应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA

运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段，经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段，将余下的2个较大片段连接，并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物，从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体，重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定，验证无误后作为竞争性模板内对照，一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR，产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD)，经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴，取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴，绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明，本方法操作简单，结果可靠，稳定性高，适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。     

大骨鸡中MSTN基因表达规律性的研究

本实验以大骨鸡为试材,采用RT-PCR法检测了MSTN基因在大骨鸡不同器官、不同时间的表达情况,结果表明MSTN基因在骨骼肌中表达水平较高,在心肌、肾脏、脑、肠、舌中也有微量表达,但在肺、肝脏中未检测出MSTNmRNA,而且在14日龄时表达水平明显低于35日龄和56日龄,而且在孵化后一周时胸肌中MSTN基因的表达水平达到最低。     

转抗菌肽基因酵母安全评价及在饲料中应用

1945年弗莱明(Fleming)发现青霉素,1952年瓦克斯曼(Waksman)发现链霉素,先后获得诺贝尔奖。抗生素的发现造福人类作出很大贡献。近来,由于滥用抗生素而诱发耐药性病原菌的产生,造成医疗上的困难,又由于抗生素的毒副作用及残留问题,日益引起社会的重视。1998年欧共体禁止抗生素用作畜禽饲料添加剂,     

甘肃省水资源时间序列模型及其变化规律研究

水文水资源序列是一个具有周期变化、随机变化和递增或递减趋势变化的复杂时间序列。作为一种近似,可以把水文序列{Qt}分为趋势序列{Nt}、周期序列{Pt}和随机性的平稳时间序列{St},即式:Qt=Nt+Pt+St。采用时间序列分析的方法,建立了甘肃省水资源的时间序列模型,分析了其变化规律,结果表明,甘肃省水资源呈明显下降趋势,并存在一定的周期变化规律。     

猪雌激素受体基因研究进展

雌激素受体(ESR)是一种核酸受体，具有转录调控蛋白质的功能，影响着雌激素基因在雌性脊椎动物组织的表达，从而对第二性征、繁殖周期、生殖力、妊娠维持等方面产生影响。本文对雌激素受体的分布、生物学作用、分子结构、基因定位、多态性及其与猪繁殖性能的关系等方面作一综述。     

cDNA Cloning and Sequence Analysis of Rice Sbel and Sbe3 Genes

Two starch-branching enzyme (SBE) in rice, is known to be a key enzyme in amylopectin biosynthesis. The cDNA of two SBE(starch-branching enzyme) genes SheI and Shed encoding SBE Ⅰ and SBE Ⅲ (two major isoforms in rice) were cloned by an improved RT-PCR technique, from a template cDNA libray, derived from the total mRNAs extracted from the immature seeds of a japonica rice Wuyunjing 7. DNA sequence analysis showed that the size of the cloned SheI and Shed cDNAs were 2490 and 2481 bp long, respectively, including their entire coding sequences. Comparison analysis indicated that the nucleotide sequence of She3 was the same as that of shed (Genbank Accession No. D16201) as reported previously. There were only four base-pairs difference,which resulted in changes of two deduced amino acids between the cloned She1 cDNA and the reported she1 (Genbank Accession No. D11082). The cloned SheI and Shed cDNAs make it possible to improve rice starch quality through genetic engineering.     

嗜水气单胞菌gyrA氟喹诺酮抗性决定区的克隆与分析

研究了从病鱼体内分离的嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药性的分子机理。以4株对诺氟沙星等氟喹诺酮类药物耐药菌株及2株敏感菌株为模板，参照杀鲑气单胞菌gyrA基因序列，设计了1对引物，进行gyrA基因氟喹诺酮抗性决定区PCR扩增，将扩增产物克隆入pMD18-T载体，转化入大肠埃希氏菌DH5α中，小提质粒，酶切鉴定，测序并分析比较耐药菌和敏感菌的氨基酸残基序列。发现耐药菌有5个氨基酸突变位点，分别是83位点的Ser→Ile,92位点的Leu→Met,174位点的Ile→Phe,202位点的Asn→Asp,203位点的Leu→Arg，耐药菌突变后的氨基酸残基均比敏感菌正常的相对应氨基酸残基分子量大。83位点的突变与大肠埃希氏菌的耐药性突变一致。122位点具有保守的Try。     

迪卡配套系猪RYR1的PCR分析及其利用的研究

试验从鸡东县永安猪场随机抽取迪卡配套系猪B系和E系42头，通过PCR扩增技术和酶切鉴定．采用克隆技术进行测序，来检测是否含有氟烷基因序列。经过以上技术检测这42头猪均没有氟烷基因。     

猪肺炎支原体黏附因子基因R1R2区的克隆及表达

根据GenBank登录的猪肺炎支原体232株P97基因和J株黏附因子基因设计了1对引物，以我国猪肺炎支原体Z株(强毒株)基因组DNA为模板，通过PCR方法扩增了该株黏附因子基因的部分序列。经序列分析后，重新设计了1对带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物，并经引物的定点突变，PCR扩增了Z株黏附因子的R1R2区。扩增产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32(a) 中。该重组质粒经酶切鉴定后，将其具有正确阅读框架的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，37℃下经IPTG诱导表达，得到相对分子质量约29000的融合蛋白，表达量约为11％。