一种基于RPA的番茄褪绿病毒检测方法

番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)引起番茄褪绿病毒病,给番茄生产造成严重危害。开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。利用番茄褪绿病毒外壳蛋白(CP)基因序列,设计特异性引物,建立了ToCV的重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)检测方法,同时分析了该方法的灵敏度和特异性。结果表明,建立的ToCV-RPA方法在38℃恒温下40 min可从ToCV阳性的番茄样品中扩增出246 bp的特异性条带。扩增时间短,对设备要求低,且与番茄其他病毒无交叉反应,特异性好,灵敏度可达到PCR方法的10倍,适用于ToCV的快速检测。     

芋疫霉重组聚合酶扩增结合侧流层析试纸条快速检测方法的建立及应用

为建立芋疫霉Phytophthora colocasiae快速准确的分子检测方法,基于Ypt1基因特异序列,设计芋疫霉的特异性引物与探针,建立一种快速、准确、可视化的芋疫霉重组聚合酶扩增结合侧流层析试纸条（recombinase polymerase amplification-lateral flow dipstick,LFD-RPA）检测方法,对该检测方法进行优化,评估其特异性与灵敏度,并对田间疑似样品进行检测。结果表明,优化后的芋疫霉LFD-RPA检测方法最适反应条件为39℃恒温反应30 min。LFD-RPA检测方法能够特异性地检测出芋疫霉,而对其他卵菌近缘种和常见植物病原真菌均未检出,且该检测方法对芋疫霉DNA的检测灵敏度达到1 pg/μL。对田间带病组织检测发现,LFD-RPA检测方法能够快速准确地从田间自然发病植株中检测出芋疫霉。表明本研究所建立的芋疫霉LFD-RPA快速可视化检测方法特异性好、灵敏度高、简单快捷,可用于芋疫病的田间快速诊断。     

齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒分子检测研究

齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus,ORSV）与建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus, CyMV）是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4种方法进行了检测研究与比较。结果表明：普通RT-PCR与ELISA方法检测灵敏度相当;巢式RT-PCR检测灵敏度要比普通RT-PCR与ELISA方法高出104倍以上;免疫捕获RT-PCR检测灵敏度介于普通RT-PCR和巢式RT-PCR之间。采用巢式RT-PCR方法对我国台湾进境的蝴蝶兰植株样本检测,1号样本出现与阳性对照一致的特异条带。双向测序分析,扩增产物序列与ORSV外壳蛋白基因具有100％的同源性,表明1号蝴蝶兰样本携带ORSV。     

口蹄疫病毒AF72株 3D聚合酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用RT—PCR方法扩增口蹄疫病毒（FMDV）AF72株的3D聚合酶基因,并将其克隆至pGEM—Teasy载体,测序分析结果表明,AF72 3D聚合酶基因与GenBank中公布的其他4个参考序列均具有较高的同源性。将目的基因插入原核表达载体pET-30a（＋）中,构建了重组表达质粒pET-3D,鉴定后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导,3D聚合酶基因在大肠杆菌中获得了正确表达,目的蛋白的分子量为46ku。Western blot检测结果显示,表达产物可以与抗A型FMDV阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。     

Evaluating the impact of moulting and chilled storage of spermatophores on the integrity of plasma membrane,acrosome and DNA of black tiger prawn (Penaeus monodon) spermatozoa

To explore the impact of moulting and short‐term chilled storage of spermatophores on the sperm quality for a commercially important penaeid prawn, spermatozoa of Penaeus monodon from early (B‐C), middle (D0‐1) and late (D2‐3) moult stages were compared for sperm quality parameters relating to the structural integrity of plasma membrane (Viab%), acrosome (AR%) and DNA (SDF%) after being stored at 4°C for 0–26 days. The three different sperm extenders used for chilled storage included artificial lobster haemolymph (AH), calcium free saline (CS) and filtered seawater (FS); two storage conditions were applied either as a free sperm suspension or retained within the intact spermatophore. Results showed that (a) the lowest natural AR% was shown for B‐C spermatozoa in CS whereas the highest levels were for B‐C, D0‐1 and D2‐3 spermatozoa in FS and D2‐3 spermatozoa in AH; (b) the calcium ionophore A23187 agent used in this study was able to increase the mean AR% by 6.22%; (c) the Viab% was significantly lower in CS than that in FS; (d) the SDF% significantly increased over the period of chilled storage for B‐C and D0‐1 spermatozoa, while the SDF% of D2‐3 spermatozoa was initially elevated and did not change significantly over time; and (e) there was no difference in sperm quality between two storage conditions. This study has successfully demonstrated the moult‐related variance in the percentages of acrosome‐reacted and DNA‐damaged spermatozoa, providing evidence of moult‐related spermatophore renewal cycle in this species.     

煤制油供应链整体优化

随着人们环保意识与政策要求的不断加强以及对石油需求的不断增加,大力发展煤制油技术对保障中国能源安全、调整优化能源结构具有重要意义。以煤制油炼厂为主体,考虑炼厂建设、采购、生产、运输、销售过程及煤炭产地供应与市场需求等相关约束条件,以煤制油炼厂收益最大为目标函数,建立煤制油供应链的混合整数线性规划优化模型,并采用基于分支定界法的大规模数学规划求解器(Gurobi)进行求解。研究成果成功应用于中国某地区煤制油炼厂,对煤制油供应链的建设具有较强的指导意义,一定程度上降低了资源消耗,提升了供应链收益,实现了整个供应链的高效运作。     

无菌大鼠深二度烫伤感染模型机体炎性反应的研究

为探究无菌大鼠深二度烫伤感染模型机体炎性反应，试验利用无菌大鼠分别建立深二度烫伤损伤模型和烫伤后绿脓杆菌感染模型，比较这两种模型和SPF级大鼠深二度烫伤模型在愈合过程、炎性反应及病理变化等方面的异同。20只6周龄雌性Wistar无菌大鼠，在超净工作台内采用恒温恒压烫伤仪94℃作用8 s造成大鼠深二度烫伤，随机分为2组，一组伤口感染浓度为1×10⁵ CFU/mL绿脓杆菌菌液0.5 mL，一组不做处理，创面保持无菌状态，SPF级Wistar大鼠在同样条件下烫伤，创面不做处理。分别观察3组大鼠的伤口结痂时间、脱痂时间和愈合时间，并在烫伤前（0 h），烫伤后24 h、3 d和7 d时，取血清，检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1α（IL-1α）、粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）的变化。结果显示，感染绿脓杆菌大鼠组开始结痂所需时间显著长于SPF级大鼠组和无菌大鼠组（P<0.05）；而脱痂及愈合所需时间显著变短（P<0.05）；感染绿脓杆菌组大鼠烫伤24 h时，皮下组织中可见淋巴细胞，有慢性炎性反应；3 d时，真皮深层有化脓性感染，横纹肌周围可见大量炎细胞，烫伤7 d时，皮下组织中有轻微血管扩张充血，化脓性感染减轻，无菌烫伤大鼠与SPF级烫伤大鼠皮肤在烫伤后一周内有轻度炎性反应。3组大鼠烫伤后，血清GM-CSF、IL-1α及TNF-α水平均较烫伤前显著升高（P<0.05）；烫伤24 h时，感染绿脓杆菌大鼠组和无菌大鼠组血清IL-1α水平显著高于SPF级大鼠组（P<0.05）；无菌大鼠组血清GM-CSF水平显著高于SPF级大鼠组和感染绿脓杆菌大鼠组（P<0.05）；烫伤3 d时，染绿脓杆菌大鼠组和无菌大鼠组血清IL-1α水平显著高于SPF大鼠组（P<0.05），无菌大鼠组血清GM-CSF水平显著高于染绿脓杆菌大鼠组（P<0.05）。综上所述，无菌大鼠对烫伤刺激反应迅速强烈，血清中炎性因子迅速升高，SPF级大鼠深二度烫伤后炎性反应缓慢；无菌大鼠深二度烫伤伤口感染1×10⁵ CFU/mL绿脓杆菌，脱痂时间和愈合时间反而缩短。     

转录组中LncRNA在猪上的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)曾经被人们认为是转录过程中的“垃圾”,翻译过程中的“噪声”。但越来越多的研究发现其在转录的整个过程中具有调控作用,可以参与细胞内的多种生物学调控。之前,lncRNA在人类的疾病、细胞分化等方面得到了高度注视和研究,而在家畜上的研究相对滞后,文章主要综述了lncRNA的生物学功能及在猪上的研究进展,为lncRNA在家畜上研究和应用提供参考。     

大数据视域下木材流通企业的供应链管理策略研究

随着我国社会主义市场经济体系的不断完善,现代化企业的管理模式和产业结构逐步科学化、精细化。而木材流通企业作为木材贸易的重要载体,应用先进的技术和经营模式强化供应链管理,有助于促进木材资源创造丰富的社会价值和经济效益。介绍了大数据环境下企业供应链管理特点,分析了木材流通企业供应链管理大数据优势,对大数据视域下木材流通企业的供应链管理进行展望。