CTNNB1对猪卵巢颗粒细胞的调控

【目的】卵巢颗粒细胞的增殖和分化是原始卵泡生长启动的关键因素,卵巢颗粒细胞过度凋亡是卵泡闭锁的主要原因,因此卵巢颗粒细胞的功能对卵泡生长发育、排卵、激素分泌等至关重要。研究通过探究连环蛋白β1（catenin beta 1, CTNNB1）对猪卵泡发育过程中颗粒细胞的增殖、凋亡及类固醇激素分泌等功能的影响,为猪卵泡发育的分子调控机制研究提供参考。 【方法】利用RNA抽提、实时定量PCR（Quantitative real time PCR, qRT-PCR）等方法,构建CTNNB1在母猪卵巢、肌肉、大脑等9个组织的表达谱;检测母猪性成熟过程中卵巢组织和小（≤3 mm）、中（3—6 mm）、大（≥6 mm）卵泡颗粒细胞中CTNNB1的表达情况。构建CTNNB1的真核表达载体及合成siRNA,转染至猪卵巢颗粒细胞,采用EdU、Annexin V- FITC/PI双染、ELISA等方法,检测CTNNB1对颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌的影响,以及对类固醇激素合成通路重要基因转录表达的影响。【结果】与肌肉、大脑等组织相比,CTNNB1在卵巢中mRNA表达水平最高。性成熟母猪卵巢中CTNNB1转录水平显著高于性成熟前和性成熟后的母猪;卵巢卵泡中CTNNB1转录和蛋白水平随卵泡发育明显上调;且卵巢颗粒细胞中CTNNB1转录和蛋白水平也随卵泡的发育逐渐上调。更重要的是,CTNNB1显著促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡;CTNNB1能够上调CYP1A1和HSD17B7的转录水平,下调CYP11A1、ESR1、ESR2、FSHR、LHR和NR5A1等类固醇激素合成相关基因的转录水平,进而促进颗粒细胞雌激素的分泌,抑制颗粒细胞雄激素和孕激素的分泌。【结论】本研究证实CTNNB1可能通过促进颗粒细胞增殖及雌激素的合成和分泌,抑制颗粒细胞凋亡及雄激素、孕激素的合成和分泌,进而促进卵泡的生长发育。     

GPR30在小鼠发情周期卵巢中的分布和表达

为了获得G蛋白偶联受体30(GPR30)在小鼠发情周期卵巢中的分布和表达规律,分别运用免疫组织化学SP法和RT-PCR法,对小鼠发情前期、发情期、发情后期和间情期卵巢中GPR30分布及GPR30 mRNA的表达进行研究.结果显示:GPR30免疫反应阳性产物分布于小鼠卵巢各级卵泡的颗粒细胞、卵泡膜细胞、卵母细胞以及黄体细胞和间质细胞的细胞膜和胞浆中,以次级卵泡和成熟卵泡的颗粒细胞中分布最多、着色最深;GPR30的相对表达量在小鼠发情周期卵巢中以间情期最低且极显著低于其他3个时期(P＜0.01),发情期最高但与发情前期和发情后期无显著差异(P＞ 0.05).发情周期卵巢中GPR30 mRNA的表达变化规律与GPR30的表达基本一致,其中发情期最高且极显著高于其他时期(P＜0.01),间情期最低且极显著低于其他时期(P＜0.01). GPR30在小鼠卵巢中的分布和表达量变化与卵泡发育过程以及发情周期雌激素变化规律基本一致,提示其介导了雌激素对发情周期卵泡发育和卵母细胞成熟的调节.     

细胞自噬与多囊卵巢综合征研究进展

多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是导致女性月经不调、排卵障碍性不孕的主要原因,确切发病机制尚未阐明。自噬可以发生在卵泡发育的各个阶段,卵泡颗粒细胞自噬相对活跃,具有促性腺激素依赖性和细胞特异性。卵泡颗粒细胞自噬稳态平衡以维持卵巢功能,调控卵泡发育,影响胚胎质量和妊娠结局。PCOS卵泡颗粒细胞自噬活性过高,自噬相关基因表达过强,与PCOS卵泡发育异常、内分泌代谢紊乱、临床自然流产率高和辅助生殖中发生卵巢过度刺激综合征风险增高密切相关,可能是PCOS发病的重要机制。补肾中药通过下调PCOS卵泡颗粒细胞过度自噬,改善卵巢功能,维持机体阴阳平衡,但具体作用机制亟待进一步阐明,为PCOS、不孕症等妇科疑难病症临床诊疗提供新思路。     

卵巢质量及培养条件对郏县红牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的郏县红牛卵巢,研究卵巢质量及培养条件对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:A类卵巢平均获得的卵母细胞数(2.0枚)明显低于B类卵巢获得的卵母细胞数(5.4枚),从A类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(55.00%)、卵裂率(37.50%)显著或极显著低于B类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(80.00%)(p<0.05)、卵裂率(60.17%)(p<0.01);将随机分成三组的卵母细胞分别培养20h(Ⅰ组)、24h(Ⅱ组)、28h(Ⅲ组),三组成熟率(77.77%、78.57%、74.43%)之间无显著差异(p>0.05),但卵裂率Ⅰ组、Ⅱ组(51.79%、58.16%)明显高于Ⅲ组(36.98%)(p<0.05),Ⅰ组、Ⅱ组差异不显著(p>0.05);以M-199为基础液,比较单独添加ECS和FCS与激素配合的情况下,两种血清种类对卵母细胞成熟的影响,结果表明卵母细胞成熟率(73.33%、75.00%)、卵裂率(52.21%、54.35%)均无显著差异(p>0.05)。     

L-茶氨酸改善来曲唑诱导的多囊卵巢综合征大鼠临床症状

为探究L-茶氨酸（L-theanine,LTA）对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome,PCOS）大鼠临床症状的改善效果。将28只雌性SD大鼠按每组7只随机分为正常对照组、PCOS模型组、PCOS+低剂量LTA组和PCOS+高剂量LTA组。建模阶段,除正常对照组以生理盐水灌胃外,其余3组持续灌胃来曲唑28 d诱导PCOS模型。干预阶段,正常对照组和PCOS模型组以生理盐水持续灌胃,两个LTA干预组大鼠分别持续灌胃对应剂量LTA干预30 d。结果显示,与PCOS模型组相比,LTA干预组大鼠血清中睾酮（Testosterone,T）、黄体生成素（Luteinizing hormone,LH）、胰岛素（Insulin,INS）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、总胆固醇（Total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）水平及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均显著降低（P<0.05）,高密度脂蛋白（High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平均显著升高（P<0.05）,黄体生成素与卵泡刺激素的比值（LH/FSH）、空腹血糖（Fasting plasma glucose,FPG）和体重均有所下降（P>0.05）;低剂量LTA干预组大鼠血清雌二醇（Estradiol,E2）显著升高（P<0.05）;高剂量LTA干预组大鼠卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH）显著升高（P<0.05）;LTA干预组大鼠的发情周期紊乱、卵巢组织多囊样病变较PCOS模型组均有一定程度的改善。结果表明,LTA干预能有效调节PCOS大鼠性激素分泌、恢复发情周期规律变化和改善其卵巢多囊样病变,同时显著改善PCOS大鼠胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）、血脂代谢紊乱并抑制异常水平的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）分泌。     

重构胚移植用受体山羊同期发情处理效果比较

分别用CIDR（孕酮阴道栓）＋PMSG（处理1）和CIDR＋PMSG＋LH（处理2）两种处理方法对山羊进行同期发情处理。结果发现,两种处理均以撤栓后第1d发情率最高。撒栓后0-24h和24h-48h的发情率,处理1和处理2（61．4％,13．6％和48％,20％）之间差异不显著;撤栓后48h-72h的发情率,处理1（4．59,6）显著低于处理2（24％）（P〈0．05）;撤栓后0～72h发情率,两种处理（79．5％,92％）无显著差异（P〉0．05）。从手术时对卵巢的观察可以看出,有大卵泡或排卵的发情羊,处理1为91．2％,处理2为100％,二者无显著差异;排卵的发情羊,处理1为（58．8％）显著低于处理2为（91．2％）（P〈0．05）。     

The isoflavone daidzein directly affects porcine ovarian cell functions and modifies the effect of follicle‐stimulating hormone

The key biological active molecule of soya is the isoflavone daidzein, which possesses phytoestrogenic activity. The direct effect of soya and daidzein on ovarian cell functions is not known. This study examined the effect of daidzein on basic porcine ovarian granulosa cell functions and the response to follicle‐stimulating hormone (FSH). We studied the effects of daidzein (0, 1, 10 and 100 μm ), FSH (0, 0.01, 0.1, 1 IU/ml) and combinations of FSH (0, 0.01, 0.1, 1 IU/ml) + daidzein (50 μm ) on proliferation, apoptosis and hormone release from cultured porcine ovarian granulosa cells and ovarian follicles. The expression of a proliferation‐related peptide (PCNA) and an apoptosis‐related peptide (Bax) was analysed using immunocytochemistry. The release of progesterone (P4) and testosterone (T) was detected using EIA. Leptin output was analysed using RIA. Daidzein administration increased granulosa cell proliferation, apoptosis and T and leptin release but inhibited P4 output. Daidzein also increased T release and decreased P4 release from cultured ovarian follicles. Follicle‐stimulating hormone stimulated granulosa cell proliferation, apoptosis and P4, T and leptin release. The addition of daidzein promoted FSH‐stimulated apoptosis (but not proliferation) but suppressed FSH‐stimulated P4, T and leptin release. Our observations of FSH action confirm previous data on the stimulatory effect of FSH on ovarian cell proliferation, apoptosis and steroidogenesis and demonstrate for the first time the involvement of FSH in the upregulation of ovarian leptin release. Our observations of daidzein effects demonstrated for the first time that this soya isoflavone affected basic ovarian cell functions (proliferation, apoptosis and hormones release) and modified the effects of FSH. Daidzein promoted FSH action on ovarian cell proliferation and apoptosis and suppressed, and even inverted, FSH action on hormone release. The direct action of daidzein on basic ovarian cell functions and the ability of these cells to respond to FSH indicate the potential influence of soya‐containing diets on female reproductive processes via direct action on the ovary.     

圆口铜鱼卵巢发育及卵子发生的初步研究

对采于长江木洞江段和金沙江攀枝花江段的165尾圆口铜鱼进行了常规解剖,显微结构观察,结果表明：卵巢发育可分为Ⅰ～Ⅴ期。Ⅰ期卵巢较细,呈线状,以卵原细胞为主。Ⅱ期卵巢体积增加,呈“V”形;第2时相卵母细胞进入小生长期,产卵板明显;细胞质中出现卵黄核和生长环,周围有零散滤泡细胞。Ⅲ期卵巢因血管分布呈微红色,第3时相卵母细胞进入大生长期,核仁外排明显;液泡、卵黄颗粒及放射带出现,形成单层扁平滤泡层。Ⅳ期卵巢呈囊状,血管分布丰富,可见卵粒;第4时相卵母细胞,液泡逐渐退化,卵黄颗粒充满细胞质,滤泡层分化为2层。     

新疆阿勒泰地区草地螟一代成虫卵巢发育与虫源性质探讨

[目的]探讨新疆阿勒泰地区草地螟一代成虫的虫源性质,为新疆草地螟灾害预测、监测及防治提供科学依据.[方法]采用卵巢发育进度和有效积温法,结合测报灯诱蛾和野外种群数量调查.[结果]研究区域草地螟一代成虫存在种群数量突增突减现象;一代草地螟成虫种群数量较低时,88.77;雌蛾卵巢发育处于Ⅰ级;50.76;的雌蛾卵巢发育处于Ⅱ级;草地螟种群数量突然增加且幅度较大时,60.98;的卵巢发育处于Ⅲ级.自8月中旬草地螟种群数量呈现下降趋势,但仍有平均60.75;的草地螟雌蛾卵巢发育处于Ⅱ级.根据2005～2010年有效积温法则分析推算出阿勒泰哈巴河区域草地螟平均发生1.53代,即不完全2代.[结论]新疆北疆阿勒泰边境区域草地螟灾害是由来自本地虫源和境外虫源地迁入的草地螟共同危害所致.     

外源激素对烟草未授粉子房培养的作用

利用２,４－Ｄ和６－ＢＡ种外源激素对烟草未授粉子房单倍体进行了直接途径和间接途径的诱导,结果表明,２,４－Ｄ能诱导子房通过间接途径形成胚状体;６－ＢＡ浓度为２．２２μｍｏｌ．Ｌ＾－１和４．４４μｍｏｌ．Ｌ＾－１时,胚状体的形成间接途径,浓度为８．８９μｍｏｌ．Ｌ＾－１时则为直接途径。在一定用范围内,２种激素都有随浓度的增加胚状诱导率提高的趋势。２种激素不同浓度配合作用,其诱导途径有一定差异,当２,