滴鼻免疫疫苗对SPF鸡气管功能影响的研究

为研究疫苗滴鼻免疫对鸡气管功能的影响,本研究对SPF鸡滴鼻免疫新城疫疫苗后气管纤毛摆动速率、气管形态结构和黏液分泌进行了研究。80只7日龄SPF鸡随机分为对照组和试验组,每组40只,试验组SPF鸡滴鼻免疫新城疫弱毒疫苗,对照组滴鼻生理盐水;于免疫后的第0、2、4和6天,每组每次随机剖杀10只鸡,应用红细胞示踪法测定气管纤毛摆动速率,采集气管制备石蜡组织切片进行HE和奥新蓝pH 2.5和pH 1.0染色。结果发现,疫苗免疫后的第0和2天试验组SPF鸡纤毛摆动速率较对照组升高,但差异不显著（P>0.05）;滴鼻免疫后SPF鸡气管结构完整,无明显损伤;滴鼻免疫后试验组SPF鸡气管酸性黏液分布容积在免疫后的第0和2天显著高于对照组（P<0.05）,而后明显降低,于免疫后的第6天又有所升高,但差异不显著（P>0.05）;硫酸化黏液分布容积在免疫后的第0和2天显著升高（P<0.05）,而后降低并与对照组相一致。结果表明,新城疫疫苗滴鼻免疫后前两天SPF鸡气管黏液分泌增多,而后恢复到正常水平,疫苗的免疫对气管形态结构和纤毛的摆动速率无明显影响。     

铝胁迫下根系分泌物对栝楼光合特性及耐铝性的影响

以耐铝性较强的安国栝楼和耐铝性较弱的浦江栝楼为对比试验材料,在土培条件下探究300μmol/L和800μmol/L铝胁迫下不同浓度(30,20,10ml/株)根系分泌物对2种栝楼的生长特性、光合特性和抗氧化酶活性的影响。结果表明,经过2个浓度的铝处理后,安国栝楼和浦江栝楼生长均受到一定抑制,生物量、叶绿素a/b含量、叶绿素荧光、CAT、POD、SOD酶活性均呈下降趋势,而MDA、初始荧光(F_0)呈相反的变化趋势,2种栝楼的各指标变化程度和敏感性表现出一定的差异性,表明2种栝楼的耐铝性存在差异。加入适宜浓度的根系分泌物能够促进2种栝楼的生长,提高叶绿素a、b含量以及各个荧光参数值和CAT、POD、SOD等抗氧化酶活性,从而缓解了铝胁迫。较低浓度的根系分泌物可以缓解铝胁迫对栝楼的伤害;浓度过高时,2种栝楼的生长均会受到抑制,20ml/株的根系分泌物对栝楼铝胁迫的缓解作用最佳。因此,今后在红壤地区栝楼的生产种植中,可以进一步开展根系分泌物对栝楼影响机制的研究工作,为栝楼品种的推广与应用奠定基础。     

水稻白叶枯病菌GX1329基因组文库的构建及含编码TAL效应物基因的克隆的分离

由革兰氏阴性细菌水稻白叶枯病菌引起的水稻白叶枯病是亚洲、北美以及非洲部分地区最严重的水稻病害之一,水稻白叶枯病可使水稻减产高达50％以上。研究表明水稻白叶枯病菌的毒力主要依靠三型分泌系统所分泌的效应物。为了解水稻白叶枯病菌广西菌株GX1329中含有avrBs3／pthA家族基因的情况,本研究应用Alu I部分酶切其基因组DNA,构建了含有736个克隆的菌株GX1329的基因组文库。BamHI酶切分析随机挑取的15个文库克隆表明,克隆的外源DNA随机性良好,克隆的最小片段为27．7kb,最大为58．5kb,平均大小为39．9kb,文库克隆容量约为2．8×10^3Mb,该文库中包含基因组中任一个基因的概率为99．4％。利用来自水稻白叶枯病菌菲律宾菌株PX086的无毒基因avrXa10的第252位～第486位核苷酸序列作为探针,通过菌落原位杂交从GX1329基因组文库中筛选到37个含avrBs3／pthA家族基因的克隆。再通过Southern杂交分析,得到了17个独立克隆。这17个克隆中至少含有13个不同的avrBs3／pthA家族基因。这些基因在GX1329基因组中有的单独存在,有的两个或两个以上串联存在。本工作基本上明确了菌株GX1329基因组中avrBs3／pthA家族基因的数量,为进一步研究菌株GX1329中avrBs3／pthA家族基因的功能奠定了基础。     

牛肌肉卫星细胞向胰岛素分泌细胞的诱导转分化研究

肌肉卫星细胞是源自中胚层的肌源干细胞,具有增殖分化融合成肌管并形成肌细胞的能力.在体内条件下,肌肉卫星细胞不可能跨胚层分化为内胚层来源的胰腺细胞.本研究从牛(Bos taurus)胎儿肌肉中分离培养得到肌肉卫星细胞,并在体外条件下将其诱导成胰岛素分泌细胞.在诱导过程中,分析了与胰腺发育相关的胰十二指肠同源基因盒1基因(pancreatic and duodenal homeobox 1,PDX1)、神经原素3基因(neurogenin 3,NGN3)、淀粉酶基因(Amylase)和胰岛素基因(Insulin,INS)的动态表达情况.结果表明,PDX1作为决定胰腺分化发育和胰岛功能的主要调节基因,在诱导分化的第2天能够检测到其mRNA的表达,在第3天表达量达到了最大,第4天以后维持在较低水平.NGN3是内分泌细胞形成非常重要的转录因子,是能够将胰岛素分泌到胞外的关键基因,其mRNA在分化诱导的第3天开始表达,第4天达到最高水平,之后逐渐下降.Amylase是胰腺发育中细胞外分泌相关的基因,Amylase mRNA在第6天才开始表达,8d后达到最高.INS mRNA表达量在11～12 d最高,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)发现,诱导形成的胰腺细胞能够正常分泌胰岛素,培养液中胰岛素的浓度在诱导的11～12 d达到最高值.向培养液中添加葡萄糖后,可使细胞的胰岛素分泌量显著提高,说明诱导得到的细胞类似于成体胰岛的功能,其胰岛素分泌受外界葡萄糖浓度的调节.上述结果表明,肌肉卫星细胞可以被诱导转分化为胰岛素分泌细胞,并对培养环境中的葡萄糖刺激做出应答反应.本研究结果为进一步的研究和临床应用提供基础资料.     

甜高粱根际溶磷菌溶磷能力及菌株特性研究

利用蒙金娜培养基,从甜高粱根际分离具有溶磷能力的菌株,通过溶磷圈法筛选出5株溶磷能力较强的菌株,利用钼锑抗比色法和Salkowski比色法分别对溶磷特性与分泌IAA能力进行测定,结果表明,筛选的菌株分解磷酸钙的能力存在显著差异,溶磷量在107.26~233.95 μg/mL之间,各菌株均具有分泌IAA能力,IAA分泌量在15.23~27.79 μg/mL之间,接种溶磷菌后甜高粱株高、茎粗、干重都比对照明显提升。因此, 溶磷能力和分泌IAA能力较强的菌株(WD₅₁、WD₂₀) 可作为研制微生物肥料的优良菌株。     

Mode of action of the anilino-pyrimidine fungicide pyrimethanil. 2. Effects on enzyme secretion in Botrytis cinerea

The effect of pyrimethanil on the levels of cell wall degrading enzymes secreted by Botrytis cinerea Pers. was investigated in diseased plant tissues and in liquid B. cinerea cultures. Total proteinase activity isolated from infected carrot slices which were treated with 5.0 μM pyrimethanil was decreased by 76%, 3 d after inoculation. Polygalacturonase, cellulase, proteinase and laccase activities were all decreased in the medium of three day-old cultures grown in the presence of pyrimethanil. The pyrimethanil concentrations resulting in 50% reduction in total enzyme activities (IC₅₀) were approximately 0.25 μM for polygalacturonase, cellulase and proteinase, and approximately 1.0 μM for laccase. No significant growth inhibition was observed at these pyrimethanil concentrations. Pyrimethanil did not inhibit the enzymes directly, nor did it inhibit the synthesis of cytosolic proteins. Therefore, it was proposed that the fungicide inhibits protein secretion at a post-translational stage in the secretory pathway. Large differences were found in the effects of pyrimethanil on the growth of B. cinerea in liquid cultures and on agar plates, depending on the composition of the medium. In liquid media containing cellulose and protein as carbon and nitrogen sources, growth inhibition occurred at 5.0 μM pyrimethanil, whilst no growth inhibition was observed with 50 μM pyrimethanil in malt extract. Similarly, growth occurred on potato/dextrose agar (PDA) at 0.5 μM pyrimethanil, but no growth was seen at this concentration on agars containing cellulose and protein. Thus it appears that pyrimethanil is most active in media where the fungus has to utilise extracellular enzymes to mobilise the nutrients it requires for growth.     

小麦条锈菌果胶酶基因PsPL1的克隆与功能分析

【目的】研究小麦条锈菌果胶酶基因PsPL1的功能,确定其在小麦条锈菌侵染过程中的作用,为揭示小麦与病原菌互作的分子机理奠定理论基础。【方法】利用RACE技术扩增PsPL1基因全长,通过qRT-PCR对PsPL1的表达特征进行分析,并在酵母系统中验证其编码蛋白信号肽的分泌功能,最后通过HIGS技术沉默PsPL1基因,确定其在条锈菌侵染小麦过程中的作用。【结果】克隆得到PsPL1基因全长,其ORF长471bp,编码157个氨基酸;经预测PsPL1蛋白包含一个果胶酶保守结构域,N端含有一段由21个氨基酸组成的信号肽序列;经酵母系统验证,确定PsPL1蛋白信号肽具有分泌功能;qRT-PCR分析发现,PsPL1在条锈菌侵染早期表达上调;利用HIGS技术沉默PsPL1基因后,条锈菌的产孢量没有发生明显变化。【结论】成功克隆了小麦条锈菌果胶酶基因PsPL1,明确了其分泌特性及表达特征。     

大豆黄酮对产蛋鸡生产性能、血液指标及激素分泌的影响

选用44周龄海兰褐商品蛋鸡208只,随机分为4组,分别在基础日粮中添加大豆黄酮0、5、10和15mg/kg,研究了日粮中添加不同水平大豆黄酮对不同时期产蛋鸡生产性能及相关激素水平、血液生化指标及激素分泌的影响。结果表明:添加大豆黄酮在试验各期均可以提高产蛋率、改善料蛋比,15mg/kg组可以显著提高日产蛋量;10和15mg/kg组可以显著提高游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平,极显著提高游离甲状腺素(FT4)水平;5mg/kg组极显著降低血清IGF-1含量,15mg/kg组极显著提高血清IGF-1含量,各处理组血清胰岛素水平均极显著高于对照组;随着大豆黄酮添加量的增加,血清总胆固醇、甘油三酯、血清低密度脂蛋白胆固醇、血清高密度脂蛋白胆固醇、血糖、血清尿酸呈递减趋势。大豆黄酮可以明显改善44-56周龄海兰褐蛋鸡的生产性能、内分泌激素水平,并降低血液中胆固醇含量。     

无乳链球菌研究进展

VII型分泌系统存在于无乳链球菌 (Streptococcus agalactiae) 中,其组成膜蛋白对底物蛋白的分泌转运至关重要。为此利用热敏型自杀质粒,构建了含氯霉素筛选标签的膜蛋白重组敲除载体pSET4s-ΔessA、pSET4s-ΔessB、pSET4s-ΔessC,经同源重组后,利用PCR技术筛选到了其缺失突变株-无乳链球菌ΔessA、ΔessB、ΔessC。通过菌株生长曲线分析,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较野生株 (WT) 生长过程变慢,其中ΔessA、ΔessB敲除株在生长早期有显著性差异 (P<0.01)。对ESAT6蛋白分泌影响分析显示,与WT株相比,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株ESAT6的表达量均显著下调 (P<0.01)。结果显示,ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较WT株毒力显著降低 (P<0.01)。研究表明,essA、essB、essC为无乳链球菌VII型分泌系统重要的膜蛋白,其基因缺失造成了分泌蛋白ESAT6 mRNA表达水平下降,影响了菌株毒力。     

Control of ion transport by the sperm duct epithelium of brook trout (Salvelinus fontinalis)

The sperm duct epithelium of brook trout (Salvelinus fontinalis), mountedin vitro in Ussing-style epithelial chambers actively absorbs Na⁺ (measured as the short-circuit current, I_sc) and secretes K⁺ (measured using⁸⁶Rb⁺ as tracer). Dibutyryl-cyclic-adenosine monophosphate (db-cAMP) and 3-isobutyl-1-methylxanthine (IMX) produce a rapid, sustained stimulation of both ion transport processes, but the hormone connected to the response is unknown. Purified sockeye salmon CON A2 gonadotropin (GtH) produces a dose-dependent, rapid and sustained rise in Na⁺ uptake and K⁺ secretion. The time course, electrophysiological and transport characteristics are similar to those evoked by IMX. Carbohydrate-poor (chum salmon CON A1) GtH is ineffective. Pretreatment of fish with 17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (17α,20β-P) significantly increases milt volume but is without effect on resting or stimulated (IMX + db-cAMP) levels of sperm duct ion transport. This is the first indication of a direct, rapid action of GtH on ion transport by the vertebrate blood-testis barrier. The results suggest direct involvement of GtH in control of later stages of sperm maturation.