沙门氏菌快速检测试剂盒的研制及其应用

在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。     

抗沙门氏菌O_4、O_(12)抗原特异单克隆抗体的产生及其特性鉴定

用鼠伤寒沙门氏菌的热灭活全菌和热酚—水抽提脂多糖抗原免疫BALB/c小鼠,取脾脏淋巴细胞与SP_2/O细胞融合,获得稳定分泌抗沙门氏菌O_4和O_(12)抗原的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系7个,分别命名为AG24-1、AG90-5、BG1-8、BG17-12、BG66-10、BG78-15、EG19-11。小鼠腹水中的单抗直接凝集滴度为10~2-10~4,间接免疫荧光滴度为10~3-10~6。与沙门氏菌和肠杆菌科中其他细菌的反应性试验表明,BG78-15是O_(12)因子特异单抗,其他6种为对O_4因子的特异单抗。     

一种快速检测抗沙门氏菌O抗原单克隆抗体的微量间接血凝试验

用热酚—水法提取沙门氏菌脂多糖(LPS),经pH8.0热处理后,致敏醛化的绵羊红血球,建立了一种快速检测抗沙门氏菌O抗原单克隆抗体的微量间接血凝试验。用致敏血球在96孔V型血凝板上与杂交瘤培养上清作凝集试验,数秒钟即能判定结果。本试验具有快速的特点,且有一定的敏感性。     

谷氨酰胺对肉仔鸡生长性能和盲肠沙门氏菌定植的影响

文章旨在研究谷氨酰胺对肉鸡生长性能和盲肠沙门氏菌水平的影响。试验1选择1日龄AA肉仔鸡234只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复26只鸡,对照组饲喂玉米-豆粕型日粮,处理1组饲喂基础日粮(在3日龄感染3.6×10^6cfu沙门氏菌),处理2组饲喂基础日粮+10g/kg谷氨酰胺(在3日龄感染3.6×10^6cfu沙门氏菌)。试验2选择1日龄AA肉仔鸡312只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复26只鸡,对照组和处理1组同试验1,处理3组同试验1的处理2组,但肉鸡感染7.5×10^6cfu沙门氏菌试验2处理2组饲喂基础日粮+10g/kg谷氨酰胺(不感染沙门氏菌)。两个试验均开展14d。试验1:日粮添加谷氨酰胺对肉鸡生长性能无显著影响(P>0.05)。试验2:处理2组较其他组显著提高了1~7d肉鸡的体重和日增重(P<0.05)。肉鸡感染沙门氏菌4或10d后,日粮添加谷氨酰胺对盲肠沙门氏菌含量无显著影响(P>0.05)。结论:日粮添加1%谷氨酰胺可以提高肉鸡生长性能,但并没有降低盲肠沙门氏菌水平,这说明日粮中添加1%谷氨酰胺不足以达到降低盲肠沙门氏菌的最佳水平。     

融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定

依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8 T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8 T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVA CD8 T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL-O,将此重组质粒pYAGFPL-O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGFPL-O).用SDS-PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD.同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL-O)发出黄绿色荧光.这些结果表明LCMV和OVA T细胞表位已成功表达.重组菌X4550(pYAGFPL-O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础.     

猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析

采用平板稀释法，选用氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类4大类抗生素的11种药物，对30株猪源致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果有28株菌（93．3％）至少对一种药物有耐药性；对四环素、强力霉素、磺胺甲基异口恶唑、复方新诺明、链霉素、卡那霉索和氯霉素有耐药性的菌株较普遍，在所有菌株中占比例分别为83．3％、80％、80％、76．7％、60％、56．7％和56．7％。设计了25对引物，对耐药基因进行了扩增及序列测定，结果扩增到13种耐药基因，与GenBank中的相应基因有很高的同源性（≥98．1％）。30株猪源致病性沙门氏菌中至少含有一种耐药基因的菌株有28株（93．3％），sul1、aph（3′）-Ⅱa、tetC、Catl、tetA和aadAl耐药基因较为普遍，检出率分别为76．7％、60％、60％、43．3％、40％和36．7％。药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性（≥88％）。     

耐氟喹诺酮类鸡源性沙门氏菌DNA旋转酶gyrA基因序列分析

取临床分离的对5种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星和沙拉沙星)均耐药的9株鸡源性沙门氏菌耐药株,提取其染色体DNA。设计引物gyrAF和gyrAR扩增其DNA旋转酶gyrA基因的氟喹诺酮类耐药决定区(QRDR),对PCR扩增产物进行测序及序列分析。与质控菌株相比,9株临床分离耐药株中只有菌株38和60的gyrA基因发生单碱基突变,菌株38的gyrA基因第371位碱基发生C→T突变,菌株60的gyrA基因第350位碱基发生A→C突变,两处突变均位于QRDR内,其余菌株的核苷酸未发生任何突变。菌株38的碱基突变导致gyrA基因第121位氨基酸发生R→C取代,即Arg→Cys;菌株60的碱基突变导致gyrA基因第114位氨基酸发生M→L取代,即Met→Leu。上述结果提示,gyrA基因QRDR突变并非沙门氏菌耐药性产生的主要原因。     

三黄鸡大肠杆菌和沙门氏菌混合感染病原分离鉴定及诊治

对甘肃省榆中2个鸡场饲养的发病三黄鸡进行了流行病学调查、临床症状和病理变化观察、病原菌分离鉴定及血清学诊断,确诊为大肠杆菌与沙门氏菌混合感染。通过药敏试验,选择敏感药物及时治疗,迅速控制了疫情。     

Encapsulated benzoic acid supplementation in broiler diets influences gut bacterial composition and activity

1. The present study investigated the effects of encapsulated benzoic acid (BA) supplementation in broiler feed on performance and gastrointestinal microbiota.

2. Eighty broilers were randomly divided into two groups. Birds in the control group were fed on maize–soybean-based diets. Birds in the treatment group were provided the same diet supplemented with 2 g/kg BA encapsulated in a vegetable oil matrix.

3. At the end of the trial (d 35), pH, bacterial composition and metabolites were determined in the crop, jejunum, ileum and caecum.

4. Growth performance variables and pH were not significantly different.

5. BA concentration decreased rapidly in the proximal gut. However, the treatment diet showed higher BA in the crop, jejunum, ileum and caecum.

6. Total lactate in the crop and D-lactate in the jejunum was higher in the BA treated group. Caecal total and branched chain fatty acids were decreased due to the treatment.

7. Lactobacilli populations were significantly altered by BA supplementation. A trend for increased lactobacilli was observed in the crop, while it became significant in the jejunum and ileum. Lactobacillus species responded differently to the treatment. Four of 5 measured Lactobacillus species, particularly in the ileum, followed the course observed for total lactobacilli; only Lactobacillus salivarius was not modified.

8. Correlation analysis showed that BA modified the intestinal microbiota. Lactobacilli correlated negatively to all studied clostridial clusters and enterobacteria. Clostridial clusters IV and XIVa were significantly increased in the jejunum, whereas only clostridial cluster XIVa was increased in the caecum.

9. Encapsulated BA modified the intestinal microbiota which can lead to the conclusion, that the main beneficial mode of action of BA in the gut appears to be the enhancement of lactic acid bacteria, which in turn may act as a vanguard against pathogens.     

垂直传播引起的鸡沙门氏菌病的诊断与防治

晋中地区某海兰褐父母代种鸡场的孵化室突然发生孵化率下降10%,孵化出的19 800羽商品蛋雏鸡,在经14个养殖场饲养到5～12日龄时发生以下白色痢、糊肛为特征的疾病,死亡率达16.6%。经流行病学调查、临床诊断和实验室诊断,结果表明,引起该病的病原为沙门氏菌,它来源于种鸡饲料中的鱼粉原料,并对氧氟沙星和头孢噻肟高敏。