无乳链球菌LIP蛋白的截短表达及免疫保护性研究

为评价罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)BX2012株脂蛋白(lipoprotein)的免疫原性及其对奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的保护效果,以无乳链球菌脂蛋白基因序列(GenBank序列号:CP000114.1,SAK_0321)的B细胞线性抗原表位区设计特异性引物进行扩增,构建重组表达载体,将截短表达的脂蛋白制备成亚单位疫苗,同时制备灭活疫苗进行免疫比对。结果显示:重组表达载体p ET-32a-LIP342在BL21(DE3)中获得了良好的可溶性表达,分子质量约为30 kDa,纯化使LIP342纯度由41.75%提至87.23%;Western blotting分析显示,LIP342可被兔抗无乳链球菌高免血清特异性识别;LIP342在目前已知不同种属来源或不同血清型的无乳链球菌分离株中同源性为90.35%~100%,在罗非鱼源分离株中同源性为100%;无乳链球菌LIP342蛋白和灭活疫苗均可显著提升奥利亚罗非鱼和大菱鲆血清抗体水平,而LIP342诱导的血清抗体水平均显著高于灭活疫苗;经0.1 mL 1×10~9cfu/mL的无乳链球菌攻毒后,LIP342蛋白和灭活疫苗对供试鱼的累积存活率均显著高于PBS对照组。结果表明,高度保守的LIP342具有较好的免疫原性,可作为无乳链球菌亚单位疫苗候选因子。     

高分辨率熔解曲线分析法检测牦牛脂蛋白脂酶外显子7的多态性及与生长性状相关性分析

脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是一个分子质量为54 kb的糖蛋白,其活性受营养因素、激素水平等调节,因牦牛生存环境的特殊性,试验拟从分子水平研究天峻县牦牛脂蛋白脂酶外显子7(LPL-Exon7)基因的多态性,并与生长发育性状进行关联分析,从而为牦牛营养调控、品种资源保护和遗传育种提供科学理论依据。试验采集青海省海西州天峻县牦牛抗凝血106份,提取血样DNA,并利用PCR技术和高分辨率熔解曲线分析法对候选基因LPL-Exon7进行多态性分析,并于采血的同时对牦牛体重、体斜长、体高、胸围和管围等生长性状指标进行了相关性和遗传效应分析。结果表明,高原牦牛LPL-Exon7基因在高原牦牛和野血牦牛中都表现为多态,存在3种基因型,即AA、AB和BB,由1对等位基因A和B控制,A等位基因均为优势等位基因。经χ²检验,符合哈迪—温伯格(Hardy-Weinberg)定律,处于平衡状态(P>0.05)。该位点在高原牦牛和野血牦牛群体中公、母牦牛的多态信息含量为0.3588和0.2103、0.3219和0.3343,高原牦牛母牛的多态信息含量PIC<0.25,处于低度多态,高原牦牛公牛和野血牦牛公、母牛的多态信息含量均在0.250.05)。因此,初步推断牦牛LPL-Exon7可以作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。     

苜蓿皂苷对大鼠肝脏及肝脏细胞低密度脂蛋白受体、三磷酸腺苷结合盒转运体mRNA表达的影响

本试验旨在研究苜蓿皂苷对大鼠肝脏及大鼠肝脏细胞(BRL细胞)胆固醇清除和转运途径中关键基因低密度脂蛋白受体(LDLR)、三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG5)、三磷酸腺苷结合盒转运体G8(ABCG8)mRNA表达量的影响,从个体和细胞水平初步探讨苜蓿皂苷调控胆固醇清除和转运的分子机制。采用高脂饲粮建立大鼠高脂模型,测定苜蓿皂苷对正常、高脂大鼠血清指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量]和肝脏LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量的影响;采用高糖DMEM培养液建立BRL细胞脂变模型,测定苜蓿皂苷浓度对BRL细胞活性的影响,测定苜蓿皂苷对正常、脂变细胞LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量的影响。结果表明:1)苜蓿皂苷显著降低高脂大鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量(P0.05);2)苜蓿皂苷显著上调正常大鼠肝脏LDLR、ABCG5、ABCG8及高脂大鼠ABCG5、ABCG8 mRNA表达量(P0.05);3)添加200、250μg/m L苜蓿皂苷显著提高了BRL细胞的活性(P0.05);4)苜蓿皂苷显著上调正常BRL细胞LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量(P0.05),而对脂变BRL细胞各基因mRNA表达量无显著影响(P0.05)。结果提示,苜蓿皂苷可通过调控LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA的表达来增加肝细胞内胆固醇的清除和转运,从而降低机体胆固醇的含量。     

中药复方对保育阶段仔猪血清中胆固醇与脂蛋白的影响

[目的]在基础日粮的水平上添加中药复方,纯中药全程饲喂,对保育阶段仔猪血清中胆固醇和脂蛋白含量进行测定,为该中药复方对保育阶段仔猪增强机体抵抗力,降低抗生素在畜牧业的应用,形成质量可靠的“无抗”猪肉提供帮助。[方法]试验选用80头（28±2）日龄、体重相近的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪,随机分为4个处理,每个处理2个重复,每个重复10头仔猪。第1组为对照组,饲喂基础日粮,第2、3、4组在饲喂基础日粮的基础上分别添加1.5%、1.0%和0.5%的中药复方,试验期4周。试验结束第2天上午9：00空腹,前腔静脉采血,进行全血血常规指标测定。[结果]与对照组相比,饲料中添加中药复方组保育仔猪血清中脂蛋白脂肪酶含量均有升高,其中,添加0.5%中药复方组与对照组相比差异显著（P<0.05）;与对照组相比,饲料中添加中药复方组保育仔猪血清中高密度脂蛋白含量均有升高,其含量随中药复方添加量的减少而逐渐降低,各中药复方添加组与对照组相比差异均不显著（P>0.05）;与对照组相比,饲料中添加中药复方组保育仔猪血清中低密度脂蛋白含量均有所下降,其含量随中药复方添加量的减少而逐渐降低,其中,添加0.5%中药复方组与对照组相比差异极显著（P<0.01）;与对照组相比,饲料中添加中药复方组保育仔猪血清中三酰甘油含量均有下降,其含量随中药复方添加量的减少而逐渐降低,各中药复方添加组与对照组相比差异均不显著（P>0.05）。[结论]在基础日粮中添加中药复方组保育仔猪血清中脂蛋白脂肪酶含量、高密度脂蛋白含量均有升高;保育仔猪血清中低密度脂蛋白含量、三酰甘油含量均有降低。     

金黄色葡菌球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响

本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响,为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113（WT SA113）和SA113 lgt：：ermB脂蛋白表达缺失菌株（SA113Δlgt株）体外感染M1型小鼠骨髓源巨噬细胞,分为3组：空白对照组、WT SA113感染组（MOI：3：1）、SA113Δlgt感染组（MOI：3：1）。采用ELISA法检测M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、趋化因子（RANTES）和白细胞介素10（IL-10）的水平,实时荧光定量PCR检测Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）和含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）基因的表达,免疫荧光法检测脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌作用的影响。结果显示,与空白对照组相比,WT SA113感染组和SA113Δlgt感染组均可显著上调M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、RANTES、IL-10分泌量以及WT SA113感染组TLR2、NLRP3基因表达水平（P<0.05）,而TLR4基因表达量显著降低（P<0.05）;与WT SA113感染组相比,SA113Δlgt感染组M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、RANTES、IL-10分泌量以及TLR2（12 h除外）、NLRP3基因表达水平显著降低（P<0.05）。免疫荧光结果显示,M1型巨噬细胞对SA113Δlgt株的吞噬作用显著低于对WT SA113株的吞噬作用（P<0.05）。综上,金黄色葡萄球菌的脂蛋白在M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中主要通过激活TLR2和NLRP3受体,诱导细胞因子TNF-α、IL-1β、RANTES和IL-10的产生和释放。     

肉碱对中华鳖脂肪代谢的影响

选用1 170只211日龄中华鳖进行养殖试验,研究不同剂量(0,50,100 mg/kg)的l-肉碱对中华鳖脂肪代谢的影响. 通过解剖取样测定肝脏、四肢肌肉和脂肪块的脂肪代谢酶活性及肌细胞内脂肪酸β-氧化反应等生化指标,探讨其作用机理. 结果表明,在饲料中添加100 mg/kg l-肉碱显著降低了中华鳖四肢的脂肪沉积量的27.11%(P<0.01),肝脏和脂肪中的苹果酸脱氢酶及脂肪中激素敏感脂酶总活力分别提高了24.32%(P<0.01)、32.22%(P<0.01)和14.88%(P<0.05),肌肉和脂肪中脂蛋白脂酶总活力分别提高了27.08%(P<0.01)和13.18%(P<0.05),肌肉中游离肉碱、总酸不溶肉碱含量分别升高了16.92%(P<0.01)和38.24%(P<0.01).     

Comparison of cholesterol levels among lipoprotein fractions separated by anion-exchange high-performance liquid chromatography in periparturient Holstein–Friesian dairy cows

Changes in lipoprotein profiles occur in dairy cows during the periparturient period and in cows with transition cow disease. Here, the lipoprotein profiles of Holstein–Friesian dairy cows during the periparturient period were obtained by anion-exchange, high-performance liquid chromatography to evaluate the usefulness of lipoprotein profile evaluation during the periparturient period and in cows with fatty liver and milk fever. Lipoprotein levels (including total and high- (HDL-C) and low-density lipoprotein (LDL-C) cholesterol) in 10 healthy cows were low 4 weeks prepartum, with the lowest values at calving or within 1 week of calving; the values increased at 8 weeks postpartum. The lipoprotein levels were measured in 16 cows diagnosed with fatty liver (n=10) or milk fever (n=6) and compared to 10 healthy dairy cows. A significant difference was observed in HDL-C between healthy cows (at calving and 1 week postpartum), and the fatty liver and milk fever cows. Cows with fatty liver and milk fever had a lower mean HDL-C than the 10 healthy dairy cows at calving and 1 week postpartum. HDL-C might be a good indicator of energy balance for differentiating healthy cows from those with transition cow disease.     

利用高密度 Bin 图谱定位水稻叶绿素含量 QTL

【目的】探索水稻叶绿素含量及其对氮肥响应的遗传机理,为氮高效、高光效的水稻品种培育提供新的标记区段。【方法】以珍汕 97× 明恢 63 重组自交系 RIL（F11）113 个家系为 QTL 分析的试验材料,在大田栽培条件下,以施氮量为主区、家系为裂区,设计低氮处理（不施氮肥）和正常氮处理（纯氮130、135 kg/hm2）,分别于水稻移栽后 30 d 测定 1.5 叶的 SPAD 值,于抽穗期测定剑叶的 SPAD 值。利用包含1 619 个 Bin 标记的高密度遗传图谱,使用 IciMapping V3.4 软件和完备区间作图法,定位控制水稻叶片叶绿素含量的 QTL。【结果】在两年、两个氮处理和两个发育时期共检测到 15 个调控叶片叶绿素含量的 QTL,分别分布在第 1、2、3、6、7、10、11 号染色体上。单一 QTL 贡献率为 1.21%~40.74%。通过物理位置比较,发现其中 6个 QTL 已经被克隆或与前人定位到的叶绿素含量相关位点在同一区间。其中,在第 6 染色体的 8.45~9.12 Mb 处定位到 1 个调控抽穗期剑叶叶绿素的位点,命名为 qHDCHL6-1,该位点在两年和两个氮处理下均被检测到,贡献率为 1.55%~28.01%。结合功能注释,共筛选到 4 个与叶绿素代谢密切相关的基因,分别为 LOC_Os06g15370（OsNPF3.1）、LOC_Os06g15420（OsAS2）、LOC_Os06g15620（GAST）和 LOC_Os06g15590,其中前 3 个基因已被鉴定克隆。【结论】共检测到 15 个控制水稻移栽后 30 d 和抽穗期叶片叶绿素含量的 QTL,鉴定了 1 个稳定表达的 QTL 位点 qHDCHL6-1,在该区间筛选到 4 个候选基因。     

Blood appearance, metabolic transformation and plasma transport proteins of 14C-astaxanthin in Atlantic salmon (Salmo salar L.)

The time of appearance in blood, and transport of astaxanthin, and catabolic transformation of astaxanthin to idoxanthin were investigated in Atlantic salmon (Salmo salar) that had been force-fed a single dose of ¹⁴C-astaxanthin. In addition to the LPs, a major protein, associated with radiolabeled astaxanthin was detected. The maximum level of radiolabeled carotenoids in blood was attained 30 h after administration of ¹⁴C-astaxanthin. Radioactive idoxanthin (combined 3,4-cis and 3,4- trans glycolic isomers of idoxanthin) appeared after 6 h and a stable level was obtained after 18 h. LPDP and LP, separated by ultracentrifugation, contained on average 89 and 11% of the total radioactivity in plasma, respectively. During the 168 h experiment, maximum radioactivity in LP appeared after 22 h. Separation of plasma by ultracentrifugation on a discontinuous NaCl/KBr-gradient and an iodixanol-gradient confirmed that most of the radiolabeled carotenoids were present in the HDPF that did not contain LPs (58%), whereas HDL and LDL contained 36 and 6% of the radioactivity, respectively. Of the recovered radioactivity, astaxanthin in the HDPF comprised 82%, idoxanthin 5% and unidentified compounds 12%, whereas HDL contained 78% astaxanthin, 22% idoxanthin and no unidentified compounds. Proteins from the fractions with the high density and high radioactivity (iodixanol-gradient) were separated by PAGE under non-denaturing conditions and showed a radioactive band with parallel migration length to BSA and salmon albumin. These results show that astaxanthin is rapidly converted to idoxanthin and that the majority of astaxanthin in the plasma is associated with a protein other than LPs, presumably albumin. The identity of this protein requires verification.