不同白腐真菌复配对底物碳和氮的利用规律的研究

通过单一白腐真菌和不同白腐真菌复配对底物碳、氮消耗的比较,得出随着碳、氮的消耗,无论是单一菌还是复合菌,酶活峰值均发生在对数消耗阶段;并且缓慢消耗阶段越长,产酶量越低;在产酶最高的青顶拟多孔菌的参与下,对底物碳氮的利用显著,同时提高产酶量,缩短达到酶活峰值所用时间;在不产酶菌株的参与下,延长对底物碳氮的吸收时间和达到酶活峰值所用时间,对产酶量的影响较小。     

白腐真菌F9产漆酶发酵条件的优化

采用液体摇瓶培养方法,探讨了碳源、氮源、pH值、培养温度等各种因素对白腐真菌分泌漆酶能力的影响,采用正交试验对主要的影响因素进行了优化。优化的培养条件为:马铃薯200 g/L,葡萄糖20 g/L,酵母膏5 g/L,MgSO41.5 g/L,VB10.1 g/L,ZnSO40.05 g/L,MnSO40.05g/L,KH2PO43.0 g/L,pH 6,120 r/min,28℃发酵到10 d左右粗酶液酶活达到109.1μ/mL。     

Preserving boiled eggs with a sterilization system employing microbial laccase and wood vinegar

A combination of a microbial laccase and wood vinegar was used to treat the shell surface of boiled eggs. The laccase enhanced the sterilization effect of phenolic compounds contained in the wood vinegar and resulted in prevention of microbial infection of the boiled eggs after storage for 21 days at 40°C and 75% relative humidity. Significant phenoxy radicals, formed by the catalytic reaction of the laccase, could be detected in the shell of the boiled eggs.     

漆树酶催化氧化甲苯-3,4-二硫酚

以漆树酶催化氧化甲苯－３,４－二硫酚并在产品分离纯化和光谱分析,确定产物结构。     

碱液浸泡-蒸汽闪爆-漆酶介体处理制备棉秆皮纤维

为了实现棉秆的高效资源化利用,该文提出一种碱液浸泡-蒸汽闪爆-漆酶/介体联合处理棉秆皮制备纺织纤维的新方法。研究了浸泡NaOH用量对棉秆皮分离效果的影响以及漆酶/介体处理介体种类及用量、漆酶用量对木质素去除的影响。采用扫描电子显微镜、X射线衍射、热稳定性分析等方法,对比研究了蒸汽闪爆、漆酶/介体处理后棉秆皮纤维的化学成分、结构与性能。研究结果表明,碱液浸泡-蒸汽闪爆-漆酶/介体处理（NaOH用量10 g/L,介体ABTS用量为棉秆皮纤维干质量的1%,漆酶用量为600 U/g）能制得表面洁净、热稳定性好的棉秆皮纤维,其长度为55.7 mm,细度为28 dtex,长径比为1 139,断裂强度为2.97 cN/dtex,纤维素质量分数为78%,结晶指数为67.5,得率为40%,可用于纺织,研究结果为木质纤维素纤维的制备提供参考。     

耐铜菌株4bs的鉴定及其对染料脱色的效果

从土壤中筛选出1株具有较高漆酶活性的菌株,经分子生物学方法鉴定,该菌株为芽孢杆菌属细菌,将其命名为Bacillus sp.4bs。菌株4bs的最适生长温度和pH分别为37℃和7.0,其在6%(w/v)Na Cl溶液中能够正常生长,在含有2.0 mmol/L Cu~(2+)的培养基中仍生长旺盛。以丁香醛连氮为底物,菌株4bs的芽孢漆酶活性为35.66U/g(干重),其芽孢漆酶最适反应温度为80℃,最适反应pH值为6.8;0.1 mmol/L的半胱氨酸、二硫苏糖醇和叠氮化钠抑制其活性,10 mmol/L的Na~+, K~+, Cu~(2+)和Li~+能够增强其活性。在pH 6.8的体系中,菌株4bs芽孢漆酶对结晶紫和茜素红在6 h内的脱色率分别为83.57%和77.16%;加入乙酰丁香酮(Ace)作介体时,对靛红的脱色率由52.73%提高到94.98%,对活性黑5的脱色率由19.01%提高到90.10%。     

深圳近海海域产纤维素酶、脂肪酶和漆酶 真菌的筛选及酶学性质分析

现有自深圳海域分离出的真菌31株,其中包括22株丝状真菌和9株酵母菌.对各菌株进行纤维素酶、脂肪酶和漆酶等胞外酶的定性筛选后,进行胞外酶定量分析.结果表明,在定性初筛的培养基生长5d后,大多数菌株呈现出2～3种胞外酶活力的溶解圈,而9个酵母菌菌株都没有检出漆酶活力.在定性测量的结果基础上,挑选出产酶潜力大的2株丝状真菌(PKU F16、PKU F18)和2株酵母菌(PKU Y5、PKU Y8),进行3种胞外酶的定量分析.在各菌株培养4、6、9d时,分别对3种胞外酶活进行测定,结果发现各菌株生产3种胞外酶的定量分析结果与定性分析结果基本吻合,且随着培养时间的增长,菌株的胞外酶活力呈现先增后减的趋势.在第6天,F18和Y8产纤维素酶活力分别高达1.13、1.31 U/min·mL.Y8的脂肪酶活力产量高达21.94 U/min·mL.F18和F16产漆酶活力高达14.61、10.50 U/min· mL.     

来源于枯草芽孢杆菌的漆酶cotA基因克隆与表达及其酶学性质研究

漆酶作为一种含铜离子的多酚氧化酶,在环境保护、生物能源、食品工业和纸浆漂白等工业中有重要的应用价值。从枯草芽孢杆菌168菌株中克隆漆酶cotA基因,全长1 542 bp,编码513个氨基酸,外加一个终止密码子。将该基因在大肠杆菌Transetta（DE3）菌株中通过微好氧发酵法进行异源表达和纯化,获得的重组酶蛋白CotA的最适反应温度为60℃,最适pH为4.5。该酶在60℃具有较好的热稳定性,保温90 min后仍有71.70%的剩余酶活。最适反应条件下,重组酶对ABTS的Km为63.9±5 μmol/L,kcat为39.1±1/s,最大反应速率为0.005 μmol/L·min·mg,且在最适反应条件下,微好氧发酵法获得的重组酶蛋白CotA的比活（557.8 U/mg）是低温诱导法（0.2 U/mg）的2 655.4倍。因此,通过微好氧发酵法可以显著提高重组漆酶CotA的比活力。     

北方梭囊孔菌漆酶基因DNA片段的克隆与序列分析

根据报道的10几种真菌漆酶氨基酸序列的保守区域设计了一对简并引物,以北方梭囊孔菌总DNA为模板,通过PCR扩增到一个1 201 bp的基因片段.将片段序列在NCBI的BLAST软件上进行同源性搜寻,显示99个序列,全部为漆酶基因及其类似基因,因而认为克隆到的片段就是北方梭囊孔菌漆酶基因片段.经过与同源性最高的粗毛革孔菌（laccase lcc1）同一区段编码区序列进行ClustalW比较,其中有6个间隔区,确定为内含子区.去除内含子后,推导的氨基酸序列为286个残基.经与其他几种真菌漆酶的氨基酸序列进行ClustalW比对,同源性均在51%以上.      

一株无柄灵芝菌(G.resinaceum)LZ02高产漆酶液体培养基的响应面法优化

【目的】采用响应面法优化液体发酵培养基的碳、氮源,提高大型真菌无柄灵芝菌(G.resinaceum)LZ02的漆酶产量。【方法】 在MF基础产酶培养基和单因素试验的基础上,以干酪素(A)、麦麸(B)、葡萄糖(C)、酒石酸铵(D)的添加量为4个影响因素,以漆酶酶活为响应值(Y),采用Design-Expert8软件的中心组合设计方法设计响应面试验,研究干酪素、麦麸、葡萄糖、酒石酸铵各自变量及其交互作用对漆酶产量的影响,并建立以漆酶产量为响应值的二次多项式回归数学模型,得到高产漆酶的最佳液体发酵培养基的碳氮源配比。【结果】无柄灵芝菌(G.resinaceum)LZ02产酶培养基4个因素的最佳组合为干酪素含量2.5%、麦麸含量1.5%、葡萄糖含量1.0%和酒石酸铵含量0.6%时,相应响应面二次模型预测漆酶活性最大值为16505U/L,通过3次平行摇瓶发酵试验得到的菌漆酶活性为15 800 U/L,与理论预测值无明显差异。【结论】响应面分析法提供的模型较真实地拟合了实际情况,证明了模型的可靠性。