规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查

脑心肌炎病毒(EMCV)可引起猪的脑炎、心肌炎和母猪繁殖障碍,该病已在世界上多个国家暴发和流行。我国对EMCV及其所致疾病的研究工作还处于起步阶段,为了揭示EMCV在我国规模化猪场的感染情况,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2005-2006年间采集自全国13个省市46个规模化猪场的3250份血清样本进行了EMCV抗体检测,结果显示,各省阳性率在39.64%~90%之间,平均抗体阳性率为72%,监测的46个猪场都存在EMCV感染,猪场感染阳性率为100%;对不同生长阶段猪群检测结果表明,EMCV抗体阳性率随猪龄的增长而升高,且不同生长阶段猪抗体阳性率差异极显著;成年公猪的抗体阳性率高于成年母猪。本项调查表明,我国规模化猪场已经普遍感染EMCV,这应引起我国养猪业警惕,并做好该病的综合防控。     

犬细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

利用本实验室建立的昆虫细胞/杆状病毒表达系统表达犬细小病毒病毒样颗粒（CPV-VLPs）,采用硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心对表达的CPV-VLPs进行纯化,用电子显微镜、SDS-PAGE及Western-blotting方法检测纯化效果。以纯化的CPV-VLPs作为包被抗原建立CPV间接ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、敏感性、重复性。结果显示,CPV-VLPs经过纯化后纯度可达到95%以上;优化的ELISA最佳工作条件为：纯化抗原包被浓度为5.0mg/L,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;待检血清1∶40稀释,37℃孵育1.5h;HRP标记的酶标二抗1∶20 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min;确定的血清阴性阳性临界值D450nm值为0.264。该方法可特异性检测犬细小病毒阳性血清,与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬冠状病毒病、狂犬病阳性血清均不发生反应。该方法的敏感性为1∶640,批内重复试验变异系数小于6%,批间重复试验变异系数小于8%。42份临床血清样本的检测结果表明,与血凝抑制试验的符合率为90.48%。     

犬传染性肝炎病毒的血凝抑制抗体和中和抗体的关系

犬传染性肝炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｃａｎｉｎｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＩＣＨＶ）能诱导动物机体产生中和（Ｓｅｒｕｍ　ｎｅｕｔｒｏｌｉｚａｔｉｏｎ，ＳＮ）抗体与血凝抑制（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，ＨＩ）抗体，本研究对８份ＩＣＨＶ免疫的犬血清同时进行了其ＳＮ抗体和ＨＩ抗体的检测，结果表明ＳＮ抗体和ＨＩ抗体具有正比线性关系ＳＮ≈８×ＨＩ，并绘制了标准曲线。由于血凝和ＨＩ试验不需应用活的试验宿主系统，而且可在３　ｈ内获得结果，操作经济简便，因此可通过测定ＨＩ抗体的效价来推算出ＳＮ抗体效价。     

羊胎盘转移因子注射液体液免疫调节作用的研究

[目的]通过研究羊胎盘转移因子注射液对实验动物免疫球蛋白、B淋巴细胞和抗体形成细胞数量变化的影响,探讨受试药品对实验动物体液免疫的调节作用,进而评估其临床体液免疫调节的使用价值。[方法]试验1:用小白鼠进行免疫球蛋白测定试验,比较给药前后小白鼠血清免疫球蛋白的变化;试验2:用大白兔进行EAC玫瑰花环试验,测定给药前后B淋巴细胞数量的变化;试验3:用小白鼠进行溶血空斑试验,比较试验组和对照组抗体形成细胞数的变化。[结果]试验1:试验组小白鼠血清免疫球蛋白含量显著提高(P<0.05);试验2:试验组受试动物EAC玫瑰花环的成环细胞数显著高于对照组(P<0.05);试验3:试验组小白鼠抗体生成细胞的数量极显著增加(P<0.01)。[结论]羊胎盘转移因子注射液对受试动物体液免疫有显著调节作用。     

鸭坦布苏病毒E蛋白具有独特交叉反应性中和表位的鉴定

利用抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)中和单抗1G2,结合E蛋白多肽扫描技术,鉴定了最小抗原表位²²⁷GSSAGTWQN²³⁵。Western blot显示,残基²³¹G或²³³W的突变后,表位完全失去了与1G2抗体识别的功能,表明²³¹G或²³³W是抗体1G2识别的关键氨基酸位点。通过免疫荧光分析(IFA)显示,MAb 1G2与JEV、WNV和ZIKV的E蛋白发生交叉反应,表明该表位是黄病毒的交叉反应性表位。蛋白质和病毒模型显示,表位定位于成熟病毒粒子可接近的表面,在E蛋白结构域Ⅱ的hi环中。本研究首次证明,中和抗体1G2靶向交叉反应表位定位在E蛋白结构域Ⅱ的hi环,该表位的鉴定有助于提高对黄病毒血清诊断中存在交叉反应问题的认识和理解。     

一定免疫程序下猪瘟、猪伪狂犬病抗体水平合格率分析

猪瘟、猪伪狂犬病一直危害着我国的养猪业，为提高猪群对这两病的抵抗力，减少经济损失，浙江加华种猪有限公司通过抗体水平检测及合格率分析，确定了本场猪瘟、猪伪狂犬病科学、合理的免疫接种程序。     

口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗在豚鼠、猪体内的毒性、分布及抗体消长规律

利用临床观察、病理解剖、PCR、RT-PCR、ELISA、中和抗体检测等方法,对口蹄疫(FMD)重组鸡痘病毒(FPV)在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布以及抗体消长规律进行研究。结果表明,FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间,未表现出明显的临床症状和不良反应;病理组织切片检测无明显的组织学变化;PCR、RT-PCR检测证明,豚鼠、猪免疫FMD重组鸡痘病毒后,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脑、肠系膜淋巴结内检测到FPVDNA和FMDV DNA,且在大部分组织能存在3 d左右;FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体,验证了所构建重组FPV的生物安全性及良好的免疫原性,为其他哺乳动物实验提供了必要的基础数据。     

应用单克隆抗体的免疫组织化学法研究雏鸭体内鸭瘟病毒的分布

本实验应用了免疫组织化学的单克隆抗体间接酶标染色法，对人工感染鸭瘟病毒雏鸭的组织切片进行染色观察。旨在研究病毒在鸭体内分布，对其进行定位。研究结果显示，鸭的心脏、肝脏、脾、胸腺、肠、法氏囊、胰、肺、肾等组织的细胞浆内均出现了染色的特异阳性反应物。结果表明，鸭瘟病毒广泛分布于感染雏鸭的各种组织器官，并造成一定的组织病理变化。     

磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及特性鉴定

采用重氮化法合成磺胺二甲嘧啶(SM_2)-人血清白蛋白(HSA)免疫抗原和SM_2~-卵清白蛋白(OVA)包被抗原。经紫外光谱扫描法确认SM_2与载体蛋白偶联成功；经计算SM_2与HSA、OVA的结合比分别为9：1和15：1。利用杂交瘤技术和有限稀释法经过5次亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM_2抗体的杂交瘤细胞,经鉴定该单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgG_1,为入链,分子量为162Ku,染色体数目90条左右,亲和常数为6．1×10~(12)M~(-1)。与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。     

兔病毒性出血症鸡源高免蛋黄抗体的研究与应用

用兔病毒性出血症抗原免疫产蛋鸡,收集高免蛋,精制蛋黄抗体(IgY),采用血凝抑制试验(HI)测定IgY的最高滴度为15 1og2.通过IgY的被动免疫保护试验证实,IgY滴度稀释至13 1og2时肌肉注射体重2.0～2.5kg的健康非免家兔5.0mL/只,可抵抗兔病毒性出血症强毒RC株1.0mL(血凝价HA为9 1og2)的攻击.临床应用效果显示:IgY(HI为13 log2)对发病兔进行紧急防治,治愈率为84.38%～92.86%,能迅速控制疫情.