广西三黄鸡脂蛋白脂酶基因的克隆及蛋白构象分析

【目的】对广西三黄鸡和爱拔益加（AA）鸡的脂蛋白脂酶基因（LPL）进行克隆与蛋白质结构分析,为后期开展LPL基因表达与鸡肌内脂肪含量相关性研究及筛选出与优质肉质相关的分子遗传标记奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的鸡“也基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增广西三黄鸡和AA鸡的LPL基因cDNA序列,经双酶切鉴定和序列测定比对分析后,应用生物软件进行蛋白质二级结构预测分析。【结果】成功获得广西三黄鸡和AA鸡的LPL基因编码区序列（CDs）,大小均为1473bp,两者的同源性为99．4％;将广西三黄鸡LPL基因序列提交至GenBank获得序列号JX090309。相对于AA鸡,广西三黄鸡LPL基因CDs存在9个位点的碱基突变,其中碱基^503T→C导致氨基酸^168Val→Ala,^606T→G导致^202Asp→Glu,^1066A→G导致^366Thr→Ala,^1277C→T导致^426Ser→Phe,^1420A→G导致^474Arp→Gly,^1432G→A导致^202Glu→Lys,这6个位点为错义突变;第166、372和1305位点的碱基突变为同义突变。蛋白质二级结构预测结果表明,广西三黄鸡与AA鸡LPL的C端结构域存在空间构象差异。【结论】LPL基因突变引起的氨基酸组成变化及蛋白质二级构象改变,可能影响鸡肌内脂肪沉积,进而决定肉质的优劣,即LPL基因可作为研究广西三黄鸡肌内脂肪代谢的主要候选基因。     

去势术对雄性中华田园犬脂代谢的影响

[目的] 研究去势术对雄性中华田园犬脂代谢的影响。[方法] 将12只年龄、体重相近的中华田园犬分为非手术组和去势组,对去势组中华田园犬进行去势手术,观察并测定术前第1天、术后第14天、术后第21天血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）含量,以非手术组作为对照,分析去势术对雄性犬脂代谢的影响。[结果] 去势组与非手术组相比,血清中TG含量在第14天到第21天显著上升;血清中TC含量相比非手术组呈下降趋势;HDL第14天和第21天都低于非手术组;LDL都高于非手术组,整体呈上升趋势。[结论] 去势手术会影响雄性中华田园犬机体脂类代谢,会导致去势犬甘油三酯升高,总胆固醇和高密度脂蛋白下降,低密度脂蛋白上升。     

动物脂滴结构及功能研究进展

脂滴是脂肪组织的基本单位,是维持脂质和能量稳态的一种动态细胞器,脂滴相关蛋白参与调控胞内脂类代谢、膜运输以及信号传导等多个生理过程.脂滴在动物各个组织器官中的功能不尽相同,可通过营养及生理手段调节畜禽外周组织中的脂滴变化,进一步影响畜禽胴体性状及肉品质.本文简述了脂滴的生物学结构、脂滴蛋白分类、脂滴重塑、脂滴生物学功能...     

利用高密度 Bin 图谱定位水稻叶绿素含量 QTL

【目的】探索水稻叶绿素含量及其对氮肥响应的遗传机理,为氮高效、高光效的水稻品种培育提供新的标记区段。【方法】以珍汕 97× 明恢 63 重组自交系 RIL（F11）113 个家系为 QTL 分析的试验材料,在大田栽培条件下,以施氮量为主区、家系为裂区,设计低氮处理（不施氮肥）和正常氮处理（纯氮130、135 kg/hm2）,分别于水稻移栽后 30 d 测定 1.5 叶的 SPAD 值,于抽穗期测定剑叶的 SPAD 值。利用包含1 619 个 Bin 标记的高密度遗传图谱,使用 IciMapping V3.4 软件和完备区间作图法,定位控制水稻叶片叶绿素含量的 QTL。【结果】在两年、两个氮处理和两个发育时期共检测到 15 个调控叶片叶绿素含量的 QTL,分别分布在第 1、2、3、6、7、10、11 号染色体上。单一 QTL 贡献率为 1.21%~40.74%。通过物理位置比较,发现其中 6个 QTL 已经被克隆或与前人定位到的叶绿素含量相关位点在同一区间。其中,在第 6 染色体的 8.45~9.12 Mb 处定位到 1 个调控抽穗期剑叶叶绿素的位点,命名为 qHDCHL6-1,该位点在两年和两个氮处理下均被检测到,贡献率为 1.55%~28.01%。结合功能注释,共筛选到 4 个与叶绿素代谢密切相关的基因,分别为 LOC_Os06g15370（OsNPF3.1）、LOC_Os06g15420（OsAS2）、LOC_Os06g15620（GAST）和 LOC_Os06g15590,其中前 3 个基因已被鉴定克隆。【结论】共检测到 15 个控制水稻移栽后 30 d 和抽穗期叶片叶绿素含量的 QTL,鉴定了 1 个稳定表达的 QTL 位点 qHDCHL6-1,在该区间筛选到 4 个候选基因。     

日粮能量和蛋白水平对双向选择血浆极低密度脂蛋白浓度肉鸡腹脂和产肉性能的影响

对７０８只（公母各半）５～９周龄一世代高、低极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）系肉鸡进行３个代谢能水平（１３．４，１２．５，１１．６ＭＪ／ｋｇ）和３个粗蛋白水平（２２．４％，１９．４％，１６．４％）的三因子交叉的遗传－营养互作试验，以探讨肉鸡腹脂及屠体性状的遗传、营养、性别间的互作效应。结果表明：日粮对脂肪沉积的影响存在品系差异，品系与日粮代谢能互作对板油有明显影响（Ｐ＜０．０５）；日粮代谢能和粗蛋白对高ＶＬＤＬ系板油的影响大于低ＶＬＤＬ系，高ＶＬＤＬ系板油随日粮代谢能的升高而升高，而低ＶＬＤＬ系无此规律。品系与日粮代谢能互作对肌胃脂率有明显影响（Ｐ＜０．０５），日粮代谢能对低ＶＬＤＬ系肌胃脂的影响大于高ＶＬＤＬ系，而粗蛋白对高ＶＬＤＬ系肌胃脂的影响大于低ＶＬＤＬ系。品系间肌胃脂的差异在不同日粮代谢能水平下表现不一致。品系与日粮互作对产肉性状未产生明显影响。日粮代谢能与性别间的互作对腿肌率有明显影响（Ｐ＜０．０５），雌性腿肌率随代谢能水平的升高而降低。     

The effect of aqueous extract of gross and commercial yerba mate (Ilex paraguariensis) on intra-abdominal and epididymal fat and glucose levels in male Wistar rats

This study analyzed the plasma lipid profile, glucose levels and fat deposits in male rats treated with aqueous extract of gross yerba mate, commercial yerba mate or water. Yerba mate treatment did not change body weight gain and lipid profile. The consumption of gross yerba mate significantly increased blood glucose (6.6 mmol/L) as compared to the water (4.8 mmol/L) and commercial group (5.2 mmol/L) and decreased epididymal and intra-abdominal deposits (10.1 mg/g and 23.7 mg/g of weight) as compared to the water (15.4 mg/g and 36.9 mg/g of weight) and commercial group (12.5 mg/g and 28 mg/g of weight). The results suggest that gross yerba mate reduces fat more efficiently but produces a greater increase in blood glucose when compared to commercial yerba mate and water groups.     

肉碱对中华鳖脂肪代谢的影响

选用1 170只211日龄中华鳖进行养殖试验,研究不同剂量(0,50,100 mg/kg)的l-肉碱对中华鳖脂肪代谢的影响. 通过解剖取样测定肝脏、四肢肌肉和脂肪块的脂肪代谢酶活性及肌细胞内脂肪酸β-氧化反应等生化指标,探讨其作用机理. 结果表明,在饲料中添加100 mg/kg l-肉碱显著降低了中华鳖四肢的脂肪沉积量的27.11%(P<0.01),肝脏和脂肪中的苹果酸脱氢酶及脂肪中激素敏感脂酶总活力分别提高了24.32%(P<0.01)、32.22%(P<0.01)和14.88%(P<0.05),肌肉和脂肪中脂蛋白脂酶总活力分别提高了27.08%(P<0.01)和13.18%(P<0.05),肌肉中游离肉碱、总酸不溶肉碱含量分别升高了16.92%(P<0.01)和38.24%(P<0.01).     

Development of an Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Seromonitoring Contagious Bovine Pleuropneumonia Using Recombinant Lipoprotein LppQ of Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC as Antigen

Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC （MmmSC） is the etiological agent of contagious bovine pleuropneumonia （CBPP）. The lipoprotein LppQ encoded by lppQ gene is specific to MmmSC and is found in the type strain and in field strains isolated in Europe, Africa, and Australia, as well as in vaccine strains. No serological cross-reactions were observed with the related mycoplasmas of the Mycoplasma mycoides cluster. The N-terminal domain of the mature lipoprotein LppQ is hydrophilic, and it induces a strong, specific, early, and persistent immune response in naturally and experimentally infected animals. Mycoplasma-specific TGA （Trp） codons are utilized as stop codons in most other organisms. The lppQ N-terminal fragment from MmmSC HVRI X strain, the Chinese strain for CF antigen production, was mutated with one-step overlapping extension PCR. Sequence analysis confirmed the successful mutation from A to G in codon 198 in the lppQ gene. The fragment containing the mutation site was subcloned into the pET32a expression vector. The recombinant protein with molecular weight of 42 kDa was purified using the Ni-NTA His.Bind purification kit, with a purity of up to 95%. Western blot indicated that the standard positive serum of CBPP could react with the recombinant protein. The purified protein was diluted to 0.35 μg mL^-1, and coated to microtiter enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） plates. Indirect ELISA reaction conditions were optimized. The value of P/N was determined to be 4.8 （0.934/0.193）, the sensitivity to be 95.8% （46/48）, and the specificity to be 98.9% （161/163）. 3 817 cattle serum samples from three different provinces were detected by the indirect ELISA and CFT. The Kappa value is 0.63, which is middle or high agreement between the two methods.     

鹅LPL基因外显子4、5、6克隆及序列分析

为揭示鹅脂蛋白脂酶(LPL)脂质和肝素结合区域的特性,对鹅LPL基因外显子4~6进行了克隆和序列分析。以皖西白鹅血清总DNA为模板,设计引物对鹅LPL基因的第4~6外显子区域进行扩增和测序,分析鹅与其他物种之间该区域的DNA序列同源性、密码子非随机应用以及相应氨基酸残基区域的亲水性。结果表明,鹅LPL基因外显子4~6的片段大小分别为112、234和243 bp,其序列与鸡LPL基因相应序列的同源性达到91.9%,与人、羊、牛、猪等哺乳动物的同源性为74%~77%;鹅与鸡密码子非随机应用的相似系数为0.839,与猪和鼠的相似系数为0.580~0.650;LPL中由外显子4~6编码的氨基酸残基有4个区域具有较大的表面概率,分别位于残基145~148、残基187~190、残基255~257和残基293~299区域,表面概率分别1.62~4.29、2.06~3.01、2.75~4.46和3.03~6.01,这些区域伴随有较强的亲水性。     

血浆极低密度脂蛋白浓度的双向选择对肉鸡腹脂、肝脂和产肉性能的影响

对零世代８周龄血浆极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）浓度进行降低腹脂的间接选择，一世代取得了明显效果：腹脂和肝脂向两极分化，其中肌胃脂和肝脂选择反应较大。低血浆ＶＬＤＬ的选择使腹脂降低，肝脂增加，对产肉性状未产生不利影响。９周龄腹脂率、板油率和肌胃脂率在高ＶＬＤＬ系分别高于低ＶＬＤＬ系２１％，１６％和５１％；肌胃脂率品系间差异极显著（Ｐ＜０．００１）。品系与性别互作对肌胃脂率有明显影响（Ｐ＜０．０５）。腹脂、肌胃脂存在性别差异，腹脂率雌性略高于雄性，而肌胃脂率雄性高于雌性。９周龄肝脂率，高ＶＬＤＬ系显著低于低ＶＬＤＬ系（Ｐ＜０．０１），雌性高于雄性。一世代８周龄血浆ＶＬＤＬ产生了直接选择反应，血浆ＶＬＤＬ浓度，高ＶＬＤＬ系高于低ＶＬＤＬ系。血浆ＶＬＤＬ存在性别差异，雄性高于雌性。一世代高、低ＶＬＤＬ系血浆ＶＬＤＬ和腹脂的变异系数仍然很大，继续对其选择仍然有效。由于血浆ＶＬＤＬ属中等遗传力，并且家系间差异显著，因此，在世代选育中应采取家系结合个体选择法