纳米银体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究

【目的】 研究纳米银（silver nanoparticles,AgNPs）体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的作用,并初步分析其抗病毒作用机制,为PRRSV的防控提供新思路。【方法】 使用0.1875、0.375、0.75、1.5、3、6、12 μg/mL AgNPs处理Marc145细胞,采用CCK-8试剂盒评估AgNPs对Marc145细胞毒性,确定其安全浓度。通过显微观察、间接免疫荧光试验、病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs体外抗PRRSV感染Marc145细胞的效果。通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs对PRRSV的直接灭活效果。通过实时荧光定量RT-PCR方法分析AgNPs对不同感染复数（multiplicity of infection,MOI） PRRSV （0.0001~0.1）黏附和入侵Marc145细胞的影响,以及PRRSV感染Marc145细胞3、6、12、18和24 h后加入AgNPs对Marc145细胞增殖的影响。【结果】 AgNPs对Marc145细胞的最大安全浓度为1.5 μg/mL,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均具有良好的体外抗PRRSV活性,0.375、0.75、1.5 μg/mL AgNPs均对PRRSV起一定灭活作用。AgNPs对不同MOI的毒株黏附和入侵Marc145细胞均有一定抑制作用,且不同时间（3、6、12、18、24 h）加入AgNPs对PRRSV增殖均有一定抑制作用。【结论】 AgNPs具有良好的体外抗PRRSV活性,体外抗PRRSV的作用机制包括直接灭活以及抑制病毒的黏附、入侵和增殖过程。     

两种聚丙烯酰胺凝胶银染方法的比较

比较了两种聚丙烯酰胺凝胶的DNA染色方法。对小麦SSR扩增产物的染色结果显示,改进的Bassam银染法颜色背景浅,灵敏度较高,能够看到副带染色。改进的Sanguinetti方法对条带的鉴别力稍差,但因省时省力,成本较低可用于大规模引物筛选时的染色。     

采用酸碱提取法对鲢肌肉蛋白分离特性的影响

对酸处理和碱处理过程中鲢肌肉蛋白质的分离特性,包括蛋白质溶解度、回收率和匀浆黏度等进行了比较研究。结果表明：当pH为1．5—12．5时,普通肉溶解蛋白（Solutionordinarymuscleprotein,SMP-1）与血合肉溶解蛋白（Solutiondarkmuscleprotein,SMP-2）溶解度的变化规律无明显差别,酸处理的最大溶解度均在pH为2．5下,碱处理的最大溶解度均在pH为11．5～12．5下,两者等电点均在pH为5．5下;普通肉匀浆（Ordinarymusclehomogenate,OMH）和血合肉匀浆（Darkmusclehomogenate,DMH）的黏度均随溶解度的增加而增加,但OMH黏度要高于DMH;采用酸碱处理法的蛋白质回收率都非常高,IMP-1最高能达到90．5％,IMP-2也能达到89．5％。     

预处理方式对微粒化白鲢鱼骨泥物理特性的影响

以白鲢(Hypophthalmichthys molitrix)鱼骨为原料,采用湿法粉碎的方法制备微粒化鱼骨泥,研究不同的预处理方式(常温加冰、低温冷冻、100℃蒸煮和120℃蒸煮)对鱼骨泥物理特性的影响。结果表明,采用120℃蒸煮预处理后加工制备的鱼骨泥中鱼骨颗粒的粒度最小(164.11μm),其次分别为低温冷冻组(317.40μm)、100℃蒸煮组(343.47μm)和常温加冰组(522.61μm)。120℃蒸煮预处理后加工制备的鱼骨泥中鱼骨颗粒的比表面积显著(P0.05)大于其他3组的比表面积。低温冷冻预处理后加工的鱼骨泥中鱼骨颗粒多呈短棒状,表面光滑;而蒸煮预处理的鱼骨颗粒接近球形,表面凹凸不平。与常温加冰和低温冷冻加工预处理组相比,采用高温蒸煮预处理后加工的鱼骨泥的b*值、L*值、持水性、乳化活性指数和乳化稳定性相对较高(P0.05),而粘度值相对较低(P0.05)。     

蓝狐与银狐褪黑激素受体1A基因的克隆及序列分析

根据其它物种褪黑激素受体（melatonin receptor, MTNR）1A基因核酸序列的同源性设计引物,PCR扩增蓝狐和银狐MTNR1A基因的546 bp DNA序列,GenBank登录号分别为EU170442和EU170443。蓝狐和银狐MTNR1A基因DNA序列同源性为99.1%,编码的氨基酸同源性为99.4%,与人、鼠及绵羊MTNR1A基因同源性为84%~86%,与鸡MTNR1A基因同源性为74%。     

银鲳亲鱼不同组织的氨基酸及其随性腺发育的变化

测定了海捕银鲳亲鱼肌肉,肝脏和性腺组织的氨基酸,并分析了不同性腺发育阶段的氨基酸变化。结果表明,雄性V期亲鱼精巢中的牛磺酸含量最高（27.8mg/g）,显著高于肌肉和肝脏组织,而雄性V期亲鱼氨基酸总量在肌肉中最高（631.4 mg/g）,其次是精巢（544.8 mg/g）和肝脏（468.0 mg/g）组织。雌性亲鱼肝脏中的牛磺酸含量（13.7 mg/g）显著高于卵巢和肌肉组织。在卵巢从III期发育到V期过程中,雌性亲鱼肌肉和肝脏中的氨基酸总量在V期下降显著,而卵巢氨基酸总量维持稳定。在总氨基酸的组成上,肌肉中含量高的氨基酸为Glu,Lys, Asp,Leu和Arg;肝脏中含量高的为Glu,Lys, Asp,Val和Leu;精巢中含量高为Glu,Asp, Lys, Arg和Val;卵巢含量高中为Glu,Lys,Leu,Val和Asp。性别和性腺发育阶段对亲鱼肌肉总氨基酸组成无影响。游离氨基酸含量在III 、IV和 V期卵巢中的含量分别为17.7 mg/g ,41.5 mg/g和29.6 mg/g,且其组成随性腺发育阶段的不同而有显著差异。     

鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究

文章探讨了以鲢（Hypophthalmichthysmolitrix）鱼骨为原料,采用风味蛋白酶酶解制备骨胶原多肽水解液,剩余骨渣经乳酸提取制备骨粉酸解液（钙液）,研究其通过螯合制备鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺条件。分析了酶解时间对鲢鱼骨蛋白酶解产物产品品质和功能特性（溶解性和热稳定性）的影响以及采用乳酸提取鲢鱼骨中钙时提取温度对钙溶出率的影响,并以螯合率为指标,考察pH、时间、温度和多肽液与钙液体积比对螯合反应的影响。结果表明,在温度50℃,按原料鱼排质量0．09％加入风味蛋白酶酶解30min制备出的鲢鱼骨胶原多肽具有良好的产品品质和功能特性;乳酸提钙时提取温度对钙溶出率没有显著性影响（P〉0．05）;在pH8、温度25℃条件下,多肽液与钙液体积比1：1反应40min得到的鲢鱼骨胶原蛋白螯合钙螯合率最高（85．24％）。     

尼罗罗非鱼Smoothened的鉴定、表达模式及在精巢中的作用

为探究Smoothened (Smo)信号在精巢不同细胞增殖与存活中的作用,实验分离鉴定了尼罗罗非鱼smo (命名为Onsmo),检测了其在不同组织中的表达分布及在精巢中的细胞表达模式,在尼罗罗非鱼精巢组织的体外培养体系中,用Smo特异性激动剂SAG或抑制剂环巴胺分别进行处理,EdU掺入法及TUNEL法检测了处理后生殖细胞(Vasa⁺)、Sertoli细胞(Amh⁺)与Leydig细胞(Cyp17a1⁺)增殖或凋亡情况。结果显示,Onsmo开放阅读框全长2 478 bp,编码825个氨基酸,含有7次跨膜结构域,与人SMO氨基酸一致性达77%;Onsmo表达于包括精巢在内的多个组织;在精巢中,Onsmo在多种不同类型细胞表达,包括精原细胞、精母细胞、Sertoli细胞以及Leydig细胞;在精巢组织的体外培养体系中,SAG处理对精原细胞增殖具有显著促进作用,而环巴胺处理对Sertoli细胞、Leydig细胞凋亡具有显著促进作用。研究表明,On Smo信号在尼罗罗非鱼精巢精原细胞增殖与体细胞存活中具有重要作用。该研究首次证实...     

Detection of Colletotrichum coccodes and Helminthosporium solani in soils by bioassay

The sensitivity of a bioassay in detecting soil inoculum of Colletotrichum coccodes and Helminthosporium solani was examined using potato minitubers and microplants. Tests were conducted on soils which were collected from fields in which the interval after a previous potato crop differed, and which were also artificially infested with conidia or microsclerotia. For C. coccodes , determining plant infection based on the occurrence of infected roots after 9–12 weeks was a sensitive method for detecting and quantifying the amount of inoculum in soil. Infestations of less than 0·4 microsclerotia per g soil were detected in artificially infested soils. A semiselective medium, developed for isolating C. gloeosporioides from pepper, detected soil infestations by C. coccodes as low as nine conidia or one microsclerotium per g soil in artificially infested soil. For H. solani , infection on minitubers was a sensitive measure, with soil inoculum of fewer than 10 conidia per g soil being detected. Soil infestation could be quantified by assessing the percentage surface area of minitubers covered by sporulating lesions, which was strongly related to the amount of soil infestation. The results of these bioassay tests were compared with published results for real-time quantitative PCR assays on the same soils. The two methods were in good agreement in artificially infested soils, but the bioassay appeared to be more sensitive with naturally infested soils.     

长白猪肝脏、肾脏和淋巴结的显微形态及糖原PAS反应研究

[目的]对商品长白猪的组织形态学进行研究,了解商品长白猪宰前的生理状态。[方法]采集长白猪的肝脏、肾脏和淋巴结3种组织器官并制成石蜡切片,采用H.E染色方法对其组织结构进行研究。[结果]肾脏和肝脏的组织结构形态正常,肾脏和肝脏的细胞核染色明显,淋巴结的皮质和髓质分界不清晰,周围组织没有明显的淋巴索,淋巴窦较小。糖原PAS染色结果表明肝脏中的糖原颗粒较少,分布不均匀,而肾脏中糖原或糖蛋白多集中于血管球和肾小囊壁上。[结论]该研究可为今后进一步的商品长白猪理论研究奠定基础。