印记基因XIST和H19 DNA甲基化水平与猪克隆胚胎发育效率关联分析

目的 体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)在农业、生物医学等领域应用广泛,但是克隆效率太低制约了该技术的应用和推广。本研究的目的在于探究印记基因XIST和H19 DNA甲基化水平与克隆效率的联系。方法 利用同一头猪源耳朵成纤维细胞培养获得14个细胞克隆团,分别作为供体细胞进行SCNT试验,统计比较以各克隆团为供体细胞生产克隆胚胎的囊胚率以及各囊胚的XIST和H19基因调控区的DNA甲基化水平,对XIST和H19基因差异甲基化区域DNA甲基化水平与克隆胚胎的囊胚率进行相关性分析。结果 以1号克隆团为供体细胞得到囊胚的XIST基因DNA甲基化水平最高且囊胚率最低,分别为65.04%、8.6%,以14号克隆团为供体细胞得到XIST基因囊胚的DNA甲基化水平最低但囊胚率最高,分别为16.68%、38.2%;相关性分析表明XIST基因的DNA甲基化水平与囊胚率之间存在高度负相关(|r|=0.8125>0.8)。H19基因A侧甲基化平均水平最高和最低分别为5.12%和0.61%,相关性分析表明H19基因A侧DNA甲基化水平与囊胚率间只有极弱的相关(|r|=0.1647<0.3);H19基因G侧DNA甲基化水平最高和最低分别为90.92%和72.69%,相关性分析表明H19基因G侧DNA甲基化水平与囊胚率间只有低度相关(0.3<|r|=0.3098<0.5)。结论 XIST基因DNA甲基化水平越低,则克隆团囊胚率越高。研究结果对提高猪SCNT胚胎发育效率,改善现有的猪SCNT技术体系提供了基础。     

“神索”葡萄体细胞胚干化保存的研究

以酿酒葡萄品种"神索"的体细胞胚为试验材料,研究了干化对体细胞胚的保存效应.结果表明:葡萄体细胞胚失水量与萌发率有关,失水量在40%~50%之间萌发率较高,达58%左右,较未经干化的胚状体萌发率高9.4%;在较高相对湿度下,体胚失水速度变慢,延长了干化处理时间,提高了体细胞胚的存活率和萌发率;相对湿度为70%,体细胞胚干化15 d效果最好,胚状体萌发率可由未经干化处理的33.5%提高到经干化处理15 d的56.2%.     

小麦与高冰草体细胞杂种F_3～F_5代的耐盐性研究

小麦与耐盐牧草高冰草的不对称体细胞杂交 ,获得表型象普通小麦的体细胞杂种后代并用于小麦耐盐实验 ,用不同浓度的NaCl处理小麦、高冰草、小麦和高冰草体细胞杂种F4 代株系Ⅰ - 1- 6、Ⅱ - 1- 3、Ⅱ - 1- 6 ,5天后观察其形态 ,计算耐盐指数 ,测定生长量 (鲜重、干重及相对含水量 )。结果表明 :亲本济南177耐盐性最差 ;杂种F4 代Ⅰ - 1- 6、Ⅱ - 1- 3、Ⅱ - 1- 6的耐盐性介于双亲之间 ,在山东省不同地区 0 3%～0 6 %的盐地中 ,对F3～F5代部分杂种株系进行栽培试验 ,结果表明 ,在 0 3 %～ 0 4%的盐地中其千粒重 40～5 5g ,6 6 6 7m2 产量为 35 0～ 45 0kg ;在 0 5 %～ 0 6 %的盐地中 ,千粒重 35～ 45g ,6 6 6 7m2 产量为 2 6 0～ 32 0kg。     

生长调节物质对甜玉米幼胚体细胞植株再生性的影响

[目的]系统探讨外源生长调节物质对甜玉米幼胚愈伤组织及体细胞再生植株的诱导作用,寻找最佳培养基配方。[方法]以甜玉米甜单10号杂交种幼胚为外植体,以复合型培养基为基本培养条件,应用正交试验设计方法对影响玉米幼胚再生的4个生长调节剂的作用进行探讨,通过DPS软件分析对9种培养基进行数据分析,得出适合实验基因型的最佳培养基,初步建立了甜玉米幼胚再生体系。[结果]AgNO3是诱导Ⅱ型愈伤的关键因素,其次是2,4-D和L-pro,而CH影响最弱。最佳培养基为N6(大量)+B5(微量)+0.1g/L肌醇+500mg/LPro+2mg/L2,4-D+10mg/LAgNO3。[结论]AgNO3对诱导愈伤组织有很大的促进作用,但使用浓度不宜太高,否则会增加畸形苗的比率。     

动物乳腺生物反应器研究进展

针对利用动物乳腺生物反应器技术生产重组蛋白,具有生产效率高和经济效益明显的特点。综述了制备乳腺生物反应器时表达载体构建和基因转移两个关键环节的研究现状,并就基因打靶和体细胞克隆技术的结合探讨了乳腺生物反应器的发展趋势。     

大蒜体细胞胚胎发生诱导因素研究

通过研究不同质量浓度的 2 ,4 - D、维生素 B1 (VB1 )、水解酪蛋白 (CH )、腺嘌呤 (ADE)和蔗糖等激素及有机物对大蒜体细胞胚胎发生的单一或组合效应 ,结果表明 :0 .5 m g/L的 2 ,4 - D有利于体胚的发生和发育 ,梨形胚和棒状胚数目较多 ;VB1 质量浓度提高到 0 .5～ 2 .0 m g/L可促进体胚高频发生 ,较高质量浓度的 VB1 与 2 ,4 - D有明显的互作效应 ;15～ 30 g/kg的蔗糖能较好地促进大蒜体胚的发生 ,蔗糖含量超过 6 0 g/kg则抑制体胚发生和发育。 MS+2 ,4 - D 0 .5 mg/L +CH 5 0 0 mg/L +ADE 2 0 m g/L是胚性愈伤组织适宜的继代培养基。     

马铃薯原生质体融合技术的研究

采用聚乙二醇（ＰＥＧ）、电融合和ＰＥＧ－电融合三种诱导融合的方法，对马铃薯双单倍体品系８２－３６和二倍体野生种Ｓｏｌａｎｕｍｍｉｃｒｏｄｏｎｔｕｍ无菌苗叶肉原生质体的融合技术进行了研究，建立了三种融合方法的适宜条件。结果表明，使用镀金平行多电极的电融合法融合效果最好，在交流场强１５０Ｖ／ｃｍ、正弦波频率１．０ＭＨＺ和直流脉冲场强１．２ＫＶ／ｃｍ、宽幅６３７．５μｓ下，施加１次脉冲，原生质体的融合频率可达３０％。在对融合细胞的培养中发现：经过异质融合处理后的原生质体形成的愈伤组织具有较强的分化能力，其中有少数愈伤组织再生出了绿色植株。     

植物体细胞胚发生及在草坪草遗传育种中的应用

综述了草坪草体细胞胚诱导对高频组培再生体系和高效遗传转化体系建立的重要性,及影响体胚发生的因素,体胚的发生在遗传育种中的应用.     

Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Leaflets of Fritillaria ussuriensis M.

A method for the production of somatic embryos and subsequent plant regeneration for fritillaria ussuriensis M.is described.Whole leaflet explants,derived from plantlets grown in vitro,formed light yellowith embryogenic calli within one month of culture in the dark.Somatic embryogenesis was obtained after a 28d incubation on MS induction medium supplemented with 2mg/L 2,4-D 0.5mg/L BA,0.5mg/L KT and 500mg/L CH followed by transfer to a second N medium containing 0.5mg/L KT and 100mg/L CH.Somatic embryos were transferred to MS medium with 0.1mg/L NAA placed in the light for regeneration ,After two weeks,mature somatic embryo developed into whole phantlet.     

荔枝胚状体POD与EST同工酶酶谱分析

采用不连续垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,对荔枝"元红"品种幼胚胚性愈伤组织诱导出的胚状体进行过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶谱分析.结果表明:染色方法对同工酶谱谱带有影响;同一发育阶段的荔枝胚状体的过氧化物酶与酯酶同工酶谱有一定差异,表明不同胚状体之间可能已产生一定的遗传变异.