鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化

将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。     

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右     

Comparative studies of acetylcholinesterases purified from two field populations of the oriental migratory locust (Locusta migratoria manilensis): implications of insecticide resistance

Acetylcholinesterase (AChE) was purified by affinity chromatography from two populations of the oriental migratory locust, Locusta migratoria manilensis (Meyen), collected from Huanghua and Pingshan Counties, Hebei Province of China. The purification factors and yields were 1661-fold and 19.3%, respectively, for the Huanghua population, and 3897-fold and 39.6% for the Pingshan population. Both the purification factor and yield were significantly lower in the Huanghua population than in the Pingshan population. AChE activity was almost completely inhibited by 10⁻⁶ M eserine and BW284C51, but ?5.8% of AChE activity was inhibited by ethopropazine at the same concentration, suggesting that purified AChE from either population was a typical insect AChE. However, AChE purified from the Huanghua population was 62-, 2.0-, and 1.6-fold less sensitive to inhibition by the three organophosphate compounds, chlorpyrifos oxon, demeton-S-methyl, and paraoxon, respectively, than that from the Pingshan population. Significantly lower purification factor and low yield associated with reduced sensitivity of AChE to inhibition by the organophosphates indicated that AChE purified from the Huanghua population was biochemically and pharmacologically different from that of the Pingshan population. Reduced sensitivity of AChE appeared to contribute to organophosphate resistance in the locust from Huanghua County, where insecticides have commonly been used to manage outbreaks of the locust.     

红叶石楠提取类胡萝卜素的工艺条件研究

在单因素试验基础上,采用正交试验优化红叶石楠绿叶中类胡萝卜素的提取工艺条件,并用柱层析分离纯化粗提液中的类胡萝卜素。结果表明,在40℃下以丙酮∶乙醇=1∶1为提取剂,料液比1∶10,浸提时间1.5 h,类胡萝卜素含量可达51.26μg/g。该类胡萝卜素粗提液经过柱层析法初步分离纯化,纯化倍数可达1.41。     

诱导Paracin1.7生成的刺激因子的分离与纯化

旨在分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中能够诱导细菌素Paracin1.7分泌的刺激因子,并探明其对副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei) HD1.7细菌素生成量及群体感应相关基因luxS表达的影响。本研究通过60%硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow弱阳离子交换柱层析中度纯化及Superdex 75凝胶层析精度纯化,将获得的层析分离物与L. paracasei HD1.7共培养,检测共培养发酵液的抑菌活性及luxS基因的转录水平,并用SDS-PAGE与Native-PAGE检测分离物质。结果表明L. paracasei HD1.7抑菌活性为126.68%;luxS基因上调表达,为对照菌株的2.43倍;刺激因子的表观分子量约为30 kDa。本研究利用三步法初步分离纯化出诱导Paracin1.7生成的刺激因子,明确该刺激因子可以启动种间群体感应相关基因luxS,为L. paracasei HD1.7的群体感应研究奠定了理论和技术基础。     

汽车新材料的应用与发展趋势分析

《中国制造2025》的提出，我国的制造业将面临着新的发展趋势，而材料作为《中国制造2025》的重点，也必将在汽车领域有新的发展。由于环保和节能的需要，汽车的轻量化已经成为世界汽车发展的潮流。汽车内饰材料的选择、加工处理工艺等更加注重，传统的橡胶材料、发泡材料、皮革等常用的内饰材料。汽车再生资源回收利用也是一种发展趋势。     

采用铺路毡料防止沥青路面反射裂缝的试验研究

采用土工合成材料防止反射裂缝的试验结果表明:使用铺路毡效果最好,而铺设玻璃纤维格栅由于出现粘结问题,将导致龟裂和孔洞的形成。按照法国L.R.P.C.Autun的评价体系,使用铺路毡的性价比比不用加筋材料的路面高3倍,比使用玻璃纤维格栅的高2倍,铺路毡性价比最高。     

绿色木霉Fn10-1纤维素酶的分离纯化及酶学特性测定

试验研究了绿色木霉Fn10-1纤维素酶的初步纯化及酶学性质开展研究。结果表明,该纤维素酶的最适催化温度为70℃,最适pH 7.6,在温度为4~50℃下均能保持较稳定的酶活,高于50℃以后,热稳定性变差,酶活力开始急剧下降。pH在5.6~7.6时该酶有较好的稳定性。Na+、Mn2+、Fe2+、Mg2+、Co2+、Ca2+、Ba2+、Al3+对纤维素酶具有一定的激活作用,Ag+、Fe3+、Cu2+、Zn2+、K+对该酶有一定的抑制作用,其中Cu2+的抑制作用尤为明显。     

环保包装及环保包装的设计

在当今社会,包装扮演着越来越重要的角色.本文从实际出发,阐述了环保包装的重要性,环保包装是未来包装行业的发展趋势.文章从包装材料、设计等方面进一步阐明了环保包装的设计理念、设计方法,并且明确了作为设计师的职责及作为社会公民应具有环保意识.环保的设计理念必将成为未来包装行业的核心理念,环保、绿色包装是时代发展的必然要求.     

裂褶菌多糖的研究进展

裂褶菌多糖(Schizophyllan)是裂褶菌(Schizophyllum commune)的主要活性成分之一.综述了裂褶菌多糖结构、提取纯化工艺和生理活性功能等方面的研究进展.