bp和212bp两条目的带,猪链球菌2型阳性出现725bp和387bp两条目的带,猪链球菌9型阳性出现725bp和556bp两条目的带。应用该多重PCR检测了分离到的链球菌1095株,检出猪链球菌阳性667株、猪链球菌1型8株、2型33株、9型16株。研究结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可广泛应用于猪链球菌病的快速诊断及流行病学研究。     

鸡链球菌病病原分群鉴定

从河南省荥阳、淇县、武陟、修武、兰考、郑州等地送检鸡只的病料中分离到17株链球菌，经对其中13个典型菌株进行系统生化分群鉴定，结果表明，上述地区发生的鸡链球菌病主要是由C群兽疫链球菌（6／13）、D群鸟链球菌（4／13）和D群粪链球菌（2／13）引起，另有1株未能定群。     

豫南地区猪链球菌兰氏分群研究

随着养猪业的不断发展,各种血清型链球菌也相继出现于各养殖场。自2000年至今,我们从豫南地区送检病料中分离了20株链球菌.依据兰氏分群原理,做了一系列生化实验,结果表明:兰氏C群15株,占75%,兰氏D群3株,占15%,其它占10%,其结果与许多研究报告结果一致。     

漯河地区猪源致病性链球菌的分离鉴定及药物敏感性试验

漯河市某猪场发生一起临床症状、剖检病变疑似猪链球菌病例,从中分离到2株细菌,对病菌进行分离培养、生化试验和动物试验,鉴定为猪链球菌。药物敏感试验结果表明分离菌株对磺胺六甲氧嘧啶、头孢曲松、氧氟沙星、克林霉素较敏感。而对青霉素、链霉素、环丙沙星、庆大霉素产生了耐药性。     

链球菌表面三磷酸甘油醛脱氢酶及其突变体重组蛋白的表达和纯化

表达并纯化M6型GAS表面三磷酸甘油醛脱氢酶以及其敲除C末端赖氨酸残基重组蛋白(rGAPDH和rGAPDHΔ345)。克隆了M6型GAS ATCC32175的GAPDH基因以及GAPDHΔ345基因,与pASK-IBA37载体连接后,表达蛋白并用亲和层析色谱纯化重组蛋白;对重组蛋白进行质谱检测,并用酶切方法进一步纯化目的蛋白,通过酶促反应实验测定了重组蛋白的生物活性。2种基因克隆条件稳定,蛋白表达量大,酶切后纯度高,纯化的重组蛋白具有较高的生物活性。功表达并纯化了rGAPDH和rGAPDHΔ345蛋白。     

Natural outbreak of Streptococcus agalactiae (GBS) infection in wild giant Queensland grouper, Epinephelus lanceolatus (Bloch), and other wild fish in northern Queensland, Australia

Ninety‐three giant Queensland grouper, Epinephelus lanceolatus (Bloch), were found dead in Queensland, Australia, from 2007 to 2011. Most dead fish occurred in northern Queensland, with a peak of mortalities in Cairns in June 2008. In 2009, sick wild fish including giant sea catfish, Arius thalassinus (Rüppell), and javelin grunter, Pomadasys kaakan (Cuvier), also occurred in Cairns. In 2009 and 2010, two disease epizootics involving wild stingrays occurred at Sea World marine aquarium. Necropsy, histopathology, bacteriology and PCR determined that the cause of deaths of 12 giant Queensland grouper, three wild fish, six estuary rays, Dasyatis fluviorum (Ogilby), one mangrove whipray, Himantura granulata (Macleay), and one eastern shovelnose ray, Aptychotrema rostrata (Shaw), was Streptococcus agalactiae septicaemia. Biochemical testing of 34 S. agalactiae isolates from giant Queensland grouper, wild fish and stingrays showed all had identical biochemical profiles. The 16S rRNA gene sequences of isolates confirmed all isolates were S. agalactiae; genotyping of selected S. agalactiae isolates showed the isolates from giant Queensland grouper were serotype Ib, whereas isolates from wild fish and stingrays closely resembled serotype II. This is the first report of S. agalactiae from wild giant Queensland grouper and other wild tropical fish and stingray species in Queensland, Australia.