一种测定龙眼果柄离层纤维素酶活性的方法

介绍一种测定离层纤维素酶活性的新方法—凝胶扩散-组织印迹法.给出了该测定方法的基本原理、流程、步骤及计算方法,并以此方法测定了龙眼果实脱落过程中果柄离层纤维素酶活性的变化.结果表明该方法需要材料少,灵敏度高,纤维素酶活性最低可检出2×10-6U.     

海滨木槿叶片蛋白质双向电泳体系的建立

为建立一套适合海滨木槿叶片蛋白质组学分析的双向电泳体系,以海滨木槿无性系叶片为材料,分别采用裂解液法、三氯乙酸一丙酮沉淀法、改良酚抽法分离纯化蛋白质,选用24empH3—10的IPG胶条,并对不同上样量、等电聚焦程序、平衡时间等电泳条件进行优化。结果表明：采用改良酚抽法提取蛋白质,上样量为每IPG胶条1000μg,总聚焦功率90kV·h,平衡时间15min,胶体考马斯亮蓝染色,可得到蛋白质点数目多、分辨率高的双向电泳图谱。重复性试验结果显示,该体系具有很好的稳定性及可重复性,可满足海滨木槿蛋白质组学研究的要求。     

溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的影响

【目的】研究溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的影响,为溶葡萄球菌素的食用安全性评估提供参考。【方法】将24只7周龄ICR小鼠随机分为3个试验组和对照组,3个试验组分别提供溶葡萄球菌素含量为1 μg/mL（低剂量）、5 μg/mL（中剂量）和15 μg/mL（高剂量）的饮水10 mL/(只·d),于饮用第0(饮用前),1,3,7,14,21天以及停饮第3,7,14天采集小鼠新鲜粪便样品,采用PCRDGGE技术检测小鼠肠道菌群结构变化。【结果】DGGE图谱显示,各组小鼠试验前后不同时间肠道内的优势菌种相似;经UPGMA聚类分析,与对照组相比,低、中剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构影响较小,高剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构影响较大;差异性分析结果显示,试验组饮用各阶段带谱与试验前的相似性与对照组相应阶段的相似性差异均不显著（P＞0.05）,溶葡萄球菌素低、中和高剂量组在停饮后第7天带谱与饮用前的相似性分别达到了70.8%,66.9%和63.8%;对图谱中主要条带进行测序和比对分析,结果表明,高剂量溶葡萄球菌素对小鼠肠道中Lactobacillus taiwanensis和1株不可培养细菌有促进作用。【结论】溶葡萄球菌素对小鼠肠道菌群结构的改变具有浓度依赖性,且停饮后小鼠肠道菌群结构有一定程度的恢复。     

水稻胚乳双向电泳技术体系的优化分析

为比较同一杂交组合不同直链淀粉含量后代在灌浆期胚乳内蛋白表达差异,文章建立了一套适合灌浆期水稻胚乳蛋白的双向电泳技术,探讨了胚乳蛋白的提取、等电聚焦上样量的选择、胶条转移等双向电泳的一些关键技术。结果表明,一次溶解蛋白样品,TCA-丙酮法优于酚法蛋白提取,300μg上样量为最适上样量,能得到清晰、分离效果好、蛋白点数较多的图像。     

玉米赤霉烯酮对猪睾丸间质细胞DNA损伤作用的彗星试验

[目的]观察玉米赤霉烯酮(ZEN)对猪睾丸间质细胞(Leydig cell)的DNA损伤效应。[方法]以体外培养的猪Leydig cell为材料,用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定ZEN对离体培养的猪睾丸间质细胞的半数致死浓度,选用0(对照组)、1、5、10和20μmol/L浓度的ZEN体外作用于猪Leydig cell,通过彗星试验观察了ZEN对猪Leydig cell DNA的损伤效应。[结果]ZEN浓度为0、1、5、10和20μmol/L时,所造成的细胞拖尾率分别为16.67%、34.00%、40.67%、52.00%和64.67%,各染毒组细胞拖尾率与对照组比较,差异均有极显著统计学意义(P<0.01),且存在明显的剂量-效应关系;各剂量组对应的拖尾细胞尾长(Tail length)分别为57.60±4.78、57.75±6.25、78.97±5.83、100.50±6.94和146.83±12.31μm,尾部DNA含量(Tail DNA%)分别为21.29±2.25%、22.24±2.43%、31.21±6.27%、37.45±4.33%和60.68±9.83%,与对照组比较,5μmol/L及以上ZEN浓度染毒组的Tail length和Tail DNA%均有显著性差异(P<0.05),且随ZEN浓度增加呈上升趋势。[结论]ZEN对猪Leydig cell存在遗传毒性,可以损伤Leydig cell的DNA,且有明显的剂量-效应关系。     

单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性

[目的]应用单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性。[方法]试验分为5组:阳性对照组(环磷酰胺组)、阴性对照组(生理盐水组)、毛鸡骨草高(30 g/kg)、中(20 g/kg)、低(10 g/kg)剂量组,利用单细胞凝胶电泳技术分析小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的尾部DNA率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment),以观察毛鸡骨草对小鼠DNA的影响。[结果]毛鸡骨草各剂量组对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的Tail DNA%和Tail Moment影响明显低于阳性对照组,差异极显著(P0.01);毛鸡骨草高剂量组肝细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组相比明显降低,差异极显著(P0.01);其他各剂量组小鼠细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组比,无明显差异(P0.05)。[结论]毛鸡骨草在试验剂量范围内对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞DNA无损伤。     

Polyacrylamide gel electrophoresis of S-RNase fragments for identification of S-genotypes of Japanese pear (Pyrus pyrifolia)

Japanese pear (Pyrus pyrifolia) exhibits gametophytic self-incompatibility (GSI) controlled by a complex and multiallelic S locus. The pistil-part product of the S locus is the polymorphic ribonuclease, S-RNase. Information on S-genotypes is important for the production and breeding of Japanese pears. Molecular analyses of S-genotypes of Japanese pear have been conducted with the CAPS (cleaved amplified polymorphic sequence) system; PCR amplification of S-RNase fragments by a common primer pair followed by digestion with restriction enzymes each of which cleaves a specific S haplotype. Here, we show that the separation of S-RNase fragments by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) distinguishes four out of nine S haplotypes of Japanese pear without restriction digestion. S³-, S⁵-, S⁶- and S⁸-RNases were identified as distinct bands by PAGE. S³- and S⁵-RNases were separated by PAGE despite their identical fragment sizes. Using this system, three Japanese pear lines with unknown S-genotypes were analyzed. The newly determined S-genotypes of the lines were confirmed by CAPS analysis.     

柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析

以柞蚕5龄幼虫为材料添食柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi,Np),通过测定与分析不同性别5龄幼虫血淋巴蛋白质含量和组成变化的差异,为探究柞蚕对柞蚕微孢子虫感染的免疫应答提供依据。感染柞蚕微孢子虫的不同性别柞蚕5龄幼虫的血淋巴蛋白质含量随蚕体发育进程出现不同的变化:雌性个体与雄性个体分别在添食Np后24 h与48 h,血淋巴蛋白质含量极显著增加(P<0.01),且持续至添食后96 h,其中雌性个体的血淋巴蛋白质含量又极显著高于雄性个体(P<0.01);在添食Np后120 h,雌、雄个体的血淋巴蛋白质含量与对照组无显著性差异(P>0.05)。SDS-PAGE分析表明,添食Np后的柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质组成与对照组基本一致,均显示出20条分子质量在20.1～97.2 kD的蛋白条带,其中雌、雄个体在添食后96 h,大小约44 kD的蛋白条带明显加深,大小约28 kD的蛋白条带雌性个体在添食后144 h、雄性个体在添食后120 h明显加深,且雄性个体在添食后120～168 h大小约42 kD的蛋白条带明显加深,但在添食后192 h与对照组无明显差异。研究结果说明Np侵染后,柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质的含量及组成均产生了一定的变化,并且雌雄个体间的变化存在差异。     

从香菇中提取抗癌活性成分——香菇多糖

采用水醇法从香菇中提取多糖成分经凝胶柱层析和水解产物纸层析,初步鉴定提取为葡聚糖组成。     

蛋清粉凝胶性与凝胶稳定性的研究

研究蛋清粉在贮藏期间所成凝胶的质构、持水性以及微观结构的变化。结果显示,蛋清粉的凝胶硬度、弹性、粘结性、持水性分别为346g/cm2、0.905、0.382、52.00%,25℃下贮藏180d后,蛋清粉的凝胶硬度与粘结性较贮藏初期并无显著性变化(P>0.05),而凝胶弹性与持水性与贮藏初期相比差异性显著(P<0.05)。蛋清粉的溶解性随贮藏时间的延长呈下降趋势,但降幅很小,25℃下贮藏180d时与贮藏初期相比无显著性差异(P=0.154)。500倍扫描电镜(SEM)下观察蛋清粉所成凝胶,其结构空隙很大,分布疏松,随贮藏时间的延长无明显变化。研究结果表明,贮藏时间与温度对蛋清粉的溶解性影响很小,而对蛋清粉的凝胶性影响较大,含水量是影响蛋清粉凝胶稳定性的重要因素。