鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究——Ⅱ油乳剂型(OE)亚单位疫苗的研究

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白，作为抗原，制备油乳剂型（Oil Emulsion OE)亚单位疫苗。该亚单位疫苗为油包水（W/O）型，稳定性良好，安全可靠。对3周龄雏鸡用该疫苗肌注接种，6周龄攻毒，结果表明，接种800ugOMP/只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。     

应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｃｎ，ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素Ｉ相抗原基因，设计了一对各长２０个碱基的引物，扩增２６９ｂｐ的片段。并用８个标准标沙门氏菌株和３个阴性菌株检查引物特异性，结果完全相符。采用５０μＬ体积，ＮＴＰｓ２００μｍｏｌ，引物各１μｍｏｌ，ｍｇ＋＋３ｍｍｏｌ，Ｔａｑ酶２Ｕ。循环温度为９７℃７ｍｉｎ予变性后；９４℃１ｍｉｎ，６０℃１ｍｉｎ，３５个循环后再延伸７２℃７ｍｉｎ。经电泳分析，灵敏度可达每毫升检出１０４个细胞，经二次扩增后，灵敏度还可提高。实验共检查了３０个可疑样品，检出率明显高于生化检查和免疫学方法检查。     

食品鸡蛋及死胚蛋中沙门氏菌的检测

为了解我国食品鸡蛋和死胚蛋(毛蛋)中沙门氏菌的感染情况,分别对130颗食品蛋的蛋壳表面、蛋内容物以及70颗完整死胚蛋(毛蛋)和66颗破壳死胚蛋的肝、肠、卵黄囊进行了沙门氏菌的检测。结果表明,在所检测的130颗食品鸡蛋中蛋壳表面及蛋内容物细菌的检出率分别为76.92%和4.83%,其中沙门氏菌的检出率分别为0.76%和0;70颗完整毛蛋肝、肠、卵黄囊细菌的检出率分别为:47.1%,42.9%,48.6%,其中沙门氏菌的检出率为:4.29%,4.29%,1.42%;66颗破壳毛蛋中肝、肠、卵黄囊细菌的检测率分别为:83.3%,93.9%,84.8%,其中沙门氏菌的检出率为:19.7%,18.2%,16.7%。研究表明,我国市场上鸡蛋的沙门氏菌检出率较低,但为了防止蛋壳表面的细菌和沙门氏菌渗入蛋内容物而对人类的健康造成危害,有必要进行洁蛋加工。对于毛蛋中沙门氏菌的检测,发现破壳毛蛋沙门氏菌的检出率显著高于完整毛蛋。因此,蛋壳在防止沙门氏菌入侵的过程中起到了重要作用。此外,由于毛蛋中沙门氏菌的检出率较高,在鸡蛋生产过程中需要加强孵化场的环境控制以降低雏鸡感染沙门氏菌所造成的危害。     

一种检测荷载pGMCSF-SS质粒的减毒沙门氏菌数的方法学研究

以荷载pGMCSF-SS质粒的减毒沙门氏菌为参考菌,连续培养13h,间隔1h连续采样,用紫外分光光度计检测OD600值,同时用平板计数计算活菌数。根据所测数据,建立细菌对数与细菌浊度之间的直线回归数学模型,即Y=1.5568x 7.0944,R2=0.9543,并对相关关系进行了显著性检测r>r0.01,表明此回归方程可信度很高。为进一步检测该模型的可靠性,在培养时间内随机取样,检测OD600值,比较利用平板计数与回归方程所得细菌对数Y,二者差异不显著(p>0.05)。通过探讨细菌浊度与细菌计数之间的相关性建立的回归方程,可以有效地克服传统计数方法的不足,便于应用。     

成都市高校周边市场部分市售食品的微生物污染调查

为了了解成都市高校周边市场即食食品的微生物污染状况,研究食品种类、季节、包装、来源对食品微生物污染的影响。在不同季节随机采集奶制品、肉制品、糕点、凉拌菜等10类即食食品共703份,按GB/T4789和国家卫生标准进行检验和评价,对不同种类、季节、包装、来源的食品样品检测结果进行比较分析。结果表明：食品总的合格率为86.06%,奶制品、酱腌菜、果蔬饮料的合格率较高,在90%以上;豆制品、饮用水、肉制品的合格率比较低,在80%以下。不合格的食品绝大部分出现在夏秋季节。菌落总数和大肠菌群的合格率较低,沙门菌和金黄色葡萄球菌的检出率高。不同来源食品合格率之间有显著差异,其合格率表现为大型超市>小型超市>餐饮店>农贸市场>移动摊点。有包装的食品的合格率高于无包装食品的合格率。由此可见,高校周边市场即食食品微生物污染严重,致病菌的检出率高,应该加强对学生的食品安全教育和周边市场的卫生监督。     

磁致伸缩生物传感器尺寸对沙门氏菌检测灵敏度的影响

为了研究不同尺寸传感器的检测灵敏度,该文以磁致伸缩膜片为物理传感器,多克隆抗体为生物识别元件,采用Langmuir-Blodgett(LB)技术将多克隆抗体固定在磁致伸缩膜片表面,制备了用于检测沙门氏菌的磁致伸缩生物传感器。检测时,将不同尺寸的生物传感器浸在含有沙门氏菌的被测溶液里,由于生物传感器对沙门氏菌的吸附使传感器质量增加,从而使传感器共振频率发生改变。采用尺寸为2 mm×0.4 mm×15μm,5 mm×1 mm×15μm和25 mm×5 mm×15μm的传感器检测浓度为102~109 CFU/m L的沙门氏菌溶液,并利用扫描电子显微镜观察传感器表面。研究结果表明,由传感器共振频率变化计算获得的沙门氏菌浓度与扫描电子显微镜观察统计分析获得的直观浓度吻合得很好,两者最大相对差值小于10%。传感器尺寸越小,检测灵敏度越高。尺寸为2 mm×0.4 mm×15μm,5 mm×1 mm×15μm和25 mm×5 mm×15μm的检测极限分别为5×103 CFU/m L,105 CFU/m L和107 CFU/m L。研究结果可为磁致伸缩生物传感器实际应用时,根据预测的细菌浓度,在保证灵敏度的前提下选择合适尺寸的传感器提供参考。     

鸡源大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定及耐药分析

为探究甘肃省民勤县某饲养场肉仔鸡腹泻的病原及复方中草药制剂和抗生素分别对分离病原的抑菌效果,对7日龄病死肉鸡进行解剖,通过采集死亡肉仔鸡肝脏、脾脏、心脏进行病原菌分离培养、形态观察、16S rDNA分子鉴定,最终鉴定该病死肉仔鸡为大肠杆菌与沙门氏菌混合感染。抑菌结果显示,复方中草药对分离得到的大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡副伤寒沙门氏菌均有良好的抑菌效果。10种抗生素药敏试验结果显示,此三株菌同时对氨苄西林、环丙沙星、四环素、恩诺沙星四种药物耐药;鸡大肠杆菌对庆大霉素、阿米卡星敏感,鸡白痢沙门氏菌对链霉素、氟苯尼考、头孢噻肟敏感,鸡副伤寒沙门氏菌对头孢曲松、链霉素、头孢噻肟敏感。上述研究结果为肉仔鸡大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离鉴定以及科学指导用药提供参考。     

沙门氏菌通用PCR快速检测试剂盒的研制与应用

根据沙门氏菌fimY基因建立了用于检测沙门氏菌的通用PCR方法。对收集的A-F群标准菌株和临床分离的60株沙门氏菌分离株和11种非沙门氏菌进行PCR检测,采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果所有沙门氏菌均扩增出526bp的特异性条带,而非沙门氏菌均未扩增出任何条带。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中93cfu的沙门氏菌,还可检出含3cfu的样品用BP预增菌或MM增菌后的菌液。说明该方法敏感性高、特异性强。采用直接菌体加入法、热裂解、反复冻融、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板,结果CTAB法效果最好,但操作烦琐,而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒同样的效果,且操作简便快速、经济、效果好,值得推广应用。     

GyrA and ParC Gene Mutation of Clinically Isolated Fluoroquinolones-resistant Strain of Salmonella

Nine strains resistant to five fluoroquinolones (Ciprofloxacin, Ofloxacin, Enrofloxacin, Danofloxacin, Sarafloxacin) were isolated from clinical samples and extracted the chromosomal DNA of these strains. Designed primers to amplify the Quinolone-resistance-determining region (QRDR) of gyrA and parC, then the PCR products were sequenced and analyzed. In comparision with NCTC5776, a single mutation was found at base 371 in gyrA of strain 38 which changed from C to T, and a single mutation was found at base 350 in gyrA of strain 60 which changed from A to C. No mutation was found in gyrA of the rest. The mutation of strain 38 led to an amino acid substitution of Arg99Cys and the mutation of 60 led to an amino acid substitution of Met 92 Leu. No mutation was found in parC QRDR of all the isolates. These results indicats that the DNA gyrase will be the primary target to salmonella of fluoroquinolone.