高致病性猪繁殖与呼吸综合征病(HP-PRRS)的研究近况

近年来我国学者对高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)做了大量调查研究,结果表明HP-PRRSV在我国已是长期带毒、持续流行状态,给我国养猪业带来巨大的经济损失。文章对该病的病原及生物学特性、流行特点、临床表现、病理变化和治疗等方面的研究进展进行了综述。     

皱纹盘鲍血细胞活性氧产生的研究↑（*）

在体外条件下用不同刺激物(海洋酵母细胞和酵母聚糖)对皱纹盘鲍血细胞进行刺激,测定血细胞吞噬活动中经历呼吸爆发产生活性氧的化学发光反应。结果表明,皱纹盘鲍血细胞经刺激诱导吞噬活动中有明显的呼吸爆发现象和很强的活性氧产生。不同的刺激物产生的化学发光强度不同;同一种刺激物的不同处理和不同浓度对血细胞产生活性氧的化学发完强度的影响不同。刺激物经皱纹盘鲍自体血清调理和未经调理对血细胞刺激所产生的化学发光强度不同。SOD和NaN3对血细胞吞噬过程中活性氧产生的化学发光有抑制作用。皱纹盘鲍血细胞在吞噬防御反应中能够通过产生活性氧对外源病原进行杀灭。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异株的基因组特征

对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分离株HB2(sh)／2002的全基因组序列进行了测定与分析。该毒株基因组全长为15373nt(不包括PolyA尾)，与国内外美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于88．7％～95．1％之间。序列分析表明，该毒株是1个天然存在缺失的变异毒株，其ORFla的Nsp2存在编码12个氨基酸的连续36个核苷酸的缺失，ORF、3存在编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失。这是国内外首次发现PRRSV存在缺失变异现象，研究结果补充和丰富了PRRSV毒株的基因组信息数据，为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单克隆抗体的制备及生物学特性研究

通过差速离心和蔗糖密度梯度了心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪1（PRRSV－S1）株进行抗原纯化。免疫BAIB／c小鼠，取脾细胞与SP2／O融合，用间接ELISA和有限稀释法,获得2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株，分别命名为AG、BD3。ELISA交叉试验和阻断试验表明，2株单抗具有高度特异性。AG1可与PRRSV－S1，欧洲株LV，美洲株VR－2332反应，而BD3与美洲株VR－2332反尖较弱，2株单抗对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是：1：256－1：5123，腹水效价分别在1：10^3－1：10^5之间。AG1和BD3各有100条染色体，琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b，BD2属于IgM。Western blot试验表明AG1和BD3是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。     

猪轮状病毒与猪传染性胃肠炎病毒混合感染的实验室诊断

[目的]对海南省某猪场腹泻病死仔猪病原进行实验室诊断。[方法]通过临床症状观察与病理剖检,结合RT-PCR方法和病毒的分离培养进行病原鉴定。[结果]经过RT-PCR扩增,获得了PRV和TGEV阳性目的片段;应用MA-104细胞与PK-15细胞分别进行PRV与TGEV的分离培养后,可见典型的细胞病变,经过RT-PCR进一步鉴定最终确诊为PRV和TEGV混合感染。[结论]通过采用紧急接种和保守治疗等综合防治措施,获得了较好的防控效果。     

5味中药醇提物对尼罗罗非鱼白细胞免疫活性的作用

将超微五倍子、白头翁、地榆、柯子、虎杖粉碎后过160目筛,按照料液比1∶10将药粉与60%的乙醇水溶液混合,再用超声波粉碎机超声1 h,用滤纸过滤收集滤液,置于多样品平行蒸发仪中浓缩后制得中药提取物。用吸取0.2 mL抗凝剂的无菌注射器自尼罗罗非鱼尾静脉采血0.5 mL,与L-15细胞培养基按体积比1∶9的比例混合成血浆,与中草药提取液单用、联用共孵育,利用氮蓝四唑还原法和流式细胞仪技术分别测定中草药提取液对尼罗罗非鱼外周血白细胞呼吸爆发活性和白细胞吞噬活性的影响。试验结果显示,五倍子、白头翁、地榆、柯子、虎杖单用均能显著提高白细胞氧呼吸爆发活性,呼吸爆发增加率分别为128.68%、123.96%、28.37%、44.44%和78.93%;试验组白细胞吞噬率分别较对照组增加44.04%、44.66%、95.00%、10.35%和64.93%。在两味中药双联用试验中,对白细胞氧呼吸爆发活性呈协同作用的组合为白头翁+地榆,呼吸爆发联用指数为1.28;对白细胞吞噬活性呈协同作用的组合为白头翁+虎杖、柯子+虎杖、五倍子+虎杖和白头翁+柯子,吞噬联用指数分别为11.45、6.20、3.03和1....     

Pathogenicity of emerging Japanese type 1 porcine reproductive and respiratory syndrome virus in experimentally infected pigs

To clarify the pathogenicity of Japanese type 1 porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) isolate in experimentally infected pigs, we evaluated clinical signs and monitored viremia for 21 days post-inoculation (dpi). Lungs were mottled, tanned and reddish in appearance; had lesions predominantly in the cranial, middle and accessory lobes; and failed to collapse at 10 dpi. Although microscopic lesions of lungs were reproduced using the Japanese emerging type 1 PRRSV isolate under experimental conditions, no significant differences were noted between the challenge and control groups regarding mean rectal temperature and daily weight gain. These results provide useful insights into the limited pathogenicity of single infection with the Japanese type 1 PRRSV isolate in piglets, which differ from findings in reported field cases.     

表达外源基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆的构建及病毒拯救

为建立表达标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,本研究在PRRSV HuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将新城疫病毒(NDV)NP蛋白末端优势抗原区插入PRRSV NSP2蛋白的复制非必须区,经基因片段的克隆、拼接,构建了含有外源标记基因的感染性的PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-Δ52+NP49。用限制性内切酶SwaΙ将psk-HuN4-F112-Δ52+NP49线性化后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法将病毒RNA转染叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-21)包装出病毒粒子,再转接到猴胚胎肾上皮细胞(MACR-145)传代拯救病毒。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(病毒基因组14667位人工产生的MluⅠ酶切位点)和插入的标记基因序列。间接免疫荧光试验表明,外源基因NP49在拯救的PRRSV中表达,且能够在PRRSV传代过程中稳定遗传。病毒生长特性比较显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了含有标记基因PRRSV的感染性克隆并获得了拯救病毒,为进一步开发新型PRRS疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。     

基于超参数优化算法下的随机森林模型预测奶牛呼吸频率

奶牛呼吸频率是评估环境造成的奶牛热应激程度的重要指标之一。该研究基于随机森林（random forest,RF）算法提出了适用于生产条件下的奶牛个体呼吸频率准确预测模型,为了平衡模型精度与计算效率问题,利用遗传算法（genetic algorithm,GA）、差分进化（differential evolution,DE）算法、粒子群优化（particle swarm optimization,PSO）算法、贝叶斯优化（Bayesian optimization,BO）算法对模型超参数进行优化,并与网格搜索（grid search,GS）下的人工神经网络（artificial neural network,ANN）和极限梯度提升机（extreme gradient boosting,XGBoost）模型进行了对比分析。研究结果表明,使用融合环境参数的修正温湿指数（adjusted temperature-humidity index,ATHI）、时间区域、奶牛产奶量、泌乳天数、身体姿势以及胎次作为输入特征时,基准RF模型的预测性能最佳。在此基础上,4种智能优化算法下的RF模型性能优于GS-ANN和GS-XGBoost,其中BO-RF的综合性能最优,其决定系数、平均绝对误差、平均绝对百分比误差以及均方根误差分别为0.614、7.723、14.4%、9.737,超参数优化耗时约为DE-RF的1/220。特征重要性分析表明,输入因子对奶牛呼吸频率的影响程度不同,ATHI是影响力最高的因子,相对重要性（relative importance,RI）为0.71,其次是时间区域（RI=0.09）和奶牛产奶量（RI=0.07）。研究为奶牛生产、健康评价及牛舍环境精准调控提供了有效方法和基础。     

2014年-2016年广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2和ORF5基因的遗传多样性分析

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传进化情况,对2014年-2016年来自广西各地的部分PRRSV阳性病料进行Nsp2和ORF5基因的扩增和测序分析.结果获得34个Nsp2基因序列和45个ORF5基因序列,均属于美洲型毒株.Nsp2基因间核苷酸序列的同源性为91.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为81.3％~84.3％、88.9％~92.1％、94.3％~99.3％和73.5％~75.1％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为51.5％~53.2％.ORF5基因间核苷酸序列的同源性为82.8％~100％,与PRRSV美洲型毒株VR-2332、CH-1a、JXA1及NADC30株核苷酸序列的同源性分别为83.7％~99.5％、85％~95％、83.8％~99.7％和83.2％~86.4％,而与PRRSV欧洲型毒株LV株核苷酸序列的同源性为62.4％~64.5％.基于Nsp2和ORF5基因推导的氨基酸序列绘制的遗传进化树中,广西地区的毒株主要分布在以JXA1为代表的Ⅳ亚群.表明当前广西PRRSV流行毒株以JXA1株为代表的高致病性美洲型毒株为主,各毒株Nsp2和ORF5基因序列存在一定的差异,尚未发现欧洲型毒株和美洲型NADC30类毒株.