Use of a potentiometric vital dye to determine the effect of the herbicide bromoxynil octanoate on mitochondrial bioenenergetics in Chlamydomonas reinhardtii

BACKGROUND: The aims of the present study were to validate a vital mitochondrial potentiometric staining method in Chlamydomonas reinhardtii and to utilise this method to examine the effect of the herbicide bromoxynil octanoate on mitochondrial potential in this species. A range of stains was investigated, including Rhodamine 123, DASPMI, Mitotracker Green, Mitotracker Orange and JC‐1. RESULTS: Rhodamine 123 (R123) had the highest utility of several candidate stains. Incubation with both 5 and 10 µM carbonyl cyanide 3‐chlorophenylhydrazone caused significant fluorescence collapse [Dunn's post test (40.00, P < 0.01) and (45.49, P < 0.01) respectively], demonstrating that the R123 fluorescence reported mitochondrial potential. The effect of the herbicide bromoxynil octanoate was examined. Exposure to 0.1 mM of bromoxynil resulted in a significant increased mitochondrial fluorescence compared with the baseline (Mann–Whitney U = 222, P < 0.002), while concentrations of 1 mM and greater resulted in significant, almost complete loss of mitochondrial potential [mean fluorescence ratio = 1.193–1.289 (where a ratio of 1 represents total potential loss), Mann–Whitney U = 0.0, P < 0.001 (1 mM ), 0.0, P < 0.0001 (2 mM ), 0.0, P < 0.0001 (5 mM )]. EC₅₀ of the collapse in mitochondrial potential owing to bromoxynil incubation occurred at 0.72 mM , and the mean t₅₀ of bromoxynil octanoate action was 93 s. CONCLUSIONS: R123 is a sensitive potentiometric dye in C. reinhardtii that may find further use in investigations of both mitochondrial bioenergetics in plants and environmental toxicology. Copyright © 2011 Society of Chemical Industry     

贵州野生淡黄花百合RAPD反应体系的建立

以贵州林下野生淡黄花百合(Lilium sulphureum Baker)幼嫩叶片为材料,采用改良的CTAB法提取百合基因组DNA,得到了较高质量的DNA.并对影响随机扩增多态DNA性(RAPD)反应的主要因素进行了优化,建立并优化了野生淡黄花百合的RAPD反应体系及程序.优化的20μL反应体系中包含20 ng模板DNA,2.0 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、1.0 U Taq DNA聚合酶、10×Buffer 2μL、0.4 μmol/L随机引物、ddH2O补足至20μL.优化的RAPD扩增程序为94℃3 min;94℃50 s,37℃40 s,72℃80 s,40个循环;72 ℃ 10 min,4℃保存.该反应体系具有较好的稳定性及可重复性,适合贵州野生淡黄花百合遗传多样性研究.     

一种DNA提取新方法在转基因水稻种子检测中的应用

将水稻种子打磨成粉,取100 mg粉末加入SDS和NaC1等试剂配制成高盐提取液,然后提取基因组DNA.超微量分光光度计NanoDrop 1000检测及Eco RV酶切反应的结果表明,该方法比CTAB法的DNA浓度更高、纯度更好.以提取得到的DNA为模板,采用PCR法分别对水稻特异性内源基因SPS及转基因水稻外源基因Bt进行扩增,均能扩增到清晰的目标条带.这种DNA提取新方法不仅简单快速、成本低廉,而且提取到的DNA质量高,扩增效果好,可有效地用于水稻种子转基因成分的检测.     

三角梅总DNA提取方法比较研究

为了选择一种快速、有效、简单的三角梅总DNA的提取方法,分别采用DNA提取试剂盒法、CTABmini法、改良SDS-KAC法、CTAB大量法提取三角梅嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳对所提取的总DNA进行检测。结果表明：CTABmini法提取的三角梅总DNA纯度高,浓度高,并且简单省时。CTABmini法是较为理想的三角梅总DNA提取方法,该法提取的总DNA适用于三角梅的分子生物学研究。     

草珊瑚扦插繁殖试验

研究了不同植物生长调节剂、不同扦插基质、不同枝条部位对草珊瑚扦插生根的影响。结果表明:植物生长调节剂、扦插基质、枝条部位对草珊瑚扦插生根均有显著影响。采用2a生枝条的中部和基部为插穗,黄心土为扦插基质,200mg/L ABT生根粉1号溶液浸泡30min,生根率可达88.7%。     

一种采用阴离子交换柱快速纯化Taq DNA聚合酶的方法

通过37℃恒温振荡培养含有Taq DNA聚合酶基因的E.coli菌株,并用IPTG诱导该基因表达获得TaqDNA聚合酶蛋白,利用40％硫酸铵沉淀该蛋白后溶解于storage buffer中.此法获得的Taq DNA聚合酶带负电荷,因此采用阴离子交换柱纯化蛋白.试验结果表明,此法与传统的透析方法相比能快速地去除生物小分子杂质,同时去除透析方法无法除去的杂蛋白;既能保证Taq DNA聚合酶的生物学活性,同时能缩短纯化时间、提高Taq DNA聚合酶的纯度.以土壤微生物DNA、水稻cDNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行测序,结果显示纯化后的Taq DNA聚合酶具有较高的扩增效率和保真性.     

抱石莲化学成分研究

运用多种柱色谱方法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据对其鉴定,以研究苗药抱石莲(Lepi-dogrammitis drymoglossoide(Bak.)Ching)的化学成分。结果表明,从该植物中首次分离鉴定了6个酚酸化合物和1个甾体化合物,分别为4-羟基苯甲酸(1)、6,7-二羟基香豆素(2)、3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯(3)、咖啡酸(4)、3,4-二羟基苯甲酸(5)、3,4-二羟基苯甲醛(6)和胡萝卜苷(7)。     

瓜环对卷烟主流烟气中挥发性酚类的吸附作用

采用超高效液相色谱考察瓜环Q[5]、Q[6]、Q[8]及混合瓜环Q[n]对卷烟主流烟气中挥发性酚类化合物的吸附截留作用。结果表明:Q[8]及Q[n]对酚类具有显著截留作用,在用量为20 mg时,对总酚的吸附率分别达到26.4%和44.5%;瓜环对主流烟气中单酚的吸附效率高于双酚,对o-甲酚的吸附效果最佳。     

不同密度和施肥量对党参品质及其病害程度的效应研究

针对影响党参等级、浸出物、农残、重金属和病害率的栽植密度和施肥量二因素,采用2因素8水平3重复随机区组法进行研究。结果表明,一等品比例较小且集中于60万株/hm2处理;二等品所占比例最大的是90万株/hm2和360 kg/hm2组合。二等品总额中,施肥量相同条件下,所占比例大小顺序是60万株/hm2＞90万株/hm2＞75万株/hm2＞105万株/hm2处理;所有产品以三等品为主;浸出物全部高于标准值,大于70.0%的有4个组合;在密度相同条件下,As、Cu含量最大值基本都在360 kg/hm2施肥量下产生;Pb最大值则在0施肥下产生;Cd基本都趋近于0.01%;Hg含量规律性不强。根病害率最低的是75万株/hm2和360 kg/hm2组合,为1.48%。密度和施肥量科学合理的配置不仅对品质有重要意义,而且也有助于提高商品性。     

DNA分子标记及其在水稻遗传育种研究中的应用

简要综述了DNA分子标记的概念、特点、种类,分子标记在水稻遗传连锁图谱的构建、基因定位、种质资源研究、分子标记辅助选择育种、水稻品质性状的分子标记等研究中的应用,并对DNA分子标记技术在水稻遗传育种研究中的应用前景进行了展望。