乌桕根皮醇提物萃取部位抗猪大肠杆菌活性分析

[目的]探讨乌桕根皮醇提物各部位对猪大肠杆菌4种血清型的抗菌活性。[方法]用95%乙醇80℃回流提取乌桕根皮,将醇提液浓缩后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,最后得到萃余的水相,测试各部位的抗菌活性。[结果]醇提物的石油醚部位、正丁醇部位和水部位没有抑制作用,乙酸乙酯部位对血清型K88F、41和987P具有抑制效果,而对血清型K99无效。因此,用中药材防治猪大肠杆菌疾病时,应该考虑到血清型差异。[结论]乌桕根皮提取物可以在一定程度上防治大肠杆菌引起的猪病。     

黏附素F18菌毛研究进展

综述F18菌毛的一般特性、表达和提取、相关血清型和毒力因子、亚单位及基因调控等。     

免疫小鼠血清中猪圆环病毒2型抗体ELISA检测试剂盒的研究

为研制一种小鼠血清中猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）抗体检测试剂盒,以PCV2 Cap蛋白兔多抗作为包被用抗体,捕获纯化的PCV2 Cap蛋白,制备抗原检测板,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗小鼠IgG作为二抗,建立检测小鼠血清中PCV2抗体ELISA检测方法并制备试剂盒。采用所制备的ELISA试剂盒对50份已知阴性血清样本进行检测,临界OD450nm值为0335;采用ELISA试剂盒与IFA分别对100份血清检测,总符合率为96%,检测小鼠血清敏感性效价达1∶16000,与其他常见的猪病毒小鼠阳性血清无交叉反应,2～8 ℃保存15个月稳定,批内变异系数为2.28%～4.17%,批间变异系数为4.27%～6.02%,具有良好的敏感性、特异性、稳定性及重复性;采用ELISA试剂盒对不同来源疫苗免疫组小鼠血清进行检测,均显示良好效果。研究表明,本研究制备的ELISA试剂盒可用于小鼠血清中PCV2抗体效价检测。     

RNA沉默及其在病原真菌研究中的应用

RNA沉默是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,在生物生长发育过程中扮演着基因表达调控的角色。本文主要综述了RNA沉默技术的特点及其在病原真菌中的研究现状及研究策略,包括RNA沉默的作用机制、优缺点,RNA沉默在病原真菌基因功能研究等方面的应用及其发展前景。     

猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型（PCV-2）重组结构蛋白（rCap蛋白）为包被抗原,建立PCV-2间接ELISA诊断方法;对抗原最适包被浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用试验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验。优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815 μg/mL,抗原最佳包被条件为37 ℃ 2 h;血清最适稀释度为1∶40,酶标抗体最适稀释度为1∶500,最佳封闭液为1% BSA;阴阳性临界值判定标准为D450 nm≥0.33,判为阳性,D450 nm＜0.33,判为阴性。特异性试验结果表明,只有PCV-2阳性血清反应后的D450 nm＞0.33,包括抗PCV-1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的D450 nm＜0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性。经对临床疑似PCV-2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69%。组装试剂盒在4 ℃条件下至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗PCV-2血清抗体的ELISA检测方法。     

水稻纹枯病菌毒素致病机理研究

 Crude toxin of Rhizoctonia solani(RS-toxin) caused obvious damage to the cell of rice.The permeability of cell membrane changed and phosphorous permeated exterior when the sheath and leaves were treated with RS-toxin.After 12 hours treated with RS-toxin,chloroplast membrane was damaged and lamella was relaxed and swollen,with some cavities in the chloroplast.Treated with RS-toxin for 36 hours,the chloroplast was disassembled,other organelles became unclear and disappeared such as mitochondria,and some parts of the cell wall thinned and loosed.Treated with 10 times diluted RS-toxin,the chlorophyll content in the rice plants was reduced over 85%.With higher RS-toxin concentration and longer treatment time,the lower the chlorophyll content became.     

猪白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达及其生物学活性测定

【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素-2(pIL2),并鉴定其生物学活性。【方法】以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增IL-2基因。将猪IL-2基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-pIL2,并应用甲基噻唑基四唑(MTT)试验测定融合蛋白的生物学活性。【结果】以含有猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增出1条约420bp的带。所获重组质粒pGEX-pIL2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。SDS-PAGE电泳结果显示,可检测到相对分子质量约为42ku的GST-pIL2,Western-blot证实GST-pIL2能与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋白经薄层层析扫描分析,表达量约占菌体总蛋白的40%。MTT试验证实,表达产物经变性、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖。【结论】猪IL-2基因在大肠杆菌中得到表达,表达的蛋白具有一定的生物学活性。     

枯草芽孢杆菌bioW基因在大肠杆菌中的表达及其对宿主生长的抑制作用

【目的】克隆枯草芽孢杆菌(B.subtilis)生物素基因(bioW),在bioW基因缺陷型大肠杆菌中进行表达,探讨其对bioW基因缺陷型大肠杆菌的遗传互补作用和对宿主的生长抑制作用,为生物素基因工程菌的构建奠定基础。【方法】用大肠杆菌表达载体pEXT20和枯草芽孢杆菌bioW基因构建表达载体pEXT20-bioW,并将其转化到大肠杆菌DH5α和生物素基因缺陷型大肠杆菌株R876中,构建重组菌DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)。分别将R876、DH5α(pEXT20-bioW)、R876(pEXT20-bioW)在不同培养基和不同IPTG浓度下进行培养,检测bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌株的遗传互补和生长抑制作用。【结果】在生物素限制性培养基中,只有同时加入庚二酸和IPTG时,R876(pEXT20-bioW)才能生长。在不含IPTG的LB培养基中,R876(pEXT20-bioW)生长正常;在添加不同浓度IPTG的LB培养基中,DH5α(pEXT20-bioW)和R876(pEXT20-bioW)生长均受到不同程度的抑制。【结论】bioW基因对bioW基因缺陷型大肠杆菌有遗传互补作用。在大肠杆菌中,bioW基因的表达对宿主有生长抑制作用。     

含FMDV 2A序列PRRSV GP5和M蛋白重组腺病毒的构建与鉴定

【目的】构建表达PRRSV GP5和M蛋白、且二者通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接的重组腺病毒,以期实现2个蛋白的同时表达,发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。【方法】利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测。【结果】检测结果均证明,GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。【结论】在GP5和M蛋白之间插入具有自我裂解功能的FMDV 2A策略是切实可行的,并为PRRSV多个蛋白的共表达奠定了基础,也为其他病毒基因工程疫苗的研制提供了全新思路。     

Antimicrobial activity of the essential oil of Centaurea aladagensis

Composition of the water-distilled oil of the aerial parts of Centaurea aladagensis, endemic in Turkey, was analysed by GC-MS. Hexadecanoic acid (39.3%), caryophyllene oxide (6.6%) and hexahydrofarnesyl acetone (4.3%) were found as main constituents in the oil. The oil was tested against 7 human pathogenic microorganisms.