不同培养方法对昆虫病原线虫质量影响及其评价

采用传统的White trap法、Lowtek培养法、液体和固体培养4种方法繁殖异小杆线虫[Heterorhabditis bac-teriophora(Hb-1)]和斯氏线虫[Steinernemacarpocapsae(Sc-2)],测定和计算了线虫的产量、质量和成本。试验结果显示,4种方法培养对线虫侵染力和存活率有一定影响,但差异不显著(p<0.05),2种线虫从高到低的顺序为:White trap法>Lowtek法>固体培养>液体培养;产量最高的是固体培养法,其次是液体培养法,Lowtek法最低;繁殖成本从低到高的顺序为:Lowtek法<固体培养     

青藏高原东部雨季降水量分布模型的建立

采用高分辨率的3"数字高程模型资料和青藏高原东部102个常规气象观测站5～9月份的降水资料,根据降水随高度分布将站点分为3类,采用多元逐步回归的方法,建立了青藏高原40年(1961-2000年)雨季逐年降水量和经度、纬度、海拔高度、坡度、坡向、开放度等地理、地形因子之间的关系模型,估算了青藏高原地区降水量的空间分布.结果表明:建立的关于青藏高原降水量与诸因子之间方程的相关性显著,相对误差在20%,平均相对误差在4.4%之内,估算模型的相关系数均通过置信度为0.95 的检验;并且地理地形因子对40年平均和逐年降水量分布特征的影响较为稳定,其归一化的模拟系数基本控制在±1之间,这对定量分析和评价站点稀少、地形复杂的高原降水有重要意义.     

猪苓菌丝体多糖对小鼠免疫水平的影响

通过人工液体浅层培养方式培养猪苓菌丝体，用热水浸提法提取猪苓菌丝体多糖（PPS1），经纯化测定其糖含量，用红外光谱分析鉴定多糖，纯化鉴定的PPS1，通过小鼠进行腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、E玫瑰花环试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞转化试验、EAC花环试验等5项免疫学试验初步探讨其免疫药理学作用，同时与猪苓菌核多糖（PPS2）进行比较。试验数据经统计学分析显示，E玫瑰花环试验中PPS1与空白对照组相比差异显著（P〈0．05）；腹腔单核巨噬细胞功能测定试验、足跖肿胀厚度试验、淋巴细胞转化试验覆EAC花环试验PPS1与空白对照组相比差异极显著（P〈0.01）；5项免疫学试验PPS1与PPS2相比差异均不显著。结果表明，PPS1能明显提高小鼠的免疫功能。     

牛卵泡卵母细胞的体外成熟和冷冻保存

在简化牛卵母细胞体外成熟的基础上,观察了保护剂、平衡温度、预平衡方法、解冻方法以及冷冻方法对牛卵泡卵母细胞冷冻的影响。结果表明:在体外成熟培养液中添加26.2 mmol/L的NaHCO3和对屠宰场卵巢进行选择更能促进牛卵母细胞的体外成熟;无论是程序冷冻还是玻璃化冷冻,乙二醇(EG)与甘油(GLY)相比更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻效果;在程序冷冻中,冷冻液中添加0.1 mol/L蔗糖比添加0.3mol/L的蔗糖更能促进牛卵泡卵母细胞的冷冻;在玻璃化冷冻中,37℃和25℃的平衡温度比4℃更适合牛卵泡卵母细胞的冷冻;在10%、5%、1%的预平衡浓度之间,5%的预平衡浓度即可达到预平衡的效果;在解冻时,多步脱除保护剂更能保护冷冻的卵母细胞;比较了几种最小样本量(minimum size sample,MSS)玻璃化冷冻方法,解冻成熟培养后的成熟率,拉细毛细玻璃管冷冻法为(41.67±3.19)%,极显著高于未拉细毛细玻璃管冷冻法(glassmicropipette,GMP)的(30.19±1.93)%和固体表面冷冻法(solid surface vitrification,SSV)的(28.33±2.89)%(P<0.01)。     

在体外模拟瘤胃发酵条件下N-乙酰-DL-蛋氨酸稳定性的研究

通过两个试验,研究在体外模拟瘤胃发酵条件下N-乙酰-DL-蛋氨酸的降解率。试验1:N-乙酰-DL-蛋氨酸在pH值6.5、温度为39℃的缓冲液中孵育9h,其降解率为3.3%。试验2:运用瘤胃体外发酵技术研究N-乙酰-DL-蛋氨酸不同添加量对pH值、氨态氮、微生物蛋白动态变化的影响。结果表明,添加0.4、0.6gN-乙酰-DL-蛋氨酸发酵3～6h,均能够显著降低体系的pH值;添加0.6gN-乙酰-DL-蛋氨酸发酵12h能够显著提高氨态氮的浓度;N-乙酰-DL-蛋氨酸在发酵过程中不影响微生物蛋白产量。以上结果显示,N-乙酰-DL-蛋氨酸在体外模拟瘤胃发酵的条件下可以稳定存在。     

生长因子EGF、bFGF对猪孤雌胚体外发育的影响

在胚胎发育的不同阶段，分别在培养基中添加EGF和bFGF，研究EGF和bFGF对猪孤雌胚体外发育的作用。结果表明：在1细胞阶段添加EGF或bFGF，添加EGF能够显著提高孤雌胚的卵裂率（P〈0．05）；2～4细胞阶段添加EGF和bFGF，添加EGF组和添加bFGF组的囊胚率都显著高于对照组（P〈0．05），而添加bFGF组的囊胚率和囊胚细胞数都略高于对照组和添加EGF组。说明EGF和bFGF有利于猪孤雌胚的体外发育，而且，bF-GF能够通过提高囊胚细胞数而提高猪孤雌胚的质量。     

猪CTSD全长cDNA的克隆和表达分析

以人CTSD mRNA全长序列为基序,在db EST库中搜索同源性大于80%、重叠大于40个碱基的猪EST下载经Seqman软件装配后,利用RT-PCR扩增到猪CTSD基因部分cDNA序列,进一步通过RACE技术获得cDNA全长（GenBank登录号为DQ018727）,猪CTSD基因cDNA全长2032 bp包括93 bp 5′UTR区、706 bp 3′UTR区和1 233bp ORF,编码410个氨基酸残基。其编码区与人、鼠、牛、羊CTSD编码区同源性分别为87.9%、78.2%、86.6%和85.0%,其氨基酸序列与人、鼠、牛、羊氨基酸序列同源性分别为86.6%、80.1%、86.0%和84.7%。疏水性分析和信号肽预测发现猪CTSD氨基酸序列存在至少7个疏水性区域,信号肽位点为第1-20个氨基酸残基。在NCBI进行Blast P搜索结果显示猪CTSD氨基酸结构中含有Asn（Asparagine,天门冬酰胺）结构域,与天冬氨酸蛋白酶3D结构同源性高达99.7%,具有真核生物天冬氨酸蛋白酶的典型结构。以猪多组织RNA池为模板,以1026 bp部分cDNA序列作为杂交探针进行Northern杂交,得到一条2000 bp左右特异条带,从而验证了RACE产物为全长cDNA并揭示该基因只有一个转录本。为了研究猪CTSD基因在体内不同组织内表达的特点,采用半定量RT-PCR对CTSD基因在猪10个组织中的表达进行研究,结果表明在10个组织中均有表达,且表达量与-βactin内参接近。     

地锦草总黄酮的体外抑菌试验

采用醇提法从地锦草中提取其主要有效成分黄酮类化合物,通过滤纸片法对3种浓度(0.4、0.8、1.6mg/ml)的地锦草黄酮提取液进行抑菌实验。结果表明,地锦草黄酮提取液对巴氏杆菌、沙门氏菌的体外抑菌作用较强,1.6mg/ml的黄酮提取液对巴氏杆菌、沙门氏菌的抑菌直径分别达到(22.0±1.0)mm、(26.0±2.0)mm,随着黄酮浓度的增加,其抑菌作用也增强。地锦草黄酮对巴氏杆菌、沙门氏菌的MIC分别为0.625mg/ml、1.25mg/ml,地锦草黄酮提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌也有一定的抑菌作用。     

不同培养液及血清浓度对绵羊孤雌生殖胚胎发育的影响

体外成熟的绵羊卵母细胞，经5 μmol/L A23187 5 min和2 mmol/L 6-DMAP 4 h激活后，分别在SOFaa、M-199两种培养液中进行培养，试验比较了SOFaa、M-199液分别添加BSA和不同浓度（10%、20%）胎牛血清对绵羊孤雌生殖胚体外发育的影响。M-199+FCS组的卵裂率显著低于SOFaa+BSA和SOFaa+FCS组（P<0.05），SOFaa+BSA组的囊胚率显著低于M-199+BSA、SOFaa+FCS、M-199+FCS三组（P<0.05）；SOFaa+10% FCS与SOFaa+20% FCS组的卵裂率及囊胚率均无显著差异，M-199+10% FCS和M-199+20% FCS组的卵裂率及囊胚率间均无显著差异。结果表明：SOFaa比M-199更适合绵羊孤雌生殖胚体外发育，此外添加10%的FCS即可达到较好的培养效果。     

不同采卵方法及卵巢所处性周期阶段对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本试验主要从采集方法和性周期阶段2方面对绵羊卵母细胞体外成熟的影响进行了探讨。结果表明：不同采卵方法的采卵效果存在差异，卵裂率切割法显著高于抽吸法(27.9%，49.5%；P<0.05)；A、B级卵母细胞成熟率极显著高于C级(75.3%，64.4%，29.1%，P<0.01)，卵裂率A、B级均显著高于C级(42.5%，35.8%，16.0%，P<0.05)；从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别为66.7%、62.9%；38.2%、34.4%，没有显著差异 (P>0.05)。