固氮施氏假单胞菌全局性调控因子RsmA的进化分析及表达特性研究

RsmA是假单胞菌属高度保守的全局性调控因子,该蛋白可通过与靶基因的mRNA结合影响其稳定性或者抑制靶基因的翻译影响蛋白表达。固氮施氏假单胞菌A1501中发现一个rsmA同源基因及一个可能参与rsmA活性调节的非编码小RNA rsmZ基因。对A1501菌中RsmA及RsmZ的分子进化及表达特性进行了研究。分析结果表明,RsmA与铜绿假单胞菌同源性可达98%,RsmZ具有4个RsmA的结合位点。实时定量RT\|PCR结果显示,rsmA在生长初期具有高表达量,而在指数生长期以及平台稳定期表达量下降。非编码RNA rsmZ的转录水平在整个生长时期未发生显著变化。在碳匮乏条件下,rsmA和rsmZ的表达量都显著下调。在一般胁迫σ因子rpoS突变株中,rsmA的表达未受影响,但rsmZ表达上调了30多倍,说明rsmZ的表达受rpoS的负调控。进一步发现,A1501菌中,rsmA和rsmZ的转录不受转录调控因子gacA突变的影响,这与荧光假单胞菌CHAO和铜绿假单胞菌PAO1的调控模式区别,表明RsmA的转录调控模式在固氮施氏假单胞菌A1501中有其独特性。该结果为进一步探索固氮施氏假单胞中RsmA的功能及其特定条件下的调控机制奠定了理论基础。     

枝条浸泡法鉴定番茄抗青枯病研究

采用枝条浸泡菌液法鉴定番茄品种对青枯病的抗性,并对影响鉴定结果的因素进行了研究。结果表明,菌液浓度以1×106～1×107cfu/mL、苗龄以38～48d、浸泡时间以6～12d为宜。该方法可以有效地鉴定番茄品种的抗性,有利于抗病基因鉴定时的取材保证,对抗性植株的快速鉴定及其幼苗的早期快速鉴定具有重要意义。     

变质原料乳中假单胞菌的分离鉴定及产蛋白酶特性研究

[目的]为了解导致原料乳变质的微生物种类及其产蛋白酶活力。[方法]对广东省恒远市某规模化牧场提供的蛋白水解、脂肪上浮的变质原料乳稀释,涂布在MPC琼脂平板上。将平板于6.5 ℃恒温培养箱培养10 d,挑取形态不同的单菌落在LB液体培养基复壮增菌,提取其DNA,利用16S rDNA方法对分离的菌株进行鉴定,并对该菌株的蛋白酶活力及高温钝化后酶残留率进行测定。[结果]MPC琼脂板菌落形态单一,原料乳中分离鉴定出的两株菌均为霍氏假单胞菌,该菌株在28 ℃下对乳平板的水解圈为（15.35±0.56）mm,经135 ℃处理5 s,其蛋白酶残留率为43.63%。[结论]变质原料乳中分离到两株霍氏假单胞菌,并且该菌可产生热不敏感的蛋白酶,该酶的存在会造成原料乳中蛋白质水解,导致UHT乳在货架期内出现蛋白水解、胀包等质量问题。     

固氮斯氏假单胞菌铵载体amtB基因的功能和结构分析

固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501是分离自水稻根际的联合固氮细菌,属变形细菌γ亚族。全基因组序列分析表明该菌含有2个紧密连锁的的铵载体蛋白编码基因amtB1和amtB2,位于同一个操纵子中glnK基因下游。铵载体蛋白AmtB1和AmtB2分别包含12和11个跨膜结构域。为研究amtB的功能,构建了amtB极性双突变株(PKOB1)。amtB极性双突变导致菌株生长缓慢;在铵浓度分别为3.3和10mmol/L条件下,其固氮酶活仍保持在0.01mmol/L的最佳固氮条件的87%和74%,而野生型已经基本尚失固氮能力。以硝酸盐为唯一氮源时,突变株细胞培养液的铵浓度可达到3.4mmol/L,而野生型并未检测到铵,表明AmtB可能参与了P.stutzeriA1501的铵离子转运,并与固氮酶活和氮代谢相关。     

固氮施氏假单胞菌电子传递复合体rnf基因簇的功能鉴定

能量供应是限制生物固氮效率的重要因素,电子传递复合体是生物固氮过程中能量产生的重要组成部分。基因组分析表明,在联合固氮菌施氏假单胞菌A1501基因组中存在两套编码电子传递复合体rnf,分别为基因簇rnf1和rnf2,其中rnf1位于固氮基因岛上,rnf2基因簇位于核心基因组上。为了明确两套电子传递体在生物固氮过程中的功能,分别构建了rnf1和rnf2基因簇的突变株并测定了相关表型。结果发现,在基本培养基中两个基因簇的突变都不影响菌体生长,可能相互之间存在着功能互补;固氮酶活性测定结果表明,位于固氮基因岛中的rnf1基因簇缺失造成固氮酶活下降80%以上,而rnf2基因簇的缺失对酶活无显著影响。进一步采用启动子-lacZ融合表达策略探究了基因簇rnf1对固氮酶结构基因nifH转录的影响,发现rnf1极性突变株中nifH的启动子转录活性仅为野生型的17.59%,推测rnf1缺失造成了固氮条件下能量产生匮乏,胞内碳氮比失衡,进而造成固氮系统表达受抑制。     

茚虫威降解菌海藻酸钠微球制剂研制及应用效果

[目的]以海藻酸钠为载体制备降解菌斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)ACCC 02521菌株微球制剂,确定该制剂降解农田土壤茚虫威的应用条件.[方法]通过微滴包埋成球法,将湿菌体重悬后加入海藻酸钠溶液,混匀后逐滴滴至CaCl2溶液造粒,低温固定后,以0.9％NaCl溶液洗涤,测定降解菌微球的传质性...     

多功能水处理菌Pseudomonas stutzeri CDN1的筛选分离与性质鉴定

从生活污水处理场活性污泥中筛选分离到1株具有好氧反硝化特性的菌株CDN1,经过常规生理生化鉴定、Vitek-32细菌鉴定系统鉴定结合16S rDNA鉴定,确定其为施氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri)。菌株Pseudomonas stutzeri CDN1在好氧培养(25℃,200 r/min)时具有很强的反硝化活性,对硝态氮(NO3--N)的降解率最高可达到94.01%。同时对其絮凝活性进行了测定,结果显示该菌对高岭土具有较好的絮凝活性,最高可达到79.82%。     

杀虫荧光假单胞工程菌对韭菜迟眼蕈蚊幼虫的毒力及田间防效研究

本文采取室内研究和田间试验相结合的方法 ,报道了 5× 10 8/ml荧光假单胞工程菌对韭菜迟眼蕈蚊幼虫毒力测定和田间药效试验结果。表明该生物农药对 2～ 3龄幼虫 72h的毒力回归方程为y =- 1.2 32 5 +1.0 346x(r=0 .96 2 6 ) ,LC50 =1.0 5 70× 10 6菌数 /m1;每 6 6 7m2 使用 5 0 0 0～ 10 0 0 0ml可有效控制韭菜迟眼蕈蚊幼虫的危害 ;该工程菌在田间可长期定殖 ,但其数量随外界环境变化而变化。     

PoprL启动子对丁香假单胞菌DC3000合成冠菌素的影响

冠菌素(coronatine,COR)是由多种丁香假单胞菌致病变种产生的次生代谢产物,是一种新型植物生长调节剂.为了提高菌株冠菌素产量并优化发酵培养条件,将来源于假单胞菌肽聚糖脂蛋白编码基因oprL高效表达组成型启动子PoprL,通过质粒pUCP24/recTE同源重组到丁香假单胞菌DC3000冠菌素合成基因cfl中,...     

雏鸡绿脓杆菌病病原菌的分离和鉴定

通过对某种鸡场雏鸡病原的流行病学调查研究,分离培养并鉴定为绿脓杆菌感染.用动物回归试验、药敏试验、药物治疗和卵黄抗体治疗为临床治疗和防治该疾病提供了一个新的思路.